Un modello murino di cancro del pancreas Syngeneic per studiare gli effetti dell'elettroporazione irreversibile

Sommario

Elettroporazione irreversibile (IRE) è una tecnica di ablazione non-termica utilizzata per il trattamento del cancro del pancreas localmente avanzato. Essendo una tecnica relativamente nuova, gli effetti di IRE sulla crescita del tumore sono capiti male. Abbiamo sviluppato un modello syngeneic del topo che facilita lo studio degli effetti dell'IRE su cancro del pancreas.

Abstract

Cancro del pancreas (PC), una malattia che uccide circa 40.000 pazienti ogni anno negli Stati Uniti, ha eluso con successo diversi approcci terapeutici che le strategie immunoterapeutiche promettente. Elettroporazione irreversibile (IRE) è una tecnica di ablazione non termica che induce la morte delle cellule tumorali senza distruzione delle strutture adiacenti collagene, consentendo in tal modo la procedura deve essere eseguita nei tumori molto vicino ai vasi sanguigni. A differenza delle tecniche di ablazione termica, IRE risultati nella morte cellulare apoptotica graduale, insieme a necrosi immediata ablazione indotto ed è attualmente in uso clinico per i pazienti selezionati con PC localmente avanzato. Un ablativo, non bersaglio procedura specifica come IRE può indurre una miriade di risposte nel microambiente tumorale. Pochi studi hanno affrontato gli effetti di IRE sulla crescita del tumore in altri tipi di tumore, ma nessuno si sono concentrati sul PC. Abbiamo sviluppato un modello syngeneic del topo del PC in cui sottocutaneo (SQ) e orthotopic tumori possono essere trattati con successo con IRE in un ambiente altamente controllato, facilitando le varie routine di post di studi longitudinali. Questo modello animale serve come un sistema robusto per studiare gli effetti dell'IRE e modi per migliorare l'efficacia clinica di IRE.

Introduzione

L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PC) è proiettato a diventare la seconda causa principale delle morti del cancro negli Stati Uniti intorno 2020¹. La stragrande maggioranza dei pazienti diagnosticati con il PC alla fine muoiono dalla malattia metastatica a distanza². Il microambiente di PC è notoriamente immunosopressivo e chemioresistente. Relativo stroma desmoplastico contiene una scarsità di cellule T effettrici (anti-tumorale) e una prominenza dei leucociti immunosoppressori, tra cui i macrofagi associati al tumore (TAM), cellule mieloidi soppressore derivate (MDSC) e cellule T regolatorie (Treg)

Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali effettuati seguendo che questo protocollo deve essere approvato dal rispettivo istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC). Tutte le procedure qui descritte sono state approvate da IACUC UCSD.

1. procurarsi animali destinatari

Nota: La linea cellulare 4580 KPC-Luc è stata stabilita da un tumore che presenta in un LSL-Kras^{G12D / +}; LSL-Trp53^{R172H / +}; PDX1^{Cre / +}; LSL-ROSA26 ^{Luc / +} mouse (KPC), che è un modello geneticamente costruito del PC su uno sfondo di C57BL/6. Il vantaggio di questa linea cellulare è che esso esprime costit....

Risultati

Abbiamo seguito la procedura descritta sopra e generato tumori SQ sul 5-6 settimana vecchio tipo selvatico C57BL/6 topi inoculati con 1 x 10⁶ cellule con 50% BMM. Quando le dimensioni del tumore ha raggiunto 5-6 mm di diametro, alcuni dei topi sono stati sacrificati, i loro tumori sono stati asportati e impiantato orthotopically in un destinatario topi C57BL/6. IRE è stata effettuata 10 giorni dopo l'impianto come illustrato nella timeline nella Figura 1

Discussione

In questo studio, abbiamo dimostrato un modello di topo immunocompetenti per PC che può essere utilizzato per studiare gli effetti dell'IRE sulla crescita del tumore. Attualmente, IRE è utilizzata come una tecnica di ablazione non termico solo in altamente selezionati pazienti localmente avanzati del PC che non dispongono di progressione di malattia a distanza dopo mesi di terapia preoperatoria. Suo uso è stato limitato quindi perché la maggior parte dei pazienti con localmente avanzato PC sviluppare malattia metastatica.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
ECM 830 elettroporatore a onda quadra	Harvard Apparatus	BTX # 45-0002 ( 58018-004 )
2 needle array	elettrodo Harvard Apparatus	45-0167
Interruttore a pedale di sicurezza	Harvard Apparatus	45-0211
Platinum Tweezer-trode	Harvard Apparatus	45-0486
DMEM-F12 media	ThermoFisher Scientific	11320-033
Siero fetale bovino	ThermoFisher Scientific	10437028
Tripsina	ThermoFisher Scientific	25200056
Matrigel	Corning	354230
Isoflurano	Sigma-Aldrich, Inc.
Lacrilube	Fisher Scientific
Buprenorfina	Fisher Scientific
D-luciferrina	Perkin Elmer	122799
IVIS  Sistema di imaging in vivo a spettro	Perkin Elmer	124262
ceppo di topo C57BL / 6J	Il laboratorio Jackson	Linea cellulare 000664/Black 6
(KPC-Luc 4580)	J.J. Yeh Lab presso l'Università della Carolina
Aghi per siringa BD Precisionglide	Sigma-Aldrich, Inc.
tampone imbevuto di alcol (70% alcol isopropilico)	BD	326895
Calibri digitali	ThermoFisher Scientific	14-648-17
bisturi monouso, applicatori sterili	VWR	21909
punta in cotone VWR		89198
ago da sutura, 45 cm, misura 6-0	Harvard Apparatus	72-3308
Ago da sutura, 45 cm, misura 4-0	Apparecchio Harvard	72-3314
Povidone-iodio 10%	BD	29900-404
Cuscinetto riscaldante monouso	KENT SCIENTIFIC CORP.	TP-3E
Tosaerba per topi	KENT SCIENTIFIC CORP.	CL8787
Telo chirurgico	Harvard Apparatus	59-7421
Soluzione salina tamponata con fosfato	ThermoFisher Scientific	10010023

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