Hier presenteren we een betrouwbare en eenvoudige tweedimensionale (2D) coculture-systeem voor de studie van de interactie tussen tumorcellen en beenmerg adipocytes, die een dubbele effect van melanoom cel-afgeleide factoren op het beenmerg-adipocytes onthult differentiatie en vormt ook een klassieke methode voor de mechanistische studie van bot metastase.
De Overspraak beenmerg adipocytes à tumorcellen kan spelen een cruciale rol in het proces van bot metastase. Een verscheidenheid van methoden zijn beschikbaar voor de studie van de significante Overspraak; een twee-dimensionale transwell systeem voor coculture blijft echter een klassiek, betrouwbaar, en gemakkelijke manier voor deze studie overspraak. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol waarin de coculture van het beenmerg adipocytes en melanoom cellen. Echter zou zulk een coculture systeem niet alleen bijdragen tot de studie van cel signaal transductions van kankercellen geïnduceerd door het beenmerg adipocytes, maar ook naar de toekomst mechanistische studie van bot metastase, die nieuwe therapeutische streefcijfers voor bot kan onthullen metastase.
Botmetastasen zijn wijdverspreid onder Geavanceerde kankerpatiënten, maar een curatieve behandeling is nog steeds niet beschikbaar. Verder gespecialiseerd in energie op te slaan als vet, kan adipocytes ondersteunen tumorgroei en uitzaaiing in het beenmerg en andere organen1,2,3,4,5,6 Bovendien spelen adipocytes een essentiële rol bij het reguleren van kanker cel biologie7,8,9,10 en metabolisme4,11,12 ,13,14,15,16, zo goed als in bot metastase1,4,12. In de niche van het beenmerg, adipocytes kan ook invloed hebben op de biologische werking van kanker cellen,4,,6,17. Het samenspel tussen het beenmerg adipocytes en kankercellen met osteotropism is belangrijk voor een goed begrip van bot metastase. Echter, er is weinig bekend.
Op basis van de huidige studies, worden verschillende methoden toegepast op adipocytes, met inbegrip van twee – of drie – dimensional (2/3D) en ex vivo culturen17,18,19,20,21. Herroon et al. ontworpen onlangs, een nieuwe aanpak van het 3D-cultuur te bestuderen van interacties van beenmerg adipocytes met kanker cellen22. Hoewel de 3D coculture is optimaal voor het nabootsen van fysiologische interacties tussen adipocytes en kanker cellen in vivo, het lijdt aan slechte reproduceerbaarheid22,23. In vergelijking met een 2D coculture-systeem kunnen een 3D coculture-systeem verschillende cellulaire fenotypen, zoals cel morfologie21,22,24,25,26. Bovendien, de ex vivo cultuur van geïsoleerde spongieuze weefsel fragmenten kan leiden tot een robuuste uitvloeisel van adipocytes van gekweekte beenmerg cellen17.
In tegenstelling tot deze eerdere modellen blijft de 2D cell cultuur model echter een klassieke, betrouwbare en gemakkelijke techniek voor snel scannen van kandidaat-moleculen en de fenotypes veranderd in adipocytes of kanker in vitro1cellen, 4,6,12,15,27. Om beter te begrijpen de Overspraak tussen beenmerg adipocytes en melanoom cellen, bieden wij een gedetailleerd protocol voor een 2D coculture-systeem van het beenmerg adipocytes met melanoom cellen.
Cocultures met inzetstukken hebben wijd gebruikt om te studeren van cel naar cel interacties. Het 2D coculture-systeem is een effectieve manier om te observeren hoe de twee delen Overspraak in vitro, waaraan we hier twee verschillende kanker cel-gedreven effecten op het beenmerg adipocytes toonden. Veel laboratoria hebben gebruikt deze methode om te onderzoeken de Overspraak tussen adipocytes en kanker cellen6,12,27<sup…
The authors have nothing to disclose.
Wij danken Dov Zipori (het Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israël) vriendelijk voor het verstrekken van ons de lymfkliertest beenmerg stromale cel 14F1.1 lijn. Deze studie werd ondersteund door subsidies van de Chinese National Natural Science Foundation (Nos. 81771729) en het Yongchuan ziekenhuis van Chongqing medische universiteit (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
24-well plate | Corning | CLS3527 | |
Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
Culture incubator | Thermo Scientific | ||
50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
Microscopy | Olympus | – | |
200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |