Summary
Reproducable מודלים ניסיוניים נדרשים לבדיקה של חסימת כלי דם הרומן חומרים, אשר תוכננו כדי לטפל endovascular סגר של מפרצות תוך-גולגולתי (IA). מטרות המחקר הנוכחי לפתח טכניקה כירורגית מתוקננת ובטוחה עבור סטנט בסיוע לסתימת מפרצת של מפרצות saccular במודל חיה של חולדה.
Abstract
Progess יציב ב armamentarium של טכניקות זמינים endovascular טיפול תוך גולגולתי מפרצות דורש ובמחיר reproducable בעלי חיים ניסיוניות לבחון לסתימת הרומן חומרים כגון סטנטים ואת זרימת diverters. מטרת הפרויקט הנוכחי היה עיצוב בטוח, מהיר, וסייע טכניקה כירורגית מתוקנן עבור סטנט לסתימת מפרצת של מפרצות saccular במודל חיה של עכברוש.
מפרצות saccular שנוצרו על שתל עורקי של העורקים. מפרצות הושתלו מתחת ללשון דרך הקצה לצד השקה אל מתחת לכליות העורק הראשי של syngenic זכר Wistar חולדה שקילה > 500 גרם. בעקבות ההשקה מפרצת, לסתימת מפרצת בוצעה באמצעות בלון להרחבה מגנזיום סטנטים (2.5 מ"מ x 6 מ"מ). מערכת סטנט היה רטרוגרדית הציג מ העורק נמוכה יותר בטכניקה שונה Seldinger.
בעקבות סדרה פיילוט של בעלי חיים 6, סך של חולדות 67 היו פעל על פי נהלי הוקמה. בזמן הניתוח, זמן השקה אומר, ואני אומר תפירת הזמן של החדירה לעורק היו 22 דקות, 26 ± 167 ± 6 min ו- 11 ± 5 דקות, בהתאמה. שיעור התמותה היה 6% (n = 4). שיעור התמותה היה 7.5% (n = 5), בסטנט פקקת נמצאה במקרים 4 (n = 2 מוקדם, n = 2 בשלהי סטנט פקקת).
התוצאות מדגימים את הכדאיות של סגר סטנט מתוקננת של מפרצות saccular sidewall בחולדות - עם שיעור נמוך של תחלואה ותמותה. הליך סטנט לסתימת משלב הזדמנות ללמוד מושגים חדשניים של סטנט או זרימה מזלף המבוסס על התקנים, כמו גם את ההיבטים מולקולרית של ריפוי.
Introduction
דימום תת-עכבישי כתוצאה ממפרצת תוך-גולגולתי קשורה עם תמותה גבוה, תוצאה נוירולוגית המסכן ניצולים רבים. כרגע יש שתי גישות כלליות occlude IA: גם מסיכה השתלה (אשר דורש חשיפה פעיל של המפרצת), או endovascular סגר. כפי endovascular פחות פולשני סליל לטיפול IA צוואר צר הוכח לשייכו תחלואה נמוך במקצת (בדגש1,האחורי מחזור2), אפשרויות הטיפול endovascular הפכו מודאליות המועדפת של מרכזי נוירוכירורגיים רבים. התקנים רבים פותחו על מנת להרחיב את הסימנים של טיפול endovascular, להתגבר על המגבלה העיקרית של IA הישנות לאחר סלילה. סטנטים תוך-גולגולתי מבטיחים במיוחד כדי להתגבר על מגבלות אלו, כפי שהם לשמש עשו איתו ניאו-endothelization, סליל מניעת פריצת, וכן להגן על העורק האב ולשפר intraluminal intraaneurysmal פקקת הנגרם על ידי הפחתה של תזרים דם. יש צורך ללמוד סטנטים חדשניים תוך-גולגולתי במודל חיות בעלות נמוכה; ברמה מאקרוסקופית והן מולקולרית.
מטרת מחקר זה הייתה לתכנן כספת, מהר, סטנדרטית טכניקה כירורגית ליישום סטנט במודל מפרצת saccular כבר הקים חולדות3,4,5. בפרויקט הנוכחי, הערכנו את התפקיד של סטנט מגנזיום מתכלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Wistar זכר חולדות עם משקל הממוצע של g 592 (±50 SD), והגיל הממוצע של 20 שבועות שוכנו חיות במתקני טמפרטורת חדר של 22-24 מעלות צלזיוס ו 12 שעות מחזור/כהה, עם חינם גישה מי ברז, גלולה דיאטה. החיות קיבל טיפול בני אדם על פי הנחיות מוסדיים. הניסויים אושרו על ידי ועדת לחיה על קנטון ברן, שוויץ (להיות 102/13). עקבנו בקפדנות את ההמלצות לחקר בעלי חיים: דיווח של ניסויים ב Vivo (הנחיות יגיעו).
1. מעבדה ציוד, אספקת מוצרי צריכה, כלי ניתוח
- חדר הפעלה שקטה aseptic ולתחזוקה, הטמפרטורה של 23 ± 3 ° C.
- השתמש שולחן כירורגית עם משטח אשר קל לנקות ולחטא, לכסות אותו. עם הניתוח תלוי. השתמש במיקרוסקופ כירורגי שולחני עם מצלמה כדי לתעד את הניתוח ואור אינפרא-אדום כדי לחמם את החיה לפני ואחרי הניתוח.
- להשיג מצרכים מתכלים הבאים כדי ליצור את המפרצת sidewall להשתיל סטנט.
- השג גדול יותר ויותר סטרילי תאית, גזה מטליות, מזרקים עם מחט חלולה 18 גרם ו- 26G ו מחט משופעת בוטה להחלפת השקיה/אמצעי האחסון.
- להשיג חומרים לתפור כולל נספגים 10-0, 9-0 בתפר מיקרו, נספגים 6-0, 5-0 בתפר תפירה 3-0 שנספג.
- להשיג 0.9% מול נתרן כלורי פתרון עבור החלפת השקיה/עוצמה, כדי להבטיח הניקיון של המכשירים במהלך הניתוח
- להשיג את הכלים הבאים כדי להשתיל סטנט: דקירה של מחט 19 ז, החוט הידרופוביות, נדן Fogaty 4 ו של מזרק וסת פרסיזיון עבור בלון הרחבה.
- לקבל מצרכים מתכלים הבאים עבור מפרצת קיר decellularization:
- להשיג microtubes לאחסון מפרצת ב-24 מעלות צלזיוס ותוויות לזיהוי, כמו גם של שייקר מעבדה כדי להבטיח טיפול כימי מלא של המפרצת.
- להשיג 0.1% dodecyl נתרן גופרתי (מרחביות), באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) עבור התהליך decellularization נכונה.
- להשיג את הכלים ניתוח סטנדרטי הבאים:
- לקבל כלים כירורגים מזו: מספריים כירורגיים, רקמות רכות מלקחיים, מפזר רקמות רכות, מלקחיים ישרים ומעוקלים, שלושה מהדק יתושים, המחט.
- להשיג מכשירי ניתוח מיקרו: מיקרו-מספריים ישרים ועקומים ישרים ועקומים מיקרו-מלקחיים, ארבעה סרטונים מיני זמנית כלי הדם עם applicators קליפ כלי הדם המתאים.
2. הרדמה
- מקם את החולדה בחדר גזים, עזים ומתנגד בתערובת של איזופלוריין ו חמצן (4% איזופלוריין). לשמור על שאיפת עד החיה מאבד את הכרתו.
- הסר את החיה anesthetized מתא הגזים ולהזריק ההרדמה סופית המורכב תערובת הותאם במשקל של medetomidine הידרוכלוריד (0.5 מ ג/ק ג) קטמין הידרוכלוריד (50 מ"ג/ק"ג) intraperitoneally (על ידי הזרקת לתוך הזכות או שמאל הבטן התחתונה).
- לנטר את עומק ההרדמה במרווחי זמן מוגדרים במהלך הניתוח עם קמצוץ הבוהן רעילים כדי לוודא החולדה לא מגיבה ואני מורדם לחלוטין. אם יש readminster רפלקס, הבוהן-קמצוץ ההרדמה עם זריקה בקרום הבטן הותאם משקל של קטמין, medetomidine. הרדמה מספקת נדרש לפני פתיחת חלל הבטן, וביצוע את הקצה לצד ההשקה ואת ההכנסה סטנט.
- מניחים את החולדה תחת המנורה חימום אינפרא-אדום עד ההרדמה בקרום הבטן נכנסת לתוקף, כמו התחממות לפני הניתוח יעיל מונע קירור נרחב במהלך הניתוח.
3. ניתוח והכנה מיצוב של העכברוש
- שוקל את החולדה, לחלץ את הלשון כדי לאבטח את דרכי הנשימה העליונות ולהחיל העין משחה כדי להימנע לייבוש הקרנית.
- השתמש דבק כדי לתקן את החולדה רחיץ לוח קטן, למנוע לחץ או גרירה כפות רגליו.
- לגלח את החולדה באזור תפעולי גילוח בעלי חיים קטנים, לחטא את האזור כירורגי.
- מקום שני סמנים בעובי 2-3 סנטימטרים מתחת של החיה כדי לגרום כמה שיותר lordosis המותני, נשימה טובים יותר-המותני ככל האפשר. פעולה זו מבטיחה יותר תערוכות של מקבץ ויישום קל של סטנט.
- לכסות את העכברוש עם צמצם סטרילי תלוי ולמקם אותו תחת המיקרוסקופ ההפעלה. להגדיר שני תומך לצד החיה כדי להקל על תנוחה נוחה יותר לידיים של הנסיין.
- לשטוף לחטא את הידיים, לשים כפפות סטריליות. זה שימושי יש עוזרת במיוחד עבור השתלה סטנט.
- לבצע את הניתוח בתנאים aseptic על-פי ההמלצות עבור6,של חיות מעבדה7.
4. מפרצת לקצירת שתל
- בהרדמה כללית, לפתוח את הבטן מתחת הסרעפת. ראשית, לחתוך את העור בקו midventral עם מספריים חדות, להפריד את העור מערכת השרירים. לאחר מכן חותכים את מערכת השרירים בבטן, לזהות את הסרעפת מעל הכבד בנקודת הכניסה של חלל בית החזה.
- חותכים את הסרעפת ואת רקמת חיבור עם מספריים חדות כדי לגשת בחלל בית-החזה. ולחתוך את הצלעות עם גדול מספריים אחד וחצי סנטימטר כדי לימין ולשמאל של עצם החזה.
- הצלעות פתוח, להקריב את העכברוש עם מנת יתר intracardiac של קטמין הידרוכלוריד (120 מ"ג/ק"ג).
- לגייס את הריאה השמאלית ולתקן אותה לצד ימין בעזרת מקלון תאית.
- בעקבות החשיפה המתאים של הקשת אבי העורקים, מהדק את azygos ואת שמאל ורידים בכליות הגולגולת עם תופסנים שני יתושים מעל העורקים וחותכים בין לבין. להשאיר את התפסים קצות כלי חיתוך כדי למנוע דימום ורידי רטרוגרדית. השתמש את התפסים כדי להזיז את הלב ואת הוורידים לצד, המאפשר גישה טובה יותר בקשת אב העורקים וירידה של אבי העורקים.
- לנתח העורקים בטכניקה המיקרוכירורגית עם מיקרו-מספריים, מיקרו-מלקחיים.
- לאתר אבי העורקים עולה מתוך המקטע יורד ל קשת אבי העורקים ולזהות את העורק בריחי השמאלי והעורק הבין-צלעי הראשון עוזב אבי העורקים.
- המקום נספגים 6-0 בתפר פשוט הגולגולת של העורק הבין-צלעי הראשון, תקשור את זה. בסוף צינתור, חותכים העורקים מיד אחרי המקור של העורק בריחי השמאלי. חשוב להשתמש בניצב יחיד לחתוך כמו זה מוריד את הסיכוי של אי סדרים בחוד החנית של השתל כלי הדם. בסופו של דבר, להסיר את המפרצת החדש שנוצר עם חתך מתחת הקשירה.
- לאחר מדידה את המפרצת, מיד השתלת השתל לתוך העכברוש הנמען.
5. מפרצת יישום ויצירת סטנט
- הגישה כירורגי
- . תתחיל לחתוך עור בשליש הדיסטלי של הבטן עם מספריים חדות והצב גזור midventral עד 1 ס מ דיסטלי של הסרעפת. הפרד בזהירות לעור ולרקמה התת-עורית מ מערכת השרירים. להשתמש את המספריים אותו כדי לפתוח את שרירי הבטן לאורך linea alba. להשתמש מלקחיים כדי לגייס את השרירים בעת גזירה כדי למנוע נזק האברים intraabdominal.
- בעקבות פתיחת בטן, הזזת המעי הדק, את caecum ואת המעי הגס ימינה. השתמש מפסק קיום עצמי שתפקח את חלל הבטן, ולתקן את האיברים. מניחים מקל דגימה מתחת הכבד להסרתו מן האזור כירורגי ולשפר את החשיפה מאובחנת.
הערה: אם המסה השמן חוסם את הנוף, אותו ניתן להציב מחוץ חלל הבטן ו מכוסה גאזה רטוב כדי למנוע דלדול נוזלים נרחב. - לרוקן את שלפוחית השתן כדי להשיג חשיפה מקסימאלית של העורק הראשי מתחת לכליות. זה יכול להיות הפרשות הישגים גם דרך לחץ עדין לקיר שלפוחית השתן, או vesical באמצעות מחט חלולה 26 גרם.
- להגן את שלפוחית השתן ואת האשכים מפני התייבשות ומניפולציה נרחב במהלך ניתוח על ידי מכסה אותם עם מקלון תאית סטרילית רטובה.
- פתח את הצפק הקודקוד המכסים את העורקים עם מלקחיים בוטה שני. תשמרי את ureters כמעט שקוף, כלי האשכים, עורק מצע המעי העליון מעולה. ברגע הצפק הקודקוד פתוח, העורק הראשי תהיה ממוקמת בדיוק מתחתיו. לעיתים קרובות מכוסה בשכבה דקה של רקמת שומן.
- להתחיל עם הקרע בוטה של העורק הראשי באמצעות מיקרו שני-מלקחיים כדי לשחררו מאובחנת השומן שמסביב עד אורך זמן רב יותר של כלי השיט יהיה גלוי. להמשיך עם ניתוח חד באמצעות מספריים מיקרו מיקרו-מלקחיים. רק לאחוז את adventitia במהלך הליך זה כדי למנוע נזק לקיר כלי.
- דיסקציה של אבי העורקים בבטן
הערה: כדי להקל על התיאור של האסטרטגיה כירורגית יש חילקנו העורק שלושה ייחודי מקטעים (איור 1).- להתחיל את הקרע קטע דיסטלי - אשר טכנית יותר מאתגר.
הערה: קטע דיסטלי מחולק בין נגע הסתעפות iliac, כסל וריד עורק. קטע זה משמש נקודת ההוספה לנקב, סטנט דיסטלי. העורק הראשי.- לנתח את העורקים עם מיקרו-מספריים, מיקרו-מלקחיים מ קאווה (פ') על ידי חיתוך לצד השכבה adventitial העורקים בין שתי הספינות.
הערה: עורקים קטנים המותני עשויים נובעים לעתים רחוקות ככלים סגמנטלי המשטח הגבי של העורק הראשי ומשבשים את ההליך. קרישת דם, חיתוך של כלי יש צורך להימנע נוטף רטרוגרדית במהלך כלי תפירה. - לזהות את העורק כסל נכון; מקורו יכול להשתנות באופן משמעותי בקטע זה אבל בתדירות הגבוהה ביותר ממוקם סימטרית יותר מאשר לכנף השמאלית.
הערה: מצב זה לעתים נדירות מפריע סטנטים מתוכננים ההכנסה החדירה בעורק, אך עשויים לדרוש נקודת חדירה רחוק יותר הוסר או - עבור ההשתנות אנטומי הקיצוני ביותר - מצדו של כלי השיט של העורק כסל נכון. - לאחר הכנת העורקים במגזר זה, מקם כרית גומי צבעוניים קטנים מתחת הספינה כדי לציין היכן יבוצעו הניקוב עורקי. הימנע מתיחה הכלי במגזר זה. מתיחה מתיחה על הקיר כלי עשוי להוביל כלי בלתי מבוקרת קרע בעקבות דקירה העורקים, אשר בתורו לעכב את השיקום הסופי. לכן חשוב לשחרר את העורקים הידבקויות כל החדירה לעורק ולהימנע בכל מיקום של גזה מטליות מתחת אבי העורקים.
- לנתח את העורקים עם מיקרו-מספריים, מיקרו-מלקחיים מ קאווה (פ') על ידי חיתוך לצד השכבה adventitial העורקים בין שתי הספינות.
- לנתח העורקים מ קאווה (פ') בקטע האמצעי באותו אופן כפי שתואר קודם.
הערה: המקטע האמצעי מחולק בין וריד כסל ו עורק וריד הכליה. קטע זה משמש מפרצת השרשה והמיקום סטנט.- לזהות את עורק מצע המעי העליון מעולה על מוצאו של העורק הראשי ולשמר אותו במהלך כל ההליכים.
- מאתרים ומפסיקים או העורקים מהמשטח הגבי של אבי העורקים בסעיף זה גם מצב של קרישת חסר. כדי למנוע פגיעה מקלעת lumbosacral, להבטיח שטיפה מספיק ולהיות קשובים הזמן קצר קרישת הדם.
- לקבוע את המיקום של סטנט לאחר דיסקציה של אבי העורקים במגזר זה. צופים הפרעות אפשריות של סטנט עם כלי בטן לפני הגדרת המיקום הסופי כדי להפוך את המפרצת סטנט.
- לאחר קביעת המיקום של מפרצת, סטנט, מניחים חתיכה קטנה של גזה, כרית גומי צבעוניים תחת העורקים חשיפה טובה יותר.
- לבסוף, לנתח את המקטע proximal של העורק. . זה יותר ההליך בקטעים דיסטלי והאמצעית פשוט מבחינה טכנית.
הערה: המקטע proximal ממוקם proximal לוריד הכליה. הוא משמש עבור היישום של הסרטון זמני מקורב ביותר במהלך ההשתלה סטנט טכניקה Seldinger.- לאחר פתיחת צפק הקודקוד, להפריד את כלי עם שני מלקחיים בוטה.
- בעקבות הקפת הגבי של אבי העורקים עם מלקחיים מעוקל, בוטה, מניחים חתיכה קטנה של כרית גומי צבעוניים מתחתיו כדי להקל על יישום אחר כך מקורב קליפ.
- להתחיל את הקרע קטע דיסטלי - אשר טכנית יותר מאתגר.
- יצירת המפרצת
- תהדק את העורקים בקטע האמצעי על-ידי החלת הראשון את המלחציים הדיסטלי, ולאחריו צינתור כדי להבטיח מילוי המשרד של כלי השיט ומקל את arteriotomy הבאים.
- הסר את adventitia באתר ההשקה המתוכנן. לתפוס את adventitia עם מיקרו-מלקחיים, לחתוך בזהירות עם המספריים מיקרו מבלי להזיק הקיר כלי.
- הרם חתיכה קטנה של כלי השיט קיר עם מיקרו-מלקחיים, לבצע חתך ליניארי עם מיקרו-מספריים. Arteriotomy צריך להיות בגודל זהה בבסיס המפרצת.
- לרוקן את העורק בשני הכיוונים עם תמיסת מלח במחט משופעת בוטה.
- מקם את התפרים שני הראשונים של הקצה לצד ההשקה, אשר מתבצע באמצעות תפרים נספגים 9-0, בסוף לקרע, arteriotomy. לאחוז הקיר כלי מעט ככל האפשר במהלך תפירת ולהבטיח כי התפרים יעברו דרך כל שכבה של הקיר כלי. הם צריכים לתפוס. רק החלק הגחון של אבי העורקים כדי למנוע את ההתכווצות של העורק; אשר עלול להוביל כלי להיקרע במהלך היישום סטנט.
- סגור את החתך בתפרים קטוע. להתחיל את התפר בצד שמאל, לסיים את זה לפני שתמשיך אל הצד השני. הקיר האחורי תסתיים, לעיין במדור endoluminal של ההשקה שפורץ שמוקם שלא בצדק.
הערה: בשלב זה, הרפוי אינטרה-aneurysmal שונים כגון סליל היישום עשוי להיות מוצג. - לאחר שסיים ההשקה, להסיר תחילה את המלחציים דיסטלי. המקום תפר נוסף במקרה של דימום העיקריים של זרם אחורי. ניהול נוטף קטין בהקשת בעדינות פיסת גזה למקור של דימום קטן. רקמת שומן או שכבה adventitial שהושג בעבר יכול להיות שימושי גם כן. כעת להסיר את המלחציים הפרוקסימלית.
- לשטוף את האתר השקה ושרטתי את הקצוות הנותרים של קשירה הכיפה מפרצת.
- להתבונן patency דיסטלי. העורק הראשי עם הבדיקה החליבה ישירה.
- הסר את הספוגית גזה קטנים מתחת משטח גומי צבעוניים, כמו כל חלקי העורקים צריך להיות בערך בגובה לפני ההוספה סטנט. הימנע כיסוי השקה פעירת קווי תפרים עם רקמת שומן כמו סטנט מהם חייבים להיות גלויים תוך מיצוב סטנט מתחת המפרצת החדש שנוצר.
- כדי למנוע נזק מן איסכמיה ממושך, לאפשר ל-10 דקות של פגיעה reperfusion לפני שתמשיך עם צינתור העורקים מחבר חובק למעקה ואת ההכנסה סטנט.
- לרוקן את השלפוחית לפני השתלת סטנט.
- סטנט השרשה
הערה: מומלץ להיות עוזרת על ידו עבור השלבים הבאים, במיוחד עבור האינפלציה סטנט הסופי.- קליפ החדירה לעורק קטע דיסטלי קודם. מתחילים עם המלחציים דיסטלי ופעל עם צינתור. להסיר את רקמת חיבור רופף (חלקית) את adventitia החדירה עם מיקרו-מספריים.
- מקום זמני מלחציים גדולים המקטע proximal כדי למנוע דימום העיקריים במהלך חדירה עורקי.
- ביצוע הניקוב עורקי קטע דיסטלי עם מחט דקירה 18 גרם. הרם חתיכה קטנה של הקיר כלי עם מיקרו-מלקחיים להקל הניקוב ולהפחית את הסיכון של פירסינג שני אבי העורקים כלי הדם.
- לרוקן את העורק ביסודיות לאחר הניקוב בתמיסת בשני הכיוונים באמצעות מחט משופעת בוטה.
- להכניס חוט מדריך הידרופובי החדירה ולהסיר את המלחציים proximal קטע דיסטלי.
- לדחוף קדימה את החוט עד הרמה של המלחציים בתוך המקטע proximal. הוסף את introducer טפלון לפי הטכניקה Seldinger באמצעות הכבל מדריך שנוסף בעבר.
הערה: חוטים מדריך הידרופובי מתאימים יותר מאשר אלה הידרופילית כפי שהם יש אחיזה מעולה לספק יותר שליטה ידנית. כפי טפלון introducers קל יותר introducers פוליפרופילן, הם להפחית את הסיכון של קרע בלתי מבוקרת החדירה. - לדחוף את מרחיב כלפי מעלה רק proximal לאתר השקה, נדן ממוקם כחצי סנטימטר מתחת.
- להסיר את החוט מרחיב ולהבטיח שצימוד אסידו כבוי כדי למנוע אובדן דם מיותר.
- לאחר שאיבת אבק המערכת בלון, הכנס סטנט מגנזיום שנספג באמצעות את introducer פוגרטי 4. לנפח את הבלון עם פס אחד של הלחץ רק לפני הסרת ההתקן introducer להגן על אנדותל של כלי השיט התמוטט מפני נזק ההליכה-induced ולהפחית את הסיכון ההליכה הופך להיות קשור בחבלי intraaneurysmal מושתל בעבר חומר (איור 2).
- כאשר סטנט במיקומה הסופי, בזהירות לנפח את הבלון עם 8-9 בר. בדוק באופן רציף התפרים הקצה לצד השקה עבור העתקת מתקליטור אפשרי.
- לאחר סטנט נאותה התארכות והצמדות לקיר כלי אבי העורקים, השטחת קצה ולהסיר את הבלון.
- בעת הסרת את introducer, יש סרטון זמני בהישג יד ליישום מיידי proximal כדי החדירה כפי נוטף רטרוגרדית מ צינתור העורקים הפטנטים עשוי להיות משמעותי.
- הסר את המלחציים זמני המקטע proximal לאחר הנחת את הקליפ proximal קטע דיסטלי. להתבונן הקצה לצד ההשקה כמו כל עלייה בלחץ הדם תוך-ותיני עקב חיתוך דיסטלי עלול לגרום לדימום באתר בתפר.
- ריקון החדירה עם תמיסת מלח של מחט משופעת בוטה בשני הכיוונים. ואז האצבעות עם טכניקה קטעה באמצעות חוט נספגים 10-0. במידת האפשר, להימנע האוחז הקיר כלי עם המיקרו-המלקחיים ולהבטיח כי כל תפר עובר דרך כל השכבות של הקיר כלי. התפירות-הספינה שהינו לנקב באתר כדי למנוע היצרות של כלי השיט.
- להוסיף תוספת תפרים אם דימום העיקריים מתרחשת כתוצאה זרם אחורי. במקרה של קטין בעבוע, לאבטח hemostasis דרך לחץ עדין לאתר דימום באמצעות מקלון גזה או קטע adventitia בעבר נשמר. חתיכות קטנות של רקמת שומן יכול להיות שימושי גם כן.
- הסר את משטח גומי צבעוניים מתחת החדירה. Pulsation של אבי העורקים יהיה גלוי בבירור לקרע, לאתר השקה. בדוק patency העורק דיסטלי עם הבדיקה החליבה ישירה.
6. סגירת מעגל
- להסיר את כל דגימות גזה ומורידים בעדינות את חלל הבטן בתמיסת isotone כדי לנקות את כל הלכלוך לקדם החלפת נפח.
- להסיר את מפזר ברקמות הרכות ומחזירים את המעי הדק, המעי האטום, מסת שומן בחזרה למיקום האנטומי הנכון שלהם.
- להשתמש תפרים נספגים 5-0 כדי לצרף את שרירי הבטן. כדי לצמצם את המתיחה בעור, במקום כמה תפרים תת עורית באמצעות של תפירה 3-0 שנספג. להשתמש באותה תפירה 3-0 כדי לסגור את העור.
- לאחר סגירת מעגל, לחטא את העור ומניחים על החיה תחת אור אינפרא-אדום לספק לו חמימות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
משך הזמן הממוצע של הניתוח היה מין (± 22) 167, 26 דקות (± 6) אשר היו נחוצים עבור יצירת המפרצת ושלוש נוספות (± 7) מינימום נדרש יישום סטנט ושחזור של arteriotomy (איור 3).
התמותה, תחלואה, פקקת מאקרוסקופית בסטנט היו הקצה העיקרית של המחקר. התקופות מעקב רגיל היו 7 ימים (n = 28), ו- 21 ימים (n = 32) בהתאמה. התמותה או תחלואה עמוס להוביל סיום מוקדם של המחקר. היו מקרי מוות לא במהלך הניתוח. ארבע חיות (6%) מתו בתוך שלושה ימים לאחר הניתוח הראשון בגלל פקקת בסטנט מוקדם. חולדות חמש (7.5%) חווה סיבוכים לאחר הניתוח עם שניים הנגרמת על ידי מוקדם בסטנט פקקת, שהובילה לשיתוק של הרגליים האחוריות. בעלי חיים אלה היו מורדמים עקב ליקוי נוירולוגי חמור שלהם. בשני מקרים אחרים, פקקת בסטנט המנוח נראתה ביום 21, לאחר הניסוי. בעלי חיים אלה הראתה אין גרעונות עד לאותה נקודה. עכבר אחד סבל התבקעות הפצע של כל השכבות של דופן הבטן ביום שלאחר הניתוח השני עם הפסד רצופים של אמצעי אחסון, הורדמה למוות כתוצאה מכך. שיעור תמותה ותחלואה קרדיווסקולרית המשולב היה 13.4% (איור 4 , איור 5).
איור 1 : איור של שלושה ייחודי המקטעים של העורק הראשי.
את הווריד הנבוב ו שלהם גריעות צבועים בכחול, ואילו העורק הראשי, שלהם גריעות צבועים באדום. * מסמן על קטע הדיסטלי, שבו מתבצע העורק לנקב, סטנט ההוספה. * * מסמן את המקטע האמצעי, בו מתרחשים מפרצת השרשה והמיקום הסופי סטנט. מסמן את המקטע proximal, אשר משמש עבור היישום של הסרטון זמני מקורב ביותר במהלך ההשתלה סטנט. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 : מגנזיום סטנט בניפוח-1 בר אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 : מאפיינים כירורגי.
כל נקודה מייצג חיה אחת; זאת אומרת ערכים (קו ארוך); ואת סטיית תקן אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 : תרשים זרימה-
מספר החיות השתמשו במחקר; תמותה ותחלואה קרדיווסקולרית אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5 : מאקרוסקופית ו מיקרוסקופיים (10 x הגדלה) סקירה של Mg-סטנט מטופלים הקצה לצד מפרצות מושתל בעקבות רקמות קציר-21 ימים.
ת: תמונה משמאל מראה של העורק הראשי פטנטים. התמונה בצד הימין מציגה העורקים longitudinally נפתח עם neointima דק כיסוי סטנט את ostium רמזה לי מפרצת מאחורי סטנט. ב': התמונה משמאל מראה של פקקת בסטנט של העורק. התמונה בצד הימין מציגה העורקים longitudinally נפתח עם כגון כיסוי כלי לומן. מהם סטנט מנוונת נגרמו כגון. C: מיקרוסקופיים סקירה (hematoxylin eosin כתם) של המפרצת שמוצג א אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
סטנטים Bioabsorbable דגמים בעלי חיים
בשנים האחרונות המגמה הכללית ברפואה כבר מן השתלים קבוע (אשר נשארים בגוף של המטופל למשך שארית חייהם) חומרים ביו-שנספג. מגנזיום סטנטים, בפרט, כבר די הוקם בשנת קרדיולוגיה8,9. למרבה הצער סטנטים אלה לא טרם נבדקו עבור יישומים אחרים, כגון מחלות כשאבדן. מסיבה זו החלטנו ללמוד השימושיות של סטנט bioabsorbable בטיפול מפרצת saccular. המחקר בוצע עם חולדות כפי שהם - כמו אחרים ניסוי קטן חיות - מתאימים עקב רכישה המשויך נמוך והוצאות מחיה. בנוסף, הם יכולים לשמש באזורים שונים של מחקר בזכות האפשרות של ההנדסה הגנטית10. עלויות נמוכות, טיפול קל, יחסית מהר ניתוחים מאפשרות מחקרים שיש לבצע עם מספר גדול של בעלי חיים. על מנת להעריך התקנים קרישה תוך-כלית חדשים, חשוב להשתמש מודל מפרצת סטנדרטית המאפשרת תנאים interindividual קבוע; במיוחד בכל הנוגע זרימת הדם, גזירה קיר, כלי turtuosity, מפרצת מיקום וגודל מפרצת. עכברוש sidewall מפרצת המודל המתואר מספק את כל היתרונות הללו. יתר על כן המודל מאפשר בדיקה של endovascular רומן גישות בתנאים קיר שונה. הוא מציג את המודל הקטן ביותר בבעלי חיים אפשרי שבו ניתן לנתח מושגים הביולוגי של מפרצת ריפוי ויישומים טיפוליים - כגון סטנטים. בזכות המידות, זה מאפשר להתקני בגודל דומה להיבדק מאוחר יותר לשימוש קליני בבני אדם. נא עיין העבודה שפורסמו קודם לכן עבור תיאורים מפורטים של יתרונות/חסרונות, הבדלים ביולוגיים של מפרצת extracranial פרה מודלים מינים שונים4,11.
התחלואה והתמותה
מחקרים קודמים הראו שיעור גבוה של תמותה בתוך סטנט בטן השרשה. הערכים משתנים בין 5.7-57%12,13,14,15. רוב בעלי החיים מת של קרישי דם בעקבות הפגיעה אינטימה במהלך ההשתלה סטנט16. אף-על-פי שיעור התמותה במחקר שלנו היה נמוך, פקקת סטנט-הקשורים נותרה מטרה משמעותית של סיבוכים לאחר הניתוח והגורל (7.5% בסטנט מוקדם פקקת ורידים, פקקת בסטנט מאוחר 3%). אנו משערים כי הקשר מופחתת בין סטנט כלי הוא סיבה חשובה עבור שיעור תמותה נמוך של 6% (5 מתוך 67 בעלי חיים) במחקר שלנו. איש הקשר היה מופחת בזכות טכניקת Seldinger האינפלציה של הבלון כדי 1 בר לפני הסרת את introducer; כמו הבלון מכסה בקצה חדות סטנט מגנזיום. דרך הרחבה מתמשך, עדין של החדירה עם החוט, dilatator, נדן, החדירה ניתן לשמור קטן, אשר בתורו מקלה על השחזור של הקיר כלי ומפחיתה את הסיכון של העורק iatrogenic הכיווץ. העכברים שוקלים לפחות 500 גרם עבור ההכנסה טכניקה Seldinger unproblematic של introducer 4F. טיפול antiplatelet הוכח להפחית בסטנט פקקת ללא קשר לפציעה אינטימה מכונאי הנגרמת על ידי סטנט השמה12,17,18,19. יתר על כן, רזה-ההליכה סטנט התקנים להפחית באופן משמעותי את היצרות כלי בעקבות טיפול סטנט20. מזל דלי ואח. 12 מטופלים sidewall מפרצות עם זרימה diverters בחולדות בטכניקה פעיל דומה לזו המתוארת לעיל. הם דיווחו אין פקקת בסטנט בסדרה שלהם. ההבדל העיקרי כדי מחקר זה היא שהם משתמשים כפולים טיפול antiplatelet והתקנים רזה ההליכה סטנט בהשוואה שלנו סטנטים מגנזיום. כמו המחקר שלנו במטרה לחקור את הביולוגיה של מפרצת ריפוי לאחר היישום סטנט, החלטנו לערוך את הניסויים ללא סמים כדי לא להשפיע על המדינה קרישה ו proinflammatory intraaneurysmal טבעי. ולכן, אנחנו קיבל את הסיכון גבוה יותר של קרישי דם.
Transaortic סטנט השמה
בניגוד סטנט הכניסה העורק הראשי13,15,21,22 אשר מקריב את כלי השיט, שחזור ראשוני של ניקוב האתר (שימור של כלי השיט) יכול להיות מושגת על ידי החדרת סטנט באמצעות קיבול גדול כגון העורק הראשי או עורק iliac14. יתרון נוסף של transaortic סטנט הוא זה מאפשר את ישירה חזותי ניטור לצורך מיקום מדויק סטנט, מניעת נזק מזיני בטן הרלוונטיים. ללא שליטה ויזואלית, השמה שווא מתרחשת ב- 12% של המקרים21. יתר על כן, ניתן לצפות את גודל הבלון ואת העורק כדי להימנע overexpansion של הקיר כלי. יישום ויצירת סטנט מפרצת בבטן מאפשר את המפרצת לגדול ללא הפרעה, אשר נתפסת prevailingly של מפרצת עם קירות decellularized5. החיסרון היחיד של מיקום אנטומי זה הוא האינטראקציה תאית ומולקולרית אפשרי בין של מערכת העיכול את המפרצת.
כיום יש אין translational, extracranial בעלי חיים דגמים אחרים אשר משקפים את המפרצת תוך-גולגולתי אנושית בחלל תת-עכבישי.
ההבדלים פעיל
מזל דלי ואח12 תיאר שיטה לטיפול sidewall מפרצות במודל של עכברים באמצעות זרימה diverters. בעוד הזמן הנדרש עבור ההוספה סטנט היה הדומה שלנו סדרה (24.5±6.4 לעומת 26±6 דקות), היה להם סכום נמוך ההפעלה (126±23.0 לעומת 167±22 דקות) וזמן השקה (16.3±6.4 לעומת 23±7 דקות). זמן הניתוח יותר בסדרה שלנו יכול להיות מוסבר על ידי הקרע. העורק יותר מורחבת. כפי שאנחנו מוכנס סטנט עם הבלון המורחבת מראש כדי להימנע מפציעה intimal, הכריחו אותנו כדי למקם את הקליפ proximal נעלה עורק הכליה. יישום דיסטלי יותר של הסרטון צינתור כלי יכול להוביל מכשול מוקדם של הבלון, פוטנציאל אומר כי ostium המפרצת אינו מכוסה על ידי סטנט. הפעם איסכמי הייתה fractioned (40 לעומת 23 דקות) בפרוטוקול הנוכחי כדי להקטין את הסיכון של נזק ובשפתיים. האיברים היו reoxygenated בשלב פגיעה reperfusion לפחות 10 דקות. פעם אחת זמן איסכמי מתקצר משך הניתוח אך עלולה להגביר את הסיכון של כשל אורגני רב לאחר הניתוח - אשר לא התרחשה באחד המקרים הציג. לאחר תקופת לימוד הכרחי, ההליכים הציג צריך להיות לניהול אפילו עבור מנתחים בלי הכשרה השתלה מוקדמת.
מסקנה
לסיכום, טכניקה זו יישום סטנט במודל חולדה מפרצת הקיר בצד הבטן הוכיחה להיות מועיל, עם ציון גבוה של תקינה, שיעור נמוך את התחלואה ואת התמותה, עלויות נמוכות. מאפיינים אלה להפוך את המודל מתאים למחקר עתידי של חומרים המיועדים לסתימת מפרצת בסיוע סטנט.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
עבודה זו נתמכה על ידי מחקר הכספים של המועצה למחקר, הקנטונספיטל אראו (aarau), אראו (aarau), שוויץ. סטנטים מגנזיום מתכלה סופקו על-ידי Biotronik AG, מרכז להתערבות כלי הדם, Buelach, שוויץ. המחברים הם האחראיים על העיצוב ועל התנהלות המחקר הציג והצהר אין אינטרסים מתחרים.
Acknowledgments
אנו מודים אויגן הופמן, Philine Zumstein לסיוע טכני מעולה שלהם ועל שיתוף המומחיות שלהם בהליכים יישום סטנט. אנו מודים Majlinda Kalanderi על הציור אנטומיים.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medetomidine | any generic | ||
| Ketamin | any generic | ||
| Buprenorphine | any generic | ||
| Phosphate buffered saline | |||
| Sodium dodecyl sulfate (0.1%) | |||
| 3-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP428G | |
| 5-0 non absorbable suture | Ethicon Inc., USA | 8618G | |
| 6-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| 10-0 non-absorbable suture | Covidien, USA | N2530 Monosof | |
| Operation microscope | Zeiss, Germany | ||
| Digital microscope camera | Sony, Japan | HXR-MC1P | |
| Standard surgical instruments | multiple | see protocol 7.a | |
| Microsurgical instruments | multiple | see protocol 7.b | |
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Temporary vascular clamps | B. Braun, Germany | ||
| 19G Puncture needle | Angiomed GmbH, Germany | 15820010 | |
| Hydrophobic guide wire | Cook Medical, USA | G00650 | |
| 4F sheat | Cordis Corporation, USA | 504-604A | |
| Inflation syringe | |||
| Laboratory shaker | Stuart | SRT6 | |
| Magnesium Stent 2.5/6 AMS with Polymer coating | Biotronik, Switzerland | ||
| Surgery drape | |||
| Sterile cellulose swabs | |||
| Syringes 1 ml and 2 ml | |||
| Hollow needles 18G and 26G | |||
| Isotonic sodium chloride | |||
| Microtubes | |||
| Eye ointment | Bausch + Lomb Inc, USA | Lacrinorm | any generic |
| Small animal shaver |
References
- Molyneux, A., et al. International Subarachnoid Aneurysm Trial (ISAT) of neurosurgical clipping versus endovascular coiling in 2143 patients with ruptured intracranial aneurysms: a randomised trial. Lancet. 360 (9342), 1267-1274 (2002).
- Molyneux, A. J., et al. International subarachnoid aneurysm trial (ISAT) of neurosurgical clipping versus endovascular coiling in 2143 patients with ruptured intracranial aneurysms: a randomised comparison of effects on survival, dependency, seizures, rebleeding, subgroups, and aneurysm occlusion. Lancet. 366 (9488), 809-817 (2005).
- Marbacher, S., et al. Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms. Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).
- Marbacher, S., Marjamaa, J., Abdelhameed, E., Hernesniemi, J., Niemela, M., Frosen, J. The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model. J Vis Exp. (92), e51071 (2014).
- Marbacher, S., et al. Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model. Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).
- Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J Vis Exp. (47), (2011).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J Invest Surg. 22 (6), 445-451 (2009).
- Flege, C., et al. Development and characterization of a coronary polylactic acid stent prototype generated by selective laser melting. J Mater Sci Mater Med. 24 (1), 241-255 (2013).
- Zartner, P., Cesnjevar, R., Singer, H., Weyand, M. First successful implantation of a biodegradable metal stent into the left pulmonary artery of a preterm baby. Catheter Cardiovasc Interv. 66 (4), 590-594 (2005).
- Hakamata, Y., et al. Green fluorescent protein-transgenic rat: a tool for organ transplantation research. Biochem Biophys Res Commun. 286 (4), 779-785 (2001).
- Bouzeghrane, F., Naggara, O., Kallmes, D. F., Berenstein, A., Raymond, J. International Consortium of Neuroendovascular C. In vivo experimental intracranial aneurysm models: a systematic review. AJNR Am J Neuroradiol. 31 (3), 418-423 (2010).
- Aquarius, R., Smits, D., Gounis, M. J., Leenders, W. P., De Vries, J. Flow diverter implantation in a rat model of sidewall aneurysm: a feasibility study. J Neurointerv Surg. , (2017).
- Indolfi, C., et al. A new rat model of small vessel stenting. Basic Res Cardiol. 95 (3), 179-185 (2000).
- Oyamada, S., et al. Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis. J Surg Res. 166 (1), e91-e95 (2011).
- Kwon, J. S., et al. Comparison of bare metal stent and paclitaxel-eluting stent using a novel rat aorta stent model. J Vet Sci. 12 (2), 143-149 (2011).
- Rouer, M., Meilhac, O., Delbosc, S., et al. A new murine model of endovascular aortic aneurysm repair. J Vis Exp. (77), e50740 (2013).
- Hardhammar, P. A., et al. Reduction in thrombotic events with heparin-coated Palmaz-Schatz stents in normal porcine coronary arteries. Circulation. 93 (3), 423-430 (1996).
- Guerrero, A., et al. Antioxidant effects of a single dose of acetylsalicylic acid and salicylic acid in rat brain slices subjected to oxygen-glucose deprivation in relation with its antiplatelet effect. Neurosci Lett. 358 (3), 153-156 (2004).
- Niitsu, Y., et al. Repeat oral dosing of prasugrel, a novel P2Y12 receptor inhibitor, results in cumulative and potent antiplatelet and antithrombotic activity in several animal species. Eur J Pharmacol. 579 (1-3), 276-282 (2008).
- Kastrati, A., et al. Intracoronary stenting and angiographic results: strut thickness effect on restenosis outcome (ISAR-STEREO) trial. Circulation. 103 (23), 2816-2821 (2001).
- Lowe, H. C., James, B., Khachigian, L. M. A novel model of in-stent restenosis: rat aortic stenting. Heart. 91 (3), 393-395 (2005).
- Finn, A. V., et al. A novel rat model of carotid artery stenting for the understanding of restenosis in metabolic diseases. J Vasc Res. 39 (5), 414-425 (2002).
