यहां, हम एक विश्वसनीय और सरल दो आयामी (2d) coculture प्रणाली ट्यूमर कोशिकाओं और अस्थि मज्जा adipocytes, जो मेलेनोमा कोशिका की एक दोहरी प्रभाव-अस्थि मज्जा पर व्युत्पंन कारकों का पता चलता है के बीच बातचीत के अध्ययन के लिए प्रस्तुत adipocytes भेदभाव और भी हड्डी मेटास्टेसिस के यंत्रवत अध्ययन के लिए एक क्लासिक विधि बन गया है ।
अस्थि मज्जा adipocytes और ट्यूमर कोशिकाओं के बीच crosstalk हड्डी मेटास्टेसिस की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है । महत्वपूर्ण crosstalk के अध्ययन के लिए विभिंन प्रकार के तरीके उपलब्ध हैं; हालांकि, coculture के लिए एक दो आयामी transwell प्रणाली इस crosstalk अध्ययन के लिए एक क्लासिक, विश्वसनीय, और आसान तरीका रहता है । यहाँ, हम अस्थि मज्जा adipocytes और मेलेनोमा कोशिकाओं के coculture से पता चलता है कि एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । फिर भी, इस तरह के एक coculture प्रणाली न केवल कैंसर अस्थि मज्जा adipocytes द्वारा प्रेरित कोशिकाओं की सेल संकेत transductions के अध्ययन के लिए योगदान कर सकता है, लेकिन हड्डी मेटास्टेसिस के भविष्य यंत्रवत अध्ययन करने के लिए जो हड्डी के लिए नए चिकित्सीय लक्ष्यों को उजागर कर सकते हैं मेटास्टेसिस.
अस्थि मेटास्टेसिस उन्नत कैंसर रोगियों के बीच व्यापक हैं, लेकिन एक उपचारात्मक उपचार अभी भी अनुपलब्ध है । वसा के रूप में ऊर्जा भंडारण में विशेषज्ञता के अलावा, adipocytes अस्थि मज्जा और अन्य अंगों में ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस का समर्थन कर सकते हैं1,2,3,4,5,6. इसके अलावा, adipocytes कैंसर कोशिका जीवविज्ञान7,8,9,10 और चयापचय4,11,12 को विनियमित करने में एक आवश्यक भूमिका निभा ,13,14,15,16, साथ ही अस्थि मेटास्टेसिस1,4,12में । अस्थि मज्जा आला में, adipocytes भी कैंसर कोशिकाओं के जैविक व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं4,6,17. अस्थि मज्जा adipocytes और osteotropism के साथ कैंसर कोशिकाओं के बीच एक साथ खेलना हड्डी मेटास्टेसिस की समझ के लिए महत्वपूर्ण है । हालांकि, थोड़ा जाना जाता है ।
वर्तमान अध्ययन के आधार पर, विभिन्न तरीकों adipocytes करने के लिए लागू कर रहे हैं, दो या तीन आयामी सहित (2/3d) और पूर्व vivo संस्कृतियों17,18,19,20,21. हाल ही में, Herroon एट अल । 22कैंसर कोशिकाओं के साथ अस्थि मज्जा adipocytes की बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक नया 3d संस्कृति दृष्टिकोण बनाया. हालांकि 3 डी coculture vivo मेंadipocytes और कैंसर कोशिकाओं के बीच शारीरिक बातचीत नकल उतार के लिए इष्टतम है, यह गरीब reproducibility22,23से ग्रस्त है । एक 2d coculture प्रणाली की तुलना में, एक 3d coculture सिस्टम विभिन्न सेलुलर phenotypes प्रदान कर सकता है, जैसे कक्ष आकृति विज्ञान21,22,24,25,26. इसके अलावा, अलग रद्द हड्डी ऊतक टुकड़े के पूर्व vivo संस्कृति adipocytes की एक मजबूत वृद्धि करने के लिए नेतृत्व कर सकते है संस्कृतिपूर्ण अस्थि मज्जा17कोशिकाओं से ।
इन पिछले मॉडल के विपरीत, तथापि, 2d सेल संस्कृति मॉडल एक क्लासिक, विश्वसनीय, और आसान तकनीक के लिए जल्दी से उंमीदवार अणुओं स्कैनिंग और phenotypes में या तो adipocytes या इन विट्रो मेंकैंसर की कोशिकाओं में बदल गया रहता है1, 4,6,12,15,27. बेहतर अस्थि मज्जा adipocytes और मेलेनोमा कोशिकाओं के बीच crosstalk को समझने के लिए, हम adipocytes कोशिकाओं के साथ अस्थि मज्जा मेलेनोमा के एक 2d coculture प्रणाली के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं ।
सम्मिलन के साथ Cocultures सेल-टू-सेल इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया गया है. 2d coculture प्रणाली एक प्रभावी तरीका है निरीक्षण कैसे दो इन विट्रो मेंcrosstalk भागों, जिसके द्वारा हम यहां दो अलग कै?…
The authors have nothing to disclose.
हम Dov Zipori (विज्ञान के Weizmann संस्थान, Rehovot, इज़राइल) कृपया हमें murine अस्थि मज्जा stromal सेल लाइन 1.1 14f प्रदान करने के लिए धंयवाद । इस अध्ययन से अनुदान द्वारा समर्थित चीनी राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (८१७७१७२९) और चोंगकिंग चिकित्सा विश्वविद्यालय के Yongchuan अस्पताल (नग. YJQN201330; YJZQN201527) ।
DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
24-well plate | Corning | CLS3527 | |
Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
Culture incubator | Thermo Scientific | ||
50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
Microscopy | Olympus | – | |
200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |