Abstract
Gözlemlemek ve çam nematod, orijinli olanlar çiftleşme davranışı ölçülmesi için bir yöntem olup, bir stereo mikroskop altında kurulmuştur. B. xylophilus'un çiftleşme verimliliğini artırmak ve çiftleşme gözlem şansını artırmak için, bakire yetişkinler kültür ve soruşturma için kullanılır. Yumurta suda nematod tutmak ve dişiler 10 dakika boyunca yumurtalarını bırakmak için izin vererek elde edilmiştir. Ikinci aşama yavru (J2) karanlıkta 25 ° C'de 24 saat boyunca inkübe edilerek yumurta senkronize edildi ve erken J4 bir 52 saat daha, gri küfe, Botrytis cinerea ile J2 kültürlenmesiyle elde edilmiştir. Bu sefer noktada, çoğu J4 nematod genital morfolojisi kullanarak erkek ya da kadın olarak açıkça ayırt olabilir. erkek ve dişi J4 toplandı ve bakir yetişkin nematod için 24 saat boyunca, iki farklı Petri kapları ayrı ayrı kültürlenmiştir. Bir bakire erkek ve bakire kadın wat bir damla eşleştirilmişiçbükey sürgünün oyuk er. çiftleşme davranışı bir stereo mikroskop altında bir video kaydedici ile çekildi. çiftleşme sürecinin tüm dönem 82.8 ± 3.91 dakika (ortalama ± SH) ve 4 farklı aşamalarında bölünmüş olabilir: arama, temas çiftleşen ve kalıcı. süresi ortalama dakika sırasıyla 21.8 ± 2.0, ± 1.9 28.0, 25.8 ± 0.7 ve 7.2 ± 0.5 idi. Onbir alt davranışlar tarif edildi: seyir yaklaşıyor, karşılaşmadan, boğmaca, dokunmadan, yerini, bağlama, ejaculating, sessizliğini ayıran ve dolaşım. bir kadın 3 erkek veya 3 kadın ile bir erkek ile gruplandırılmış zaman İlginçtir, bariz içi cinsel rekabet gözlendi. Bu protokol, B. xylophilus'un çiftleşme davranışı araştırırken, aynı zamanda diğer nematodların etiyolojik çalışmalar için bir referans olarak hareket sadece, kullanışlı ve değerlidir.
Protocol
Virgin Yetişkin Nematodlar 1. kazanılması
- Pinewood nematod izolatı ve kültür koşulları
B. xylophilus'un Nxy61 aslen Çin'de Zhejiang eyaletinin Ningbo alanında hastalıklı Pinus massoniana elde edildi izole: NOT.- (PDA Malzemelerin Tablo bakınız) Patates Dekstroz Agar hazırlayın Botrytis cinerea yetiştirmek için plakaları.
- Aşılaması için, B. cinerea mat 10 mm çaplı mantar mat bir parça zımba ve yeni bir PDA plakanın ortasına koydu. Kültür karanlıkta 25 ° C'de 5 gün boyunca B. cinerea.
- Kültür karanlıkta 25 ° C 'de B. cinerea içeren hazırlanmış bir petri çam nematodları.
- B. xylophilus'un yumurta kazanılması
- bir huni altında kenetlenmiş kauçuk tüp yerleştirin ve montajı rafa hazırlanan huni tutunBaermann huni cihazı. huni ağzına filtre kağıdı yerine gazlı bez iki kat yerleştirin.
- huni kurulum mantar kültürleri aktarın ve mantar mat batırılır kadar su ekleyin. 2 saat bekleyin ve nematod, mantar kültürü çıkıp filtre kağıdı çapraz ve Baermann huninin en alt kısmında yerleşmek olacaktır.
- 15 ml tüp içine tüpün tabanından su damlaları ilk çift toplamak ve yavaş tüp kelepçe bırakarak nematodları toplar.
- Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca 3000 x g'de yukarıda koleksiyonları santrifüjleyin.
- Bir pipet ile suyun üst tabaka uzaklaştırılır ve çift damıtılmış steril (dd), 1 mL H2O ile yeniden süspanse
- Bir pipet ile, yeni bir cam Petri kabı (6 cm çapında) Yukarıdaki tabanda aktarın. Nematod özgürce yüzmek mümkün olduğundan emin olmak için Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin.
- glas nematod tutunKaranlıkta 25 ° C 'de 10 dakika süre ile Petri kabı s. Yumurta hamile kadın tarafından döşenecek. Çünkü onların glikoprotein yüzeyinin, yumurta cam Petri kabı altına sopa olacak.
- Yumurta bozmadan dikkatlice su ve solucanları temizler. Kurumasını yumurta önlemek için hemen cam Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin.
- Adımı tekrarlayın 1.2.8 3x tüm larvaları ve yetişkin kaldırmak ve saf yumurta elde etmek. Petri kabı steril dd, H2O ilave 2 mL (toplam 5 mL) ilave edilir.
- Dördüncü aşama gençlerin kazanılması (J4 larva)
- Hatch 25 ° C'de karanlıkta, 24 saat boyunca toplanan yumurtalar J2 larva elde edildi.
- 2 dakika boyunca 3000 x g'de 15 ml tüp, santrifüj bir pipet ile J2 larvaları transferi ve suyun üst tabakayı kaldırmak.
- Steril dd, H2O 200 uL J2 larvaları yeniden süspanse ve aktarmakB. cinerea içeren PDA plakası.
- Kültür karanlıkta 25 ° C 'de 52 saat boyunca J2 larva. Bu zaman noktasında, en J2 larva J4 larvaların erken aşamada haline olacaktır.
- Bakire yetişkin nematod kazanılması
- bir alkol brülör üzerine ısıtıldıktan sonra bir cam kılcal çizerek nematod toplamak için bir iğne hazırlayın.
NOT: Bu kılcal iğne ucu, genellikle tek bir nematodu alınması için bir araç olarak kullanılabilir ve böylece, çapı 50 mikron, yetişkin bir nematod kabaca gövde genişliği olmalıdır. - Bir Baermann hunisi monte ve adımları 1.2.1'de tarif edildiği gibi 2 saat boyunca mantar kültürlerinden nematod çıkarmak - 1.2.3.
- Temiz bir Petri kabı içine su ile J4 aktarın.
- Bir stereomikroskop altında nematod gözlemlemek ve Mamiya ve Kiyohara 8 (Şekil 1 tarafından açıklandığı gibi, genital morfoloji kadınlar ve erkekler arasında ayrım NOT: erkeklerden daha fazla kadın 60 kadın yüzdesi ile vardır -% 70. kadın vulva erkek spicule Açıkçası farklıdır. yetişkin ile karşılaştırıldığında, erken evre J4 içinde spicule veya vulva küçük, ama yine de kolayca görülebilir ve ayırt edilebilir. nematod her zaman, bazen kadın ve erkeklerin ayırt zorluk artar, su, hareket ediyor.
- Kültür karanlıkta 25 ° C 'de 24 saat daha J4 larva.
NOT: Tüm nematod yetişkinler haline, ama onlar unmated olduğundan, bunlar bakire yetişkin olarak kabul edilmektedir. - Baermann hunileri iki birleştirin ve adımları 1.2.1 açıklandığı gibi, 2 saat boyunca mantar kültürlerden bakire yetişkin ayıklamak - 1.2.3 ve iki ayrı, temiz Petri kapları içine bakire yetişkin erkek ve kadın aktarın.
2. Gözlem ve çiftleşme Davranış Video Kayıt
- Birkaç içbükey slaytlar hazırlamak ve onların kuyuların her steril dd H2O 200 mcL ekleyin.
- Bir kılcal iğne ile hazırlanan bakire yetişkin erkek veya kadın ve Pick up ve her içbükey slayt suya sadece bir nematod koydu.
- onlara yeni sulu ortama uyum sağlamak için 1 saat boyunca hazne içinde bakire yetişkin tutun.
- Bir pipet kullanarak başka iyi birinden bunlardan biri aktararak bakire erkek ve dişi çifti.
- Bir stereomikroskop altında içbükey slayt 1♀ + 1♂ kombinasyonunun çiftleşme davranışları gözlemlemek.
- bakire yetişkinlerin çiftleşme etkinliğini analiz etmek, onların çiftleşme başarı oranını (R) hesaplar ve rastgele seçilen yetişkin çifti ile karşılaştırın. birleşme çalışılan çoğaltır sayısına kıyasla görülmüştür ki çoğaltır yüzdesi olarak R hesaplayın.
- kalitatif ve kantitatif analiz için veri toplamak amacıyla, Video mikroskopi kullanılarak çiftleşme davranışı filme. Normal olarak, birleşme sonrası birbirinden ayrıldığı zaman nematod an içbükey sürgünün çukuruna yerleştirilir zaman bütün birleşme işlemi, 2 saat içinde tamamlandı. Bu nedenle, bir tekrar en az 2 saat boyunca sürekli olarak birleşme işlemi kaydedilir. en az 30 Komple her kombinasyon için toplam çoğaltır.
Not: kayıt işlemi sırasında buharlaşma için oyuğuna daha steril GG S, her 0.5 H2O (genellikle 50 uL) eklenir.
3. Veri Toplama
- Bir bilgisayar ekranında dikkatlice videoları görüntülemek ve niteliksel alt davranışları karakterize.
- çiftleşme kullanarak th süresini ölçmekvideo kaydedici, e kare-kare fonksiyonu. El ile bitiş noktası başlayarak zaman çıkarın.
- 1♀ + 1♂ kombinasyonu için, her video kaydını analiz etmek ve aşağıdaki olaylardan süresini ölçmek:
- Arama süresini ölçmek (yani, kadın ve erkek karşılaştıkları an içbükey slayt kuyuya tanıtıldı ve birbirine temas edildiğinde geçen süre).
- Temas süresini ölçmek (yani, erkek tam ilk çiftleşme için dişinin vulva konumlandırılmış an ilk temas süresi).
- Copulating süresini ölçmek (yani, o boşalma sonra yerde kadın vücudundan kayarak kadar erkek tam dişinin vulva konumlandırılmış tarihten itibaren zaman). Not: Bazı nematod 2 saat içinde birkaç kez copulate edebilirsiniz. Bu gibi durumlarda, LAS sonunda ilk çiftlerin çiftleşme süresinin ölçülmesiarasındaki zaman dahil olmak üzere, t, bir,.
- Kalan süresinin ölçülmesi (yani, birleşme sonrası dönem erkek ve dişi yüzmek birbirinden uzağa daha fazla nematodlar vücut uzunluğundan daha bir mesafe ile ayrılır kadar (genellikle, 1 mm)).
- Çiftleşme frekansı ve her birleşme süresi ve farklı kombinasyonlarının her biri için 2 saat tüm çiftleştirerek ortalama süreyi saymak (yani, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ ve 1♀ + 3♂).
- derhal ve hiç ara vermeden yapılan ilk temas, sonra çiftleşme başarı oranı gibi farklı kombinasyonlar için ilk temas (P) çiftleşme başarı oranını hesaplayın. temas aşamasında, çeşitli temas gerçek birleşme öncesi gözlenen olabilir.
- iki kişi arasındaki mesafe vücut uzunluğundan daha fazla olduğu zaman, bitecek bir kişiyi düşünün. bir tekrarında, kayıt P 100% olarak çiftleşme is ara vermeden, ilk temastan hemen sonra görülen veya 0.00% no çiftleşme gözlendi ya da eğer çiftleşme ancak iki ya da daha fazla temas sonra varsa.
NOT: Burada anlatılan her kombinasyon için 30 suret vardı.
- iki kişi arasındaki mesafe vücut uzunluğundan daha fazla olduğu zaman, bitecek bir kişiyi düşünün. bir tekrarında, kayıt P 100% olarak çiftleşme is ara vermeden, ilk temastan hemen sonra görülen veya 0.00% no çiftleşme gözlendi ya da eğer çiftleşme ancak iki ya da daha fazla temas sonra varsa.
- bir alkol brülör üzerine ısıtıldıktan sonra bir cam kılcal çizerek nematod toplamak için bir iğne hazırlayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bakire yetişkinlerin çiftleşme başarı oranı (R) rastgele seçilmiş yetişkinlerin önemli ölçüde daha yüksek olduğu, ortalama 86,67% oldu: 13.33 ± 4.65% (F = 1301,71, df = 1, p = 0.0001) (Şekil 2). Bu bulgu B. xylophilus'un rastgele seçilen yetişkinlere göre daha bakir yetişkinlerle çiftleşme davranışlarını gözlemlemek için daha kolay olduğunu göstermektedir.
bir erkek bir kadın ile eşleştirilmiş zaman, tüm çiftleşme sürecinin ortalama 82.8 dakika sürdü. Tüm süreç dört farklı aşamadan tarafından tarif edilebilir: arama temas, çiftleşen ve kalıcı. Bu dört aşamadan için süre 21.8 ± 2.0 dk, 28.0 ± 1.9 dk, 25.8 ± 0.7 dk ve 7.2 ± 0.5 dk, sırasıyla (Şekil 3). son yayında, biz encounteri, seyir yaklaşan olarak 11 alt davranışları tarifng, dokunma, boğmaca, bağlama ejaculating, ayırma, sessizliğini ve 9 dolaşım, yerini.
bir erkek aynı anda iki ya da daha fazla kadın bir araya geldiğinde, erkek herhangi bir seçim yapmadan, bunlardan biri ile rastgele çiftleşme gibiydi. Bununla birlikte, açık bir birleşme seçimi kadın B. xylophilus gözlenmiştir. Bir kadın bir erkek temas olduğunda, kadın başını hafifçe erkeğin baş, gövde, kuyruk ve genital bölgeyi dokunmak eğilimi ve onun potansiyel bir ortak değerlendirerek ortaya çıktı. kadın erkek kabul olmadıysa, kadın çabucak onu terk ve bir sonraki değerlendirme için başka bir erkek yüzdü. Erkeklerin biri daha sonra çiftleşme için dişi tarafından seçildi. İlk temas (P) sonra başarı oranlarını çiftleşme 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ ve 1♀ + 3♂ kombinasyonları sırasıyla 46.7 ± 9.3%, 80.0 ± 7.4 ve% 23.4 ± 7.4% idi, ve aralarındaki farklar were anlamlı (F = 8.21, df = 2, p = 0.0124) (Şekil 4).
Intrasexual rekabet erkeklerde hem kadınlarda hem de gözlenmiştir. bir bakire kadın 3 bakire erkek ile karıştırıldığında, erkekler yaklaşım ve onunla çiftleşme şansı elde etmek mümkün olduğunca kadın kurmaya çalıştı. vulva bir erkek tarafından işgal edildiğinde, diğer erkeklerin şiddet vücut hali ile ya da onları ayırmak için sürükleyerek çiftleşme erkek rahatsız etmeye çalıştı. Kadın intrasexual rekabet erkek intrasexual rekabete daha fazla veya daha az benzer olduğu görüldü.
Çiftleşme başarısı ağırlıklı olarak kadın bağlıydı. Bir kadın bir erkek kabul ettiğinde, erkek daha yavaş hareket ve kıvrık ya da hatta bir çember oluşturdu ve dişi daha kolay erkek onu vulva bulmak ve diğer erkeklerden girişimi engellemek için yapmak aktif ilerledi. Bir kadın bir erkek kabul etmedi ise,kadın erkek monte olsa bile, onu sıyrılmaya çalıştı ve onun vulva kendini konumlandırılmış. Çünkü intrasexual rekabet, çiftleşme 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ frekansları ve 1♀ + 3♂ kombinasyonları sırasıyla 1.43 ± 0.091, 1.17 ± 0.074 ve 1.83 ± 0.074 idi ve aralarındaki farklılıklar vardı önemli (F = 14.50, df = 2, p = 0.0001) (Şekil 5).
Bizim araştırmamızda, çiftleşme süresi 20 sn minimum 42 dakika, maksimum ölçüde değişmiştir. 10 dakika daha uzun bir süre devam eden en az 5 dakika süren kısa süreli çiftleştirerek, ve uzun süreli çiftleştirerek: eden verilere göre, birleşme süresi tabii ki iki gruba ayrılır edilebilir. Bariz farklılıklar, kısa süreli çiftleşme (F = 3.81 ortalama süresi farklı gruplar arasında df = 2, p gözlendi (F = 179,52, df = 2, p = 0.0001), ve çiftleştirerek (F = 2.93, df = 2, p = 0,0367) (Şekil 6).
Şekil 1: Erkek ve Kadın B. xylophilus'un ve genital. (A) erkek (mavi ok) spicule. (B) dişi (kırmızı ok) vulva. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2: Virgin Yetişkin Couples Çiftleşme Başarı Oranı ve B. xylophilus'un arasında rastgele seçilen Yetişkin Çiftler. hesaplanan ortalama değerler 30 çoğaltır vardır. dikey çubuk gösterisistandart hata s. Tukey testi ile karşılaştırıldığında farklı küçük harf P <0.05 anlamlı farklılıklar göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3: B. xylophilus'un ve Çiftleşme Sürecinde 4 Aşama süresi. hesaplanan ortalama değerler 30 çoğaltır vardır. dikey çubuk standart hata gösterir. Tukey testi ile karşılaştırıldığında farklı küçük harf P <0.05 anlamlı farklılıklar göstermektedir. çiftleşme fazının ortalama süresi tüm çiftleşme sürecinin 31.17% ve 25.80 ± 0.71 dk vardır. Bu incir büyük halini görmek için buraya tıklayınızure.
Şekil 4: B. xylophilus'un İlk İletişime Çiftleşme Başarı. hesaplanan ortalama değerler ± SE 30 çoğaltır vardır. Tukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile karşılaştırıldığında, her sütunda aynı küçük harfle anlamına P <0.05 anlamlı farklı değildir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5: B. xylophilus'un Farklı Gruplarda Çiftleşme Frekansı. hesaplanan ortalama değerler ± SE 30 çoğaltır vardır. P <0.05 abone değil önemli ölçüde farklıdır aynı küçük harfle anlamıTukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile ared. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 6: B. xylophilus'un ve Çiftleşme süresi. Tukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile karşılaştırıldığında her sütun kümesi içinde aynı küçük harfle anlamına P <0.05 anlamlı farklı değildir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Davranış testleri, kimyasal ekoloji, nörobiyoloji, moleküler biyoloji ve genetik bir temel yönü vardır. Nematodlar, ve özellikle de C. elegans, yoğun bu alanda araştırmalar için kullanılmaktadır. C. elegans 'çiftleşme davranışı, daha önce 10-11 araştırılmıştır. Bununla birlikte, B xylophilus'un gonochoristic ve hermafrodit C. elegans farklıdır, ve birleşme işlemi farklı davranış özellikleri 9 sahiptir. Son zamanlarda, Bursaphelenchus okinawaensis, B. xylophilus'un bir Hermaphroditic kardeş türlerin çiftleşme davranışı 12 bildirilmiştir. Farklı deneysel yöntemler kullanılmıştır rağmen, bu hermafrodit türlerin, B. xylophilus'un benzer seks cazibe gösterdi ve aralarında türler arası Görülecek gözlenmiştir. Bu Hermaphroditic kardeş tür Bursaphelenchus biyolojisi üzerine daha fazla araştırma yapmak için bir model olarak kullanılmış olabilir.
Bu protokol gözlemlemek ve B. xylophilus'un çiftleşme sırasında davranışsal özelliklerinin araştırılması için nasıl bir kılavuz sağlar. Bulgularımız bakire yetişkin nematod kullanarak başarıyla çiftleşme sürecinin (Şekil 1) gözlemleme şansı artırmak için kritik olduğunu göstermiştir. J4 larva elde edilmesi ve tam onların cinsiyetleri ayırt bakire yetişkinler edinimi için iki önemli temel adımlardır. Deneysel koşullar altında (yani, karanlıkta, 25 ° C'de), 52 saat süre J2 larva J4 elde etmek için uygun bir zaman olduğu altında. Ancak, erken J4 aşamasında seks ayırt çoğunlukla kişisel deneyim bağlıdır. farklı insanlar seks tahsisi iki kez kontrol etmek için doğruluğunu sağlamak için, gereklidir.
Çiftleşme sürecinin B. xylophilus'un sırasında davranışsal özellikler dört sürelerini farklı kaydederek kalitatif tarif ve kantitatif analiz edilebilirent fazlar, ilk temas, çiftleşme sıklığı ve farklı kombinasyonlar çiftleşme süreden sonra çiftleşme başarısı yüzdesi. İlginçtir, ilk defa, biz kadın ve erkeklerde ve kadınlarda hem de güçlü içi cinsel rekabetin çiftleşme seçim gözlendi. Hiçbir karışıklık gözlendi; Ancak, bu bizim araştırmada kullanılan nematod sınırlı sayıda nedeniyle olabilir. Bu protokol, tek B. xylophilus'un çiftleşme davranışı incelemek için kullanılamaz, fakat aynı zamanda, diğer nematodlar için bir referans olarak yararlı ve değerli olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Najie Zhu ve Liqun Bai, bu çalışmaya eşit katkıda bulundu. Bu eser mali Kamu Refah Orman Bilimsel Araştırma Fonu Özel (201204501) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31170604, 31270688 ve 31570638) tarafından desteklenmiştir. Biz İngilizce yazılı onların yararlı öneriler Dr. Holighaus Gerrit ve Dr Danielle Hickford teşekkür ederim.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| B. xylophilus isolate Nxy61 | Extracted from Pinus massoniana in Ningbo area of China | ||
| Grey mold strain | Obtained from Forestry Academy of China | ||
| Baermann funnels | Sengong | ||
| falcon tubes | Sengong | ||
| centrifuge | Sengong | ||
| pipette | Sengong | ||
| sterile dd H2O | Sterilized by high pressure of steam at 121 °C for 30 min. | ||
| Petri dishes | Sengong | ||
| PDA medium | Huankai Bio. | 021050 | |
| incubator | Sengong | ||
| Laminar flow | Sengong | ||
| glass capillary | Sengong | ||
| Stereoscope | Leica | LED5000 RL | |
| inverted stereo microscope | Zeiss | A1 | |
| concave slides | Sengong |
References
- Tokushige, Y., Kiyohara, T. Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees. J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).
- Sun, Y. C. Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing. J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47 (1982).
- Mota, M. M., et al. First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe. Nematology. 1, 727-734 (1999).
- Robertson, L., et al. Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner & Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain. Nematology. 13, 755-757 (2011).
- Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. Pine wilt disease: a threat to European forestry. Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).
- Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions. Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).
- Mamiya, Y., Furukawa, M. Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus. Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).
- Mamiya, Y., Kiyohara, T. Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees. Nematologica. 18, 120-124 (1972).
- Liu, B. J., et al. Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process. Nematology. 16, 895-902 (2014).
- Simon, J. M., Sternberg, P. W. Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).
- Barr, M. M., Garcia, L. R.
- Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus. J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).
