Efectos duales de factores derivados de células de Melanoma en la diferenciación de adipocitos de médula ósea
Summary
Aquí, presentamos un sistema de cocultivo (2D) bidimensional sencillo y confiable para el estudio de la interacción entre las células del tumor y adipocitos de médula ósea, que revela un doble efecto de factores derivados de células de melanoma en los adipocitos de la médula ósea diferenciación y también representa un método clásico para el estudio mecanístico de la metástasis del hueso.
Abstract
La diafonía entre los adipocitos de la médula ósea y las células del tumor puede jugar un papel fundamental en el proceso de metástasis del hueso. Una variedad de métodos están disponibles para el estudio de la interferencia significativa; sin embargo, un sistema de dos dimensiones transwell cocultivo sigue siendo un clásico, fiable y fácil para este estudio de la diafonía. Aquí, presentamos un protocolo detallado que muestra el cocultivo de los adipocitos de la médula ósea y las células del melanoma. Sin embargo, un sistema de cocultivo podría no sólo contribuir al estudio de transducciones de señales celulares de las células de cáncer inducidas por adipocitos de médula ósea, pero también al futuro mecanicista estudio de metástasis de hueso que puede revelar nuevas dianas terapéuticas para el hueso metástasis.
Introduction
Las metástasis óseas son frecuentes entre pacientes con cáncer avanzado, pero un tratamiento curativo no está todavía disponible. Más allá de especializado en almacenar energía como grasa, adipocitos pueden apoyar el crecimiento del tumor y metástasis en médula ósea y otros órganos1,2,3,4,5,6. Por otra parte, adipocitos desempeñan un papel esencial en la regulación del cáncer celular biología7,8,9,10 y metabolismo4,11,12 ,13,14,15,16, como así como en hueso metástasis1,4,12. En el nicho de la médula ósea, los adipocitos también pueden afectar el comportamiento biológico del cáncer las células4,6,17. La interacción entre los adipocitos de la médula ósea y las células cancerosas con osteotropism es importante para entender la metástasis del hueso. Sin embargo, poco se sabe.
Basado en los estudios actuales, diversos métodos se aplican a los adipocitos, incluyendo dos o tres dimensiones (2/3D) y ex vivo culturas17,18,19,20,21. Recientemente, Herroon et al. diseñado un nuevo enfoque de la cultura de 3D para el estudio de las interacciones de los adipocitos de la médula ósea con células de cáncer22. Aunque el cocultivo 3D es óptimo para mímico fisiológica interacciones entre adipocitos y el cáncer de células en vivo, sufre una pobre reproducibilidad22,23. En comparación con un sistema de cocultivo 2D, un sistema de cocultivo 3D puede proporcionar diferentes fenotipos celulares, como células morfología21,22,24,25,26. Además, el cultivo ex vivo de fragmentos de tejido aislado de hueso esponjoso puede conducir a un resultado robusto de adipocitos cultivados médula células17.
En contraste con los modelos anteriores, sin embargo, el modelo de cultivo celular 2D sigue siendo una técnica clásica, fiable y fácil para escanear rápidamente moléculas de candidato y los fenotipos cambiados en adipocitos o cáncer células in vitro1, 4,6,12,15,27. Para entender mejor la diafonía entre los adipocitos de la médula ósea y las células del melanoma, proporcionamos un protocolo detallado para un sistema de cocultivo 2D de los adipocitos de la médula ósea con células de melanoma.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cocultures con inserciones han sido ampliamente utilizados para el estudio de las interacciones célula a célula. El sistema de cocultivo 2D es un modo eficaz de observar cómo las dos piezas diafonía en vitro, por la que aquí mostramos dos diferentes basados en celular efectos en los adipocitos de la médula ósea. Muchos laboratorios han utilizado este método para investigar la diafonía entre los adipocitos y cáncer células6,12,<sup c…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a Dov Zipori (el Instituto Científico Weizmann, Rehovot, Israel) amablemente nos proporciona las células estromales de médula ósea murina línea 14F1.1. Este estudio fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias naturales (Nº 81771729) China y la Universidad Hospital de Yongchuan de Chongqing médica (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
Materials
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
| Microscopy | Olympus | – | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
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