Summary
通过染色食品进行定量的食品摄入量测定, 为评价饲用动机提供了一种强有力的、高吞吐量的方法。将食品消费检测与 thermogenetic 和 optogenetic 筛结合起来, 是研究成人果蝇的食欲的神经回路的有力方法.
Abstract
食品消费受到大脑的严密控制, 它整合了食物的生理状态、适口性和营养成分, 并发出启动或停止进食的命令。破译及时和适度喂养决策的过程, 对我们理解与喂养控制有关的生理和心理障碍有重大影响。在实验操作后, 需要简单、定量和健壮的方法来测量动物的食物摄取量, 例如强行增加某些靶神经元的活性。在这里, 我们介绍了基于染料标记的饲料化验, 以促进遗传性研究的饲养控制在成年果蝇。我们回顾了现有的喂养方法, 然后从设置到分析, 逐步描述我们的方式, 这结合 thermogenetic 和 optogenetic 操作的神经元控制喂养动机与染料标签食品摄入量测定。我们还讨论了我们的方法的优势和局限性, 与其他喂养化验相比, 以帮助读者选择适当的化验。
Introduction
量化摄入的食物量对于评估大脑在响应内部需求 (如饥饿状态) 和外部因素 (如食品质量和适口性) 方面的多种喂养控制方面非常重要1,2,3,4,5,6,7,8,9. 近年来, 在果蝇中破译喂养控制的神经基质的努力导致了多种化验的发展, 直接量化摄取的食物量或作为喂养动机的指标。10,11,12,13,14,15,16。
毛细管进纸器 (咖啡馆) 检测12,13被开发用来测量玻璃 microcapillary 中液态食物的消耗量。咖啡馆化验是高度敏感和可重复的17 , 并简化了食品消耗量的测量, 特别是用于定量长期喂养18。然而, 这种化验要求苍蝇爬上 microcapillary 的尖端和饲料倒置, 这是不适合所有菌株。此外, 由于使用咖啡馆化验试验的苍蝇必须饲养在液态食品上, 这些饲养条件对新陈代谢状况或潜在营养不良的影响仍有待确定。
喙扩展响应 (每) 检测11,14计数的喙延伸反应的频率, 以温和的接触食物滴。每种化验结果证明, 作为评估个人飞行和驴子喂养动机的一个很好的方法食物适口性和食品含量的影响18,19。然而, 它不是直接定量的摄入量。
最近, 研制了一种半自动方法--人工喂养法 (MAFE)15。在 MAFE, 一只固定的苍蝇用含有食物的 microcapillary 人工喂养。鉴于可同时监测喙的延伸反应和食物消耗量, MAFE 适合于评估营养价值和药理操作的效果。然而, 固定一只苍蝇可能会对其行为表现产生负面影响, 包括进食。
此外, 还开发了飞行喙和活动检测器 (FlyPAD)10 , 以自动量化喂养行为。使用机器视觉方法, FlyPAD 记录苍蝇和食物之间的物理相互作用, 以量化喙延长的频率和持续时间, 作为喂养动机的指示器。FlyPAD 提供了一种高通量的方法来监视自由移动苍蝇的喂养行为, 尽管该系统的灵敏度和鲁棒性仍有待更多研究12进一步确认。
标签策略经常被用来估计苍蝇的食物摄取量。用化学示踪剂标记食物是常见的, 在进食后, 测量摄取的示踪物量来计算食物摄取量。放射性示踪剂16,17,20,21,22,23,24,25允许通过角质层检测不均匀的苍蝇。该方法提供了显著的低变异性和高灵敏度的18, 对食品的长期摄入量的研究是可行的。然而, 在使用这种化验时, 应考虑到可用的放射性同位素和不同的吸光度和排泄率。
标签和追踪食物摄取与无毒的食物颜色是一个更安全和更简单的选择2,3,26,27,28。在食用含有可溶性和不可吸收染料的食物后, 苍蝇是均匀的, 摄取的染料的用量后来用分光光度计3,24,28,29.标签策略易于执行, 并提供了高效率, 但有一个警告。从摄取染料中估计的食物摄入量比实际体积小, 因为在苍蝇开始喂养17之后, 排泄开始早于15分钟。此外, 该检测通常在60分钟内评估食物摄取量, 仅适用于短期喂养行为的调查24,28。此外, 多个内部和外部因素,如基因型17、性别17、交配状态17、饲养密度30、昼夜节律3132和食品质量3,8,16, 影响食物摄取量。因此, 喂养持续时间可能需要根据特定的实验条件进行调整。除了促进食品摄取量的量化, 食品颜色还用于评估食物选择2,19,27, 并可视化的半月板在咖啡馆化验12microcapillary。
在这里, 我们介绍了一个协议的结合操作的神经元活动与染料标记方法。这一策略已被证明是有益的, 在我们的遗传性研究的饲养控制在成年果蝇24。视觉评分法允许快速估计食物消耗量;因此, 它是有用的筛选通过大量的菌株及时的方式。然后用比色法对屏幕上的候选者进行详细分析, 以提供客观和精确的量化。
除了喂食化验, 我们还描述了 thermogenetic27,33,34,35和 optogenetic36在果蝇中强行激活目标神经元的方法。通过 thermogenetic 操作激活神经元是简单和方便的果蝇瞬态受体电位锚蛋白 1 (dTRPA1), 这是一个温度和电压门控阳离子通道, 增加神经元的兴奋性时, 环境温度升高23摄氏度以上33,37;然而, 在高温下测试动物可能会对行为产生不良影响。激活果蝇中神经元的另一种有效方法是使用光遗传学与 CsChrimson 36, 这是 channelrhodopsin 的一个红色移位变体, 它增加了当暴露于光时神经元的兴奋性.光遗传学提供更高的时间分辨率和较小的干扰行为比 thermogenetics。将食物摄取量与神经元活性的调控相结合, 是研究喂养神经机制的有效途径。
我们详细描述了喂养室的准备和要测试的苍蝇。使用Taotie-Gal4作为模型24, 我们描述了通过 thermogenetics 和光遗传学激活神经元。该议定书还介绍了两种用染料标记食品定量测定食品消耗量的试验。
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Protocol
1. 准备送料室
注意:染料标记喂养试验的加料室由两部分组成: 外容器 (作为盖子) 和内容器 (作为食物来源)。
- 从玻璃瓶中修改外部容器以培养果蝇(内径为31.8 毫米, 高度为80毫米) (图 1A, 1C)。用一层1% 琼脂糖 (5 毫升) 盖住容器的底部, 以保持喂食装置的适当湿润, 并充当苍蝇行走的软基板 (图 1B)。容器从而提供一个受控但自然主义的设置, 对苍蝇进行最小的应力或扰动。
- 准备外面的容器。将0.5 克琼脂糖悬浮在50毫升的双蒸馏水中, 加热时经常搅拌, 然后煮沸, 完全溶解在一个带有热板的磁力搅拌器上。
- 当1% 琼脂糖冷却到约60摄氏度, 转移5毫升1% 琼脂糖到一个空的外部容器 (图 1B), 并让容器保持开放, 直到冷却到室温, 以产生琼脂糖垫。
- 准备染料标签食品。染料标签食品的组成根据不同的实验目的而变化。这里是一个例子, 准备的染料标签食品只含有蔗糖。
- 添加0.5 克琼脂糖到50毫升的双蒸馏水, 热频繁搅拌, 并煮沸完全溶解在一个磁性搅拌器与热板。
- 当上述1% 琼脂糖冷却到约60摄氏度, 添加1.71 克蔗糖的琼脂糖, 以获得 100 mM 蔗糖。
- 添加0.25 克蓝色染料 (erioglaucine 二钠) 到琼脂糖溶液中获得 0.5% (瓦特/v) 染料标签食品。
- 准备里面的容器。将空内容器放在平坦的水平面上, 然后将750µL 的蓝色染料标签食品添加到单独的食品容器中, 让它凝固至少5分钟。
注意:内部容器是一个小的塑料碟, 内径为13.6 毫米, 高度为7.5 毫米 (图 1A, 1C)。它充满了染料标签的食物, 然后定位在琼脂糖垫的外部容器的中心。 - 将填充的内容器转移到准备好的外部容器中, 并将其放置在琼脂糖垫的中心。让喂食室在室温下保持40分钟的开放, 直到外部容器的壁没有凝结。
注意:干墙是必要的, 以防止苍蝇被困在墙上, 接触水滴。 - 用无染料食物 (相同成分但不含染料) 为背景减法准备喂食室。
2. 苍蝇的制备
注意:成年女性飞行5至10天后, 羽化通常用于喂养化验。建议对不同基因型的苍蝇进行制备, 包括基因控制, 并进行平行试验。20飞行 (从一个哺养的房间) 生成一个数据点。
- 考虑到饲养成年苍蝇的人口密度。通常, 根据菌株和培养瓶的尺寸来改变亲本的数量来控制人口密度。举个例子, 将广州 S 的15男性和30女性转移到一个文化瓶 (直径31.8 毫米和高度80毫米), 让雌性产卵一天, 然后删除成年苍蝇。
- 准备苍蝇 thermogenetic 激活。
- 使用 Gal4/UAS 系统38 , 通过跨越 UAS-dTrpA1 与不同 GAL4 驱动程序线 (图 2B), 在不同的神经元中表达 dTRPA133 。
- 保持成人飞行在标准食物在22°c, 60% 相对湿度和 12 h/12 h 光黑暗的周期。
- 在喂食试验前两天, 在一个2飞垫上, 在一个立体显微镜下, 将苍蝇放在一个新鲜的食物瓶中, 并保持每瓶20只苍蝇的密度。
- 准备苍蝇 optogenetic 激活。
- 使用 Gal4/UAS 系统38 , 通过与不同 GAL4 驱动程序线交叉的无人驾驶 CsChrimson 苍蝇, 在不同的神经元中表达 CsChrimson36 。
- 收集新的 eclosed (24 小时内) 苍蝇和转移到一个小瓶与标准食品含有400µM 全反式视网膜。
- 为了防止过早激活, 用铝箔包裹饲养瓶, 然后放入一个黑暗的盒子里, 保护苍蝇不受不必要的光刺激。保持苍蝇在25摄氏度, 60% 湿度在黑暗中 4-6 天。
- 在喂食试验前两天, 在 CO2飞垫上用立体显微镜对雌性苍蝇进行排序。收集20只苍蝇到一个食品瓶, 并保持他们在黑暗的喂养测试之前。
- 尽可能快地在昏暗的灯光下进行所有操作, 以避免环境光线造成的影响。使用放置在远离工作区域的 LED 灯, 工作区的强度为5µW/厘米2。
注意:使用饿死的广州 S 苍蝇作为喂养试验的积极控制. 剥夺这些苍蝇的食物和维持在1% 琼脂糖24小时之前的喂养测试。这些苍蝇的食物消耗水平有助于评估日常的波动。
3. Thermogenetic 激活
- 在当天的同一时间进行所有喂养实验, 大约授时时间 4-631,32, 以最小化由于昼夜节律的变化。
- 准备一个孵化器 (或一个有温度控制的加热器的小房间) 作为供暖环境。
- 在行为实验之前, 平衡在实验温度 (30 °c) 上准备好的进料室, 2 小时, 以确保进料室的温度相对均匀。
- 要开始喂食过程, 小心地将20飞从他们的家小瓶到一个预热的喂食室通过温和的攻丝。继续以30°c 为60分钟的喂养过程 (图 3A) .
注意:频繁的鼓动, 如打开和关闭孵化器门, 不利地影响喂养行为, 因此应尽量减少。 - 在-80 摄氏度 (或-20 °c) 冻结喂食室, 停止喂养60分钟, 30 分钟。
注意:冷冻有助于在所有房间同时停止喂养。结冰的苍蝇在-80 °c 服务二个目的, 为 euthanizing 苍蝇和为存贮直到均匀化为一个星期。 - 对于温度控制组, 转移20飞入室温进给室与染料食品, 开始喂养过程在22°c 60 分钟。
- 在-80 摄氏度 (或-20 摄氏度) 的温度控制组中, 停止喂养30分钟。
4. Optogenetic 激活
- 在当天的同一时间进行所有喂养实验, 大约授时时间 4-631,32, 以最小化由于昼夜节律的变化。
- 小心地将20只苍蝇从一小瓶移入进料室, 然后轻轻敲击, 然后将腔侧放在照明设置上 (图 4A, 4B)。
- 对于 optogenetic 操作, 使用橙色 led 阵列 (607 nm) 作为光源的刺激, 并固定在 led 上方的水平有机玻璃板, 以支持在照明期间的喂食室。将安装程序保持在25摄氏度的孵化器中, 60% 的湿度 (图 4A, 4B)。
- 刺激遗传控制苍蝇平行与饕餮 > CsChrimson苍蝇, 但在不同的喂养室。
- 继续喂养过程为60分钟与背面照明由橙色光。
- 确定光遗传学实验36的最佳光照强度.对于饕餮 > CsChrimson飞行, 强度为2.2 兆瓦/毫米2会诱发瘫痪 (停止运动和失去体位控制), 因此, 使用中等强度0.1 兆瓦/毫米2来刺激饕餮> CsChrimson在喂食测试期间飞行。
- 在-80 摄氏度 (或-20 摄氏度) 的情况下, 通过冷冻喂养室停止喂食30分钟。
5. 食品消费的视觉估计
注意:视觉评分法提供了对食品消耗量的半定量估计。虽然该方法不像光学方法那样客观, 但它能够及时地通过大量的飞行菌株, 使其适合于第一轮的基因筛, 迅速缩小候选名单, 以便进行进一步的测试。
- 在喂食过程之后, 麻醉在一个立体显微镜下的 CO2飞垫上的苍蝇。根据其腹部的染料色食物的体积和强度, 为每只苍蝇分别评分 (图 2A)。
注意: 视觉估计的标准: 评分系统有4水平的食物摄取量对应于不同体积和强度的彩色食物在腹部。- 无可察觉的染料色的食物的比分飞行比分 0;给那些微弱的 (几乎不被发现的) 蓝色染料或用染料色的食物占领少于一个第三容量腹部 a 比分1。
- 得分与强烈的染料色的食物占领腹部的一半的分数为2。
- 分数为 3 (图 2A) 的强烈染色的内容占据超过一半的腹部得分。
- 在每个实验条件下计算不同分数的苍蝇的比例 (图 2B)。
6. 食品消耗量的比色量化
- 停止进食后, 将所有20只苍蝇从喂食室倒入一张称重纸上, 然后用软刷子将其转移到1.5 毫升管中。
注意:不要把所有的房间的-80 °c 存储同时, 以避免苍蝇粘在房间壁, 因为水凝结在寒冷的房间。 - 添加500µL 的 PBST 管和融汇的苍蝇使用研磨机在60赫兹 5 s。
- 当身体部位没有可检测的片段时, 通过观察确认充分的均匀化。
- 旋转管与组织匀浆30分钟, 在1.3万转, 以清除碎片。
- 离心后, 将100µL 的上清液转移到96井板的井中。
- 在所有样品被装载了之后, 把板材放入一个板材读者测量样品的吸光度在630毫微米。
- 要去除背景吸收, 减去上清液的吸光度, 从吃的苍蝇的食物没有染料从上清的吸收从蓝色食物喂养的苍蝇。
注意:这一步是可选的, 这取决于所用食物的成分。当苍蝇食品 (没有染料) 产生 630 nm 的吸光度, 有必要执行这一步骤, 以消除背景。
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Representative Results
Thermogenetic 屏幕。
食欲异常增加会导致食物摄入量升高, 而不考虑生理需求。我们利用这个方案设计了一个高通量行为屏幕, 以获得与饥饿和饱足状态相关的神经元的遗传处理 (图 1)。屏幕产生Taotie-Gal424。当Taotie-Gal4神经元被强行激活为30摄氏度时,饕餮 > TrpA1苍蝇摄取的食物量比控件多 (图 2,图 3)。
在视觉上评分的食物消费。
由于在喂养行为的调节中已经指出了一些神经递质和肽, 我们测试了相应的 GAL4 线,包括交款20、sNPF39、章鱼胺21、多巴胺27、40, 血清素41,42, AKH35, 和 Dilp27,8,35。为了量化喂养的反应, 我们目视检查和得分的苍蝇与不同数量的可检测染料在肠道 (图 2A)。激活饕餮神经元后, 大约58% 的饕餮 > dTrpA1苍蝇表现出强烈的喂养行为, 其中23% 显示了温和的喂养行为 (图 2B)。相比之下, 只有通过dTrpA1 (图 2B) 激活的其他神经元, 苍蝇才会观察到边缘喂养行为。
食品摄取量的比色量化。
为了量化高精度和客观性的食物摄取量, 我们测量了在食物2、27、28中添加的染料所特有的波长中飞提光度的测定。为了使吸光度值与食物摄入量相关联, 通过测量样品溶液的吸光度 (相同的缓冲剂, 使苍蝇、PBST) 与不同数量的染料混合, 获得了标准曲线。正如我们的研究结果所表明的, 急性激活的Taotie-GAL4神经元通过 TRPA1 显著增加了食物摄取量与遗传控制和温度控制在同一测试期间 (图 3B), 提示Taotie-GAL4标记的神经元参与调控成人的食物摄取量果蝇。
Optogenetic 激活, 以促进食物摄取量在果蝇。
我们使用了CsChrimson来激活饕餮神经元, 方法是使用橙色光源36 (图 4A, 4B) 进行光照。当饕餮 > CsChrimson苍蝇受 LED 灯 607 nm 的刺激时, 它们摄取的食物比控制的要多 (图 4C)。此外, 摄取的食物量与刺激光的强度有很好的相关性 (图 4D)。因此, 除了 thermogenetics 与 dTrpA1, optogenetic 活化 CsChrimson 在饕餮神经元也促进喂养动机的饱足蝇。
图 1.一种用于分析成年苍蝇食欲的喂养范式.(A) 送料室包含一个内容器, 里面装满了染料色的食物和一个用1% 琼脂糖填充的外部容器。从左到右, 内容器, 外容器, 和完整的进料室。(B) 内容器位于外部容器底部的琼脂糖垫的顶部。(C) 送料室的顶部视图。(D) 显示 "食欲筛" 实验的示意图。正常的饱足蝇很少吃食物 (左小瓶), 而强行激活某些喂养控制神经元导致饱足蝇摄取额外的食物, 从而在腹部 (右小瓶) 展出染料色的食物。请单击此处查看此图的较大版本.
图 2.食物摄取的视觉估计.(A) 范例图像, 以显示在腹部进行食物含量评分的标准。(B) dTrpA1 在30摄氏度激活的带指示神经元的果蝇中喂养分数的分布。No-Gal4: UAS-dTrpA1 (遗传控制);NPF-GAL4: 神经肽 F 阳性神经元;sNPF-GAL4: 小神经肽 F 阳性神经元;TDC1-GAL4 和 TDC2-GAL4: 章鱼胺神经元;TH-GAL4: 多巴胺神经元;5-HT: 血清素神经元;AKH: adipokinetic 激素阳性神经元;dip2: 胰岛素样肽2阳性神经元;Taotie-GAL4: Taotie-GAL4 标签神经元 (n = 每条件120个苍蝇)。请单击此处查看此图的较大版本.
图 3.Thermogenetic 激活饕餮神经元增加了成年苍蝇的食物消耗量.(A) 图像显示 thermogenetic 激活实验的设置。饲喂试验是在30摄氏度的孵化器中进行的。(B) 在 1 h 的30°c 或22°c 测试的饱足蝇中, 用比色定量测定食品消耗量.一只苍蝇的食用量是从一个喂食室中的20只苍蝇中计算出来的 (n = 6)。生理盐水表示不显著 (p > 0.05);p < 0.001。使用 Tukey 的后端测试进行了单向方差分析, 以便对多个比较进行解析。误差线表示平均值.请单击此处查看此图的较大版本.
图 4.Optogenetic 激活饕餮神经元以强度依赖性的方式增加食物摄取量.(A, B)optogenetic 激活的设置的两个视图。送料室侧放在支撑板上, 并由底部的橙色 led 阵列照亮。已卸下照明盒的前端以显示内部指示灯。行为实验是在25摄氏度, 60% RH 的孵化器内进行的。(C) 在 optogenetic 光照下或在黑暗中测试 1 h (n = 6) 时, 被指示基因型的饱足蝇的食物消耗量。(D) 饱足的饕餮 > CsChrimson蝇的摄食与光照强度 (n = 6) 相关。生理盐水表示不显著 (p > 0.05);p < 0.001, 采用 Tukey 的后端测试的单向方差分析方法, 对多个比较 (学生的t) 进行了两组比较的测试。误差线表示平均值.请单击此处查看此图的较大版本.
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Discussion
本报告的重点是在 thermogenetic 和 optogenetic 激活的背景下, 对食品消费进行染料标记喂养测定的技术过程, 以操纵神经元控制喂养。这一简单而可靠的协议将有助于阐明候选神经元在喂养控制中的作用, 测量苍蝇的食物偏好, 并通过喂食的遗传屏幕24识别喂养控制回路中的新玩家。
染料标记策略是研究短期喂养行为的可行方法。染料, erioglaucine 钠, 溶入和摄取的食物, 是一个重要指标的食品消费。Deshpande 等人表明, 蓝色染料本身没有对喂养的影响, 当测量的咖啡馆化验和放射性同位素标签食品摄入量化验17。同样, 我们的每一个结果 (用染料标记或无染料的 100 mM 蔗糖溶液刺激苍蝇的腿) 表明, 苍蝇在对染料标签或无染料食品的反应上没有显著的差异。然而, 对于染料在果蝇中是否无味, 仍然没有明确的数据。
除了议定书中指出的关键步骤外, 还要特别注意要测试的苍蝇的一般状况。除了饲养和保持在一个非过度拥挤的密度, 苍蝇应轻轻处理, 并避免不必要的冲击或压力, 以产生一致的喂养结果。
这里提出的喂养范式有一定的局限性。首先, 我们的方法在60分钟内量化食物消耗量。为了评估食物的摄入量在较长的时间, 如一天, 需要一种不同的方法, 如咖啡馆。第二, 与使用放射性同位素的定量方法相比, 比色法不太敏感, 难以解决食品用量低时的差异。第三, 考虑到一些苍蝇会在进食开始后的15分钟内开始排出, 这个协议实际上测量了人口17中食物摄取和排泄的净结果。第四, 这里描述的食物摄取量的比色量化是一个苍蝇组, 单飞的食物摄取量的估计取决于其他喂养化验, 如放射性同位素标记, MAFE 化验, 或 FlyPAD。然而, 对食物摄取量的比色量化的某些优点, 如简单、稳定、可见和高通的方法, 使其成为大量菌株定量化的首选, 尤其是以喂养为基础的遗传屏幕和后续研究。
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Disclosures
作者声明没有竞争的财政利益。
Acknowledgments
这项工作部分是由中国国家基础研究计划 (2012CB825504)、中国国家自然科学基金 (91232720 和 9163210042)、中国科学院 (GJHZ201302 和 QYZDY-SSW-SMC015)、比尔和梅琳达盖茨支持的。基金会 (OPP1119434) 和 100-中国科学院人才培养计划。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| UAS-CsChrimson | Bloomintoon | 55135 | |
| UAS-dTrpA1 | Bloomintoon | 26263 | |
| TDC1-GAL4 | Bloomintoon | 9312 | |
| TDC2-GAL4 | Bloomintoon | 9313 | |
| sNPF-GAL4 | Provided by Z. Zhao | ||
| NPF-GAL4 | Provided by Y. Rao | ||
| TH-GAL4 | Provided by Y. Rao | ||
| 5-HT-GAL4 | Provided by Y. Rao | ||
| AKH-GAL4 | Provided by Y. Rao | ||
| dip2-GAL4 | Provided by Y. Rao | ||
| Taotie-GAL4 | Provided by J. Carlson | ||
| Agarose | Biowest | G-10 | |
| Sucrose | Sigma | S7903 | |
| Erioglaucine disodium salt | Sigma | 861146 | |
| all-trans-retinal | Sigma | R2500 | stored in darkness |
| Triton X-100 | Amresco | 9002-93-01 | |
| Fly food | 1 L food contains: 77.7 g corn meal, 32.19 g yeast, 5 g agar, 0.726 g CaCl2, 31.62 g sucrose, 63.2 g glucose, 2 g potassium sorbate, pH | ||
| 1x PBS buffer | 1 L 1X PBS contains: 8 g Nacl, 0.2 g Kcl, 1.44 g Na2HPO4, 0.24 g KH2PO4, pH 7.4 | ||
| PBST buffer | 1X PBS with 1% Triton X-100 | ||
| Grinding mill | Shang Hai Jing Xin | Tissuelyser-24 | |
| Incubator | Ning Bo Jiang Nan | HWS-80 | |
| Magnetic stirrer with a heat plate | Chang Zhou Bo Yuan | CJJ 78-1 | |
| Spectrometer | Thorlabs | CCS200/M | |
| Microplate Spectrophotometer | Thermo Scientific | Multiskan GO Type: 1510, REF 51119200 | |
| Fluorescence stereo microscope | Leica | M205FA | |
| Stereo microscope | Leica | S6E | |
| Outside container | Jiang Su Hai Men | glass vial with a diameter of 31.8 mm and a height of 80 mm (inside dimension) | |
| Inside container | Beijing Yi Ran machinery factory | plastic dish with a diameter of 13.6 mm and a height of 7.5 mm (inside dimension) | |
| 1.5 mL Eppendorf tubes | Hai Men Ning Mong | ||
| 96 well plate | Corning Incorporated | Costar 3599 | |
| LEDs | Xin Xing Yuan Guangdian | 607 nm, 3W | https://item.taobao.com/item.htm?id=20158878058 |
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