Effetti doppi di fattori derivati da cellule di Melanoma su differenziazione adipociti del midollo osseo
Summary
Qui, presentiamo un sistema affidabile e semplice coculture bidimensionale (2D) per studiare l’interazione tra le cellule del tumore e adipociti del midollo osseo, che rivela un duplice effetto di fattori derivati da cellule di melanoma su adipociti del midollo osseo differenziazione e pone anche un metodo classico per lo studio meccanicistico della metastasi dell’osso.
Abstract
Il crosstalk tra adipociti del midollo osseo e le cellule del tumore può giocare un ruolo critico nel processo di metastasi ossee. Una varietà di metodi sono disponibili per studiare il crosstalk significativo; Tuttavia, un sistema di transwell bidimensionale per coculture rimane un classico, affidabile e facile modo per questo studio di diafonia. Qui, presentiamo un protocollo dettagliato che mostra il coculture delle adipociti del midollo osseo e le cellule del melanoma. Tuttavia, un tale sistema di coculture potrebbe non solo contribuire allo studio di trasduzioni segnale cellulare delle cellule di cancro indotte dagli adipociti del midollo osseo, ma anche per il futuro meccanicistico studio della metastasi dell’osso che può rivelare nuovi bersagli terapeutici per osso metastasi.
Introduction
Le metastasi dell’osso sono diffuse fra i pazienti di cancro avanzato, ma un trattamento curativo non è ancora disponibile. Di là di specializzata nella conservazione di energia come grasso, adipociti è in grado di supportare la crescita del tumore e metastasi nel midollo osseo e altri organi1,2,3,4,5,6. Inoltre, adipociti svolgono un ruolo essenziale nella regolazione del cancro cellula biologia7,8,9,10 e metabolismo4,11,12 ,13,14,15,16, come bene come in osso metastasi1,4,12. Nella nicchia del midollo osseo, adipociti possono anche influenzare il comportamento biologico del cancro cellule4,6,17. L’interazione tra adipociti del midollo osseo e le cellule tumorali con osteotropism è significativo per la comprensione della metastasi dell’osso. Tuttavia, piccolo è conosciuto.
Basati sugli studi di correnti, vari metodi vengono applicati ai adipocytes, tra cui bi – o tri – dimensionale (2/3D) ed ex vivo culture17,18,19,20,21. Recentemente, Herroon et al. progettato un nuovo approccio di 3D-cultura per studiare le interazioni degli adipociti del midollo osseo con cancro cellule22. Anche se il 3D coculture è ottimale per mimare fisiologiche interazioni tra adipociti e cancro cellule in vivo, soffre di scarsa riproducibilità22,23. Rispetto ad un sistema di coculture 2D, un sistema di coculture 3D può fornire diversi fenotipi cellulari, come ad esempio cellule morfologia21,22,24,25,26. Inoltre, la cultura ex vivo di frammenti di tessuto isolato cancellous dell’osso può portare a un’escrescenza robusta degli adipociti dal midollo osseo coltivate cellule17.
In contrasto con questi modelli precedenti, tuttavia, il modello della coltura cellulare 2D rimane una tecnica classica, affidabile e facile scansione rapidamente molecole candidate e i fenotipi cambiati in adipociti o cancro cellule in vitro1, 4,6,12,15,27. Per comprendere meglio il crosstalk tra adipociti del midollo osseo e le cellule del melanoma, forniamo un protocollo dettagliato per un sistema di coculture 2D degli adipociti del midollo osseo con cellule di melanoma.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cocultures con inserti sono stati ampiamente usati per studiare le interazioni cellula–cellula. Il sistema di coculture 2D è un modo efficace per osservare come le due parti diafonia in vitro, mediante il quale abbiamo mostrato qui due differenti del cancro delle cellule-guidati effetti sugli adipociti del midollo osseo. Molti laboratori hanno utilizzato questo metodo per indagare il crosstalk tra adipociti e cancro cellule6,12,<sup class="x…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo gentilmente Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israele) per averci fornito le cellule stromali del midollo osseo murino linea 14F1.1. Questo studio è stato sostenuto da sovvenzioni da Fondazione Scienza naturale nazionale cinese (nn. 81771729) e l’Università ospedale di Chongqing Yongchuan medica (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
Materials
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
| Microscopy | Olympus | – | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
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