Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

مسح الحفاز لمصنع الأكسجين التفاعلية الأنواع في فيفو بجسيمات نانوية أكسيد السيريوم أنيونى

Published: August 26, 2018 doi: 10.3791/58373
Automatic Translation
*1,2, *1, 1, 1,2
1Department of Botany and Plant Sciences, University of California, 2Department of Microbiology and Plant Pathology, University of California
* These authors contributed equally

Summary

نقدم هنا، على بروتوكول للتوليف وتوصيف جسيمات نانوية أكسيد السيريوم الرباعي (نانوسيريا) لروس (أنواع الأكسجين التفاعلية) المسح في فيفو، نانوسيريا التصوير في الأنسجة النباتية بالفحص المجهري [كنفوكل]، و في فيفو رصد نانوسيريا روس الكسح بالفحص المجهري [كنفوكل].

Abstract

تراكم الأنواع (روس) الأكسجين التفاعلية السمة مميزة لاستجابة الإجهاد اللاأحيائية النبات. روس دور مزدوج في النباتات بوصفها إشارات الجزيئات عند مستويات منخفضة، وإلحاق أضرار بالجزيئات في المستويات العليا. يمكن أن تلحق الضرر تراكم روس في النباتات وأكد نواتج الأيض والأنزيمات والدهون والحمض النووي، مما تسبب في انخفاض نمو النبات والمحصول. ويوفر قدرة جسيمات نانوية أكسيد السيريوم الرباعي (نانوسيريا) مسح حفازة روس في فيفو أداة فريدة من نوعها لفهم والتسامح الإجهاد اللاأحيائية مصنع بيونجينير. نقدم هنا، بروتوكولا لتوليف وتميز بولي (اﻷكريليك) حمض نانوسيريا المغلفة (المجلس الوطني الفلسطيني)، وواجهة جسيمات نانوية مع النباتات عن طريق أوراق الصفيحة التسلل ومراقبة توزيع وروس المسح في فيفو استخدام [كنفوكل] الفحص المجهري. تقتصر على الأنواع النموذجية الحالية الأدوات الجزيئية لمعالجة تراكم روس في النباتات وتتطلب طرق التحويل شاقة. هذا البروتوكول للمسح في فيفو روس لديه القدرة على تطبيقها على النباتات البرية نوع مع أوراق عريضة وبنية أوراق مثل نبات التمويل.

Introduction

جسيمات نانوية أكسيد السيريوم الرباعي (نانوسيريا) تستخدم على نطاق واسع في الكائنات الحية، من البحوث الأساسية للهندسة البيولوجية، نظراً للأنواع الأكسجين التفاعلية الحفاز متميزة فيها (روس) مسح قدرة1،،من23. وقد نانوسيريا روس الكسح قدراتهم بسبب عدد كبير من الشواغر الأكسجين السطحية التي بالتناوب بين اثنين أكسدة الدول (م3 + م4 +) و 4،،من56. م3 + التعلق السندات فعالية مسح روس بينما سلالات شعرية في النانو النهوض بالتجديد لهذه المواقع عيب عن طريق الأكسدة الدراجات ردود الفعل7. كما استخدمت نانوسيريا مؤخرا لدراسة والهندسة النباتية الدالة8،9. النباتات تحت الإجهاد اللاأحيائية تجربة تراكم روس، مما تسبب في أضرار الأكسدة للدهون والبروتينات والحمض النووي10. في النباتات (أ) التمويل ، ومسح نانوسيريا الحفاز لروس في فيفو يؤدي إلى تحسين النباتات التمثيل الضوئي تحت الضوء العالي والحرارة وتقشعر لها اﻷبدان تشدد على8. نانوسيريا تطبيق التربة أيضا زيادات تبادل لإطلاق النار غلة الكتلة الحيوية والحبوب من القمح (aestivum قمح)11؛ نباتات الكانولا (كرنب نابوس) تعامل مع نانوسيريا يكون أعلى من الكتلة الحيوية النباتية تحت الضغط الملح12.

نانوسيريا تقدم مهندسو البيولوجيا والنباتية علماء الأحياء أداة تستند إلى تكنولوجيا النانو لفهم استجابات الإجهاد اللاأحيائية وتعزيز التسامح الإجهاد اللاأحيائية النبات. قدرات المسح في فيفو نانوسيريا بروس مستقلة من الأنواع النباتية، وإيصال السطحية في الأنسجة النباتية لديه القدرة على تمكين تطبيق واسع خارج نموذج الكائنات الحية. على عكس الأساليب الأخرى المستندة إلى وراثيا، نانوسيريا لا تتطلب توليد خطوط النباتات مع overexpression الإنزيمات المضادة للأكسدة لأعلى روس الكسح قدرة13. تسلل الصفيحة نبات نانوسيريا النباتات نهج عملي للأبحاث المستندة إلى المعمل.

والهدف العام من هذا البروتوكول وصف 1) التوليف وتوصيف مشحونة سلبا بولي (اﻷكريليك) حمض نانوسيريا (المجلس الوطني الفلسطيني)، 2) التسليم وتتبع للشرطة المدنية الوطنية في جميع أنحاء خلايا ورقة، و 3) رصد الكسح روس تمكين الشرطة الوطنية الكونغولية في فيفو. في هذا البروتوكول، وتوليفها مشحونة سلبا بولي (اﻷكريليك) حمض نانوسيريا (المجلس الوطني الفلسطيني) ويتميز بطيف امتصاص وقطرها هيدرودينامية زيتا المحتملة. يصف لنا أسلوب تسلل الصفيحة ورقة بسيطة لتسليم الشرطة الوطنية الكونغولية في مصنع أنسجة نبات. في فيفو تصوير نانوحبيبات التوزيع داخل الخلايا mesophyll، استخدمت صبغة فلورسنت (دي) تسمية المجلس الوطني الفلسطيني (دي-المجلس الوطني الفلسطيني) والتقيد جسيمات نانوية عبر الفحص المجهري الأسفار [كنفوكل]. وأخيراً، نحن تشرح كيفية رصد في فيفو الكسح روس المجلس الوطني الفلسطيني عن طريق الفحص المجهري [كنفوكل].

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-زراعة نباتات ألف-التمويل

  1. زرع بذور (أ) التمويل في الأواني يمكن التخلص منها 5 سم × 5 سم مليئة بمزيج التربة القياسية. وضع 32 من هذه الأواني في علبة بلاستيكية مملوءة بالماء (~ عمق 0.5 سم) ونقل علبة بلاستيكية مع النباتات في حجرة نمو نبات.
    1. تعيين إعدادات الدائرة في النمو كما يلي: 200 µmol/ms التمثيل الضوئي النشطة (الاسمية)، 24 ± 1 درجة مئوية يوم والإشعاعية و 21 ± 1 درجة مئوية ليلة، الرطوبة 60%، 14/10 ح ليلة يوم/نظام الخفيفة، على التوالي.
  2. رقيقة كل وعاء ترك النباتات الفردية واحد فقط بعد أسبوع واحد من الإنبات. علما أن تبقى الشتلات مع حجم مماثل في كل وعاء.
  3. المياه الأواني بماء الصنبور يصب مباشرة في علبة بلاستيكية مرة كل يومين. تنمو النباتات لمدة أربعة أسابيع. (أ) التمويل النباتات جاهزة للاستخدام.

2-تجميع وتوصيف للشرطة الوطنية الكونغولية

  1. تزن 1.08 g نترات السيريوم (ثالثا) وتذوب في 2.5 مل مياه الصف البيولوجيا الجزيئية في أنبوب 50 مل مخروطية الشكل.
  2. تزن 4.5 غرام حمض بولي (اﻷكريليك) ويحل عليه في 5 مل الماء الصف البيولوجيا الجزيئية في أنبوب 50 مل مخروطية.
  3. مزيج من هذين الحلين جيدا في 2,000 لفة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة باستخدام خلاط دوامة رقمية.
  4. نقل 15 مل من محلول هيدروكسيد الأمونيوم (7.2 م) إلى كوب زجاج 50 مل.
  5. بينما التحريك عند 500 دورة في الدقيقة، إضافة الخليط من 2.3 خطوة دروبويسي حل هيدروكسيد الأمونيوم ويقلب 500 لفة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة على مدار 24 ساعة في غطاء دخان.
  6. تغطية الكأس بقطعة من الورق لتجنب خسارة كبيرة لحل أثناء عملية التفاعل بين عشية وضحاها.
  7. بعد 24 ساعة، نقل الحل الناتج لأنبوب مخروطي 50 مل والطرد المركزي أنه في 3,900 س ز ح 1 لإزالة أي الحطام الممكنة واجلمرتر الكبيرة.
  8. نقل هذا 22.5 مل من محلول طافية في ثلاث مرشحات كاتشين 15 مل 10 وملء ما تبقى من عامل التصفية مع المياه الصف الجزيئية لجعل إضعاف إجمالي 45 مل.
  9. تنقية الحل طافية من البوليمرات حرة وأخرى الكواشف مع benchtop أجهزة الطرد مركزي بإضافة المادة طافية إلى 15 مل 10 كاتشين التصفية والطرد المركزي في 3,900 س ز على 15 دقيقة كرر هذه الخطوة ست مرات على الأقل.
  10. قياس امتصاص الوينت في كل دورة مع تجاه الأشعة فوق البنفسجية جهاز المطياف الضوئي من 220-700 نانومتر لضمان لا البوليمرات مجاناً والكواشف الأخرى موجودة في المجلس الوطني الفلسطيني الحل النهائي.
  11. تأخذ حل المجلس الوطني الفلسطيني التي تم جمعها في المحاقن 5 مل وتصفية ضد مرشح حقنه حجم مسام نانومتر 20. جمع حل المجلس الوطني الفلسطيني التي تمت تصفيتها في أنبوب 50 مل مخروطية الشكل.
  12. أن حل المجلس الوطني الفلسطيني نهائي مخفف في ومبومو بلاستيك وقياس امتصاص لها مع جهاز المطياف الضوئي الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة من 220-700 نانومتر. ذروة امتصاص الشرطة الوطنية الكونغولية في 271 شمال البحر الأبيض المتوسط.
  13. حساب تركيزه باستخدام قانون بير-لامبرت: A = εCL. هو امتصاص قيمة الذروة لنموذج معين و ɛ هو معامل الامتصاص المولى للشرطة المدنية الوطنية (سم-1 م-1)، L هو طول المسار الضوئي (عرض ومبومو, 1 سم في هذا الأسلوب) و C هو التركيز المولى لجسيمات نانوية المقاسة.
  14. قياس القطر هيدرودينامية وإمكانات زيتا للمجلس الوطني الفلسطيني المركب استخدام محلل جسيمات الحجم وزيتا محتملة (الشكل 1).
  15. تخزين حل المجلس الوطني الفلسطيني النهائي في ثلاجة (4 درجات مئوية) حتى استخدامها مرة أخرى.
    ملاحظة: يرجى الرجوع إلى وو وآخرون. 8 للحصول على مزيد من التفاصيل البروتوكول حول توصيف المجلس الوطني الفلسطيني.

3-تسمية المجلس الوطني الفلسطيني بصبغة الفلورسنت دي

  1. مزيج 0.4 مل من 5 مم (58 مغ/لتر) المجلس الوطني الفلسطيني مع 3.6 مل البيولوجيا الجزيئية المياه الصف في قنينة زجاج 20 مل وآثاره 500 لفة في الدقيقة.
  2. إضافة 24 ميليلتر 1، 1 '-ديوكتاديسيل-3,3، 3'، 3 '-تيتراميثيليندوكاربوسيانيني فوق كلورات صبغ الحل (دي، 2.5 ملغ/مل؛ مخفف في [دمس]) إلى 176 ميليلتر من [دمس] (ثنائي ميثيل سلفوكسيد) لجعل الحل صبغ دي.
  3. إضافة الصبغة دي دروبويسي في حل المجلس الوطني الفلسطيني، إثارة 1,000 لفة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. نقل هذا الخليط الناتج إلى عامل تصفية 15 مل 10 كاتشين وملء الأنبوب إلى الأعلى مع البيولوجيا الجزيئية الصف المياه جعل إضعاف إجمالي 15 مل.
  5. نق دي المسمى حل المجلس الوطني الفلسطيني (دي-الشرطة المدنية الوطنية) من [دمس] وصبغ دي أية ممكن مجاناً بالطرد المركزي benchtop مع مرشح كاتشين 15 مل 10 في 3,900 س ز لمدة 5 دقائق.
    1. كرر "الخطوة 3، 5" خمس مرات على الأقل.
  6. تصفية الحلول دي-الشرطة المدنية الوطنية النهائية من خلال مرشح حقنه حجم مسام نانومتر 20.
  7. قياس امتصاص النهائية دي-الشرطة المدنية الوطنية التي كانت تجاه الأشعة فوق البنفسجية وحساب تركيزها وفقا لقانون بير-لامبرت (الشكل 2). انظر 2.13 خطوة لمزيد من التفاصيل.
  8. تخزينه في ثلاجة عند درجة 4 مئوية لاستخدامها مرة أخرى.

4-تسلل النبات يترك مع الشرطة الوطنية الكونغولية

  1. إضافة 0.1 مل تسلل المخزن المؤقت (100 مم تدريب الإحصائيين الأوروبيين، 100 مم مجكل2، الرقم الهيدروجيني 7.5، ضبط بواسطة HCl) إلى 0.9 مل حل المجلس الوطني الفلسطيني أو دي-الشرطة المدنية الوطنية 0.5 مم ودوامه عليه. استخدام حل 10 ملم الامتحانات تسلل المخزن المؤقت كعنصر سلبي.
  2. نقل 0.2 مل الحل تسلل الشرطة المدنية الوطنية أو دي-الشرطة المدنية الوطنية لحقنه 1 مل needleless عقيمة. انقر لإزالة أي فقاعات الهواء ممكن.
  3. استرداد المصنع من دائرة النمو قبل التسلل مع جسيمات نانوية لتجنب إغلاق الثغور ممكن تحت ظروف الإضاءة في الغرفة.
  4. قبل التسلل، قياس محتوى الكلوروفيل من أوراق التمويل (أ) مع حجم مماثل باستخدام مقياس الكلوروفيل. قياس كل ورقة مع ثلاثة replicates (كل تكرار تتألف من ثلاثة على الأقل من القياسات)14. اختر التمويل (أ) يترك مع محتوى الكلوروفيل مشابهة للتجربة تسلل.
  5. اختراق الأوراق ببطء مع حل المجلس الوطني الفلسطيني أو دي-المجلس الوطني الفلسطيني استعداد مؤخرا بالضغط بلطف غيض المحاقن needleless ضد أسفل الصفيحة ليف (الجانب أباكسيال) وكساد المكبس (الشكل 3أ).
  6. بلطف تمحو الحل الزائدة التي تبقى على سطح أوراق الصفيحة (الشكل 3ب) استخدام ممسحة مهمة حساسة (الشكل 3ج) وتسمية النبات. استخدام مناديل جديدة مهمة دقيقة لكل مجموعة من الأوراق.
  7. إبقاء النباتات تسلل التمويل (أ) على مقاعد البدلاء للتكيف أوراق والحضانة مع الشرطة الوطنية الكونغولية أو دي-الشرطة المدنية الوطنية ح 3.
    ملاحظة: ثم يتم النباتات تسلل التمويل (أ) جاهزة للاستخدام (الشكل 3د).

5-إعداد أوراق عينات مجهرية [كنفوكل]

  1. لفة كمية حجم البازلاء من المراقبة جل لحول دائرة نصف قطرها 1 سم (الشكل 4أ) وثم انتشرت أنه حتى يتم 1 mm رقيقة على شريحة زجاج (الشكل 4ب).
  2. استخدام حفار فلين (قطرها 0.3 سم) لقطع مقطع دائري في المركز جل المراقبة على الشريحة الزجاجية (الشكل 4ج).
  3. شغل القص جيدا تماما مع بيروفلوروديكالين (PFD) لقرار التصوير أعمق وأفضل [كنفوكل] في أنسجة نبات.
  4. استخدام حفار فلين (قطرها 0.2 سم) لجمع أوراق أقراص من تكييف دي-المجلس الوطني الفلسطيني تسلل إلى محطات التمويل (أ) (الشكل 4د).
  5. تحميل القرص ليف في PFD شغلها جيدا؛ مواجهة الجانب (أباكسيال) تسلل من الورقة.
  6. وضع ساترة مربعة على رأس القرص أوراق، واضغط برفق على ساترة الشرائح بالتساوي إلى ختم ذلك ببئر جل المراقبة وضمان لا فقاعات الهواء تظل حبيسة (الشكل 4ه).

6-تصوير دي-الشرطة المدنية الوطنية في أنسجة نبات بالفحص المجهري [كنفوكل]

  1. استخدام عدسة هدف X 40 في ليزر مقلوب المسح مجهر [كنفوكل].
  2. إسقاط اثنين إلى ثلاثة قطرات من ddH2س على رأس العدسة الهدف X 40.
  3. ضع أوراق دي-المجلس الوطني الفلسطيني تسلل إلى استعداد عينة الشريحة على رأس 40 مقلوب X عدسة موضوعية.
    1. تأكد من الجانب ساترة ولكن لا الزجاج شريحة الاتصال مباشرة مع ddH2س على العدسة.
  4. العثور على طقة فائدة في العينة تحت المجهر مع أشعة الليزر أو حقل مشرق.
  5. بدء تشغيل البرنامج مجهر وتشغيل ليزر الأرجون (تعيين 20%).
  6. تعيين الثقب لجمع شريحة ضوئية أقل من 2 ميكرون ويكون متوسط سطر 4.
  7. صورة العينة مع إعدادات مجهر [كنفوكل]: 514 nm الليزر الإثارة (30 في المائة)؛ سمك مقطع المكدس Z: 2 ميكرومتر؛ PMT1: 550-615 نانومتر (لتصوير دي-الشرطة المدنية الوطنية)؛ PMT2: 700-800 نانومتر (لتصوير بلاستيدات الخضراء).
  8. التقاط صور [كنفوكل] الممثل ليف عينات من مختلف الأفراد، كحد أدنى من ثلاث البيولوجية وإنشاء نسخ متماثلة.

7-التصوير الشرطة الوطنية الكونغولية في فيفو "روس الكسح" بالفحص المجهري [كنفوكل]

  1. إعداد 25 ميكرومتر 2 '، 7-ديتشلوروديهيدروفلوريسسين اسيتات (ح2دكفدا، صبغة لتشير إلى روس عامة) وديهيدروثيديوم 10 ميكرون (DHE، صبغة لتشير إلى انيون دسموتاز) الأصباغ في قسم التدريب والامتحانات تسلل المخزن المؤقت (درجة الحموضة 7.5) في أنابيب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، بشكل منفصل.
  2. استخدام حفار فلين (قطرها 0.2 سم) لجمع أوراق تسلل أقراص من المجلس الوطني الفلسطيني تكييف النباتات التمويل (أ) .
    1. استخدام تلميح الملقط حادة لجعل ثلاثة أو أربعة ثقوب على أقراص أوراق للتعجيل بصبغة عملية التحميل.
  3. نقل الورقة أقراص لأنابيب ميكروسينتريفوجي مع ح2دكفدا و DHE كل على حدة، واحتضان لمدة 30 دقيقة تحت الظلام.
  4. بعد الحضانة، هلام شطف الورقة أقراص مع ddH2س ثلاث مرات وجبل إلى الزجاج الشريحة مع المراقبة (انظر البروتوكول القسم 5).
  5. وضع الشريحة على المجهر [كنفوكل] والتركيز يدوياً إلى منطقة من نبات mesophyll الخلايا. انظر البروتوكول القسم 6 للحصول على التفاصيل.
  6. تعرض الأقراص أوراق للأشعة فوق البنفسجية-أ (405 نانومتر) ليزر لمدة 3 دقيقة لتوليد روس وسجل تغيير كثافة إشارة روس في السلسلة الزمنية ("زيت") في أوراق القرص.
  7. صورة القرص ليف مع إعدادات مجهر [كنفوكل]: 40 X المياه الهدف؛ 496 الإثارة الليزر نانومتر؛ PMT1: 500-600 نانومتر (DHE ودكفدا صبغة الكشف عن)؛ PMT2: 700-800 نانومتر (للكشف عن المعايشة). استخدام نبات تسلل تسلل المخزن المؤقت الحل فقط كعنصر سلبي.

8-مسح المجلس الوطني الفلسطيني "من ح"2س2في المختبر

  1. إجراء النشاط mimetic القط (الكاتالاز) لمركبة الشرطة الوطنية الكونغولية في المختبر باتباع الأساليب في المنشورات السابقة3،،من815
  2. إضافة 45.4 ميليلتر من 1 x TES تسلل المخزن المؤقت (10 مم قسم التدريب والامتحانات، مجكل 10 مم2، الرقم الهيدروجيني 7.5، ضبط بواسطة HCl)، المجلس الوطني الفلسطيني (60 نانومتر، 3 ميليلتر)، وح2س2 (2 ميكرومتر، 1 ميليلتر) في بئر (لوحة جيدا أسفل جولة أبيض 96)، ومزجها بلطف بيبيتينج.
  3. إضافة 10-أسيتيل-3.7-ديهيدروكسيفينوكسازيني (العامل تركيز 100 ميكرومتر، 0.5 ميليلتر) والفجل البيروكسيديز (HRP؛ العامل تركيز 0.2 U/mL، ميليلتر 0.1) في البئر، بلطف أنها مزيج من بيبيتينج، واحتضان من أجل الحد الأدنى 30 10-أسيتيل-3.7-ديهيدروكسيفينوكسازيني ويتفاعل مع ح2س2 ويتم تحويلها إلى ريسوروفين حضور برنامج الصحة الإنجابية.
    1. التفاف اللوحة مع رقائق الألومنيوم لتجنب الضوء أثناء الاحتضان.
    2. إعداد عنصر تحكم سلبية باستخدام المياه أو رد فعل المخزن المؤقت ليحل محل ح2س2.
    3. باستثناء الحل المخزون، إعداد جميع الحلول الأخرى في درجة حرارة الغرفة.
  4. بعد الحضانة، مع قارئ لوحة، رصد امتصاص في 560 نانومتر ﻻستخدام ريسوروفين للإشارة إلى مستوى ح2س2. تعيين وقت النظام في 0، 2، 5، 10 و 20 و 30 دقيقة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

خلاصة المجلس الوطني الفلسطيني وتوصيف .
المجلس الوطني الفلسطيني تم تصنيعه وتنقيته وتتميز التالية الطريقة الموصوفة في البروتوكول الباب 2. الشكل 1 أ يظهر تلون حلول نترات السيريوم وأجزاء من الكمية المخصصة، الخليط من نترات السيريوم وأجزاء من الكمية المخصصة، والمجلس الوطني الفلسطيني. ويعتبر تغيير لون من الأبيض إلى الضوء الأصفر بعد المجلس الوطني الفلسطيني يتم تصنيعه. بعد تنقية مع عامل تصفية 10 كاتشين، اتسمت الشرطة الوطنية الكونغولية مع جهاز المطياف الضوئي تجاه الأشعة فوق البنفسجية. ولوحظ ذروة امتصاص للشرطة الوطنية الكونغولية في 271 شمال البحر الأبيض المتوسط (الشكل 1ب). كما تم قياس الوينت النهائي مع الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة للتأكد من أن المواد الكيميائية غير رد تم غسلها أثناء التنقية. تم قياس القطر هيدرودينامية وإمكانات زيتا للشرطة المدنية الوطنية المركبة مع محلل جسيمات تحجيم وزيتا محتملة (الشكل 1ج).

وصف المجلس الوطني الفلسطيني مع الصبغة دي .
لتحديد توزيع الجسيمات النانوية في فيفو، كانت المسماة المجلس الوطني الفلسطيني مع صبغة فلورسنت دي اتباع الطريقة الموضحة في قسم البروتوكول 3. صبغ دي يدمج داخل الشرطة الوطنية الكونغولية الطلاء تلقائياً نظراً لأنه يمكن أن تغلف في المجالات مسعور داخل الطلاء البوليمر نانوسيريا16. بعد إضافة صبغة دي بحل المجلس الوطني الفلسطيني، تغيير لون سريع إلى الوردي لوحظ (الشكل 2أ). دي المسماة المجلس الوطني الفلسطيني كانت ثم تنقيته مع عامل تصفية كاتشين 10 وتتميز كانت تجاه الأشعة فوق البنفسجية. وقد لوحظت ثلاث قمم واضحة من امتصاص دي المسماة المجلس الوطني الفلسطيني (الشكل 2ب). كان يقاس الوينت النهائية كانت الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة للتأكد من أن المواد الكيميائية غير رد فعل قد جرفت أثناء التنقية.

نبات الصفيحة تسلل.
تم تسليم المجلس الوطني الفلسطيني أو دي-الشرطة المدنية الوطنية في التمويل (أ) ورقة نبات الصفيحة الأسلوب التسلل عبر كما هو موضح في القسم 4 البروتوكول. وكان تسلل ليف في أربعة أماكن مختلفة لضمان تمت perfused منطقة نبات كامل مع حل المجلس الوطني الفلسطيني (الشكل 3أ). تمت إزالة أي حل المتبقية من سطح ورقة (الشكل 3ب و 3 ج). لون أوراق تغيرت خلال عمليات تسلل من الأخضر إلى الأخضر أغمق (الشكل 3د). تم الضغط حقنه بلطف ضد الورقة لتجنب أي ضرر مادي.

أوراق إعداد العينة للفحص المجهري الأسفار.
عينات أوراق قد شنت على الشرائح الزجاجية داخل جل مراقبة التي شغلها جيدا مع PFD. بعد المتداول هلام مراقبة حجم البازلاء على الشريحة (الشكل 4أ و 4B)، قدم جيدا في وسط جل مسطحة (الشكل 4ج). ثم نقل القرص أوراق طازجة إلى البئر سبق مليئة بحل PFD (الشكل 4د). ساترة استخدمت لشل أوراق العينة على الشريحة (الشكل 4ه).

تصوير [كنفوكل] المجراة في دي-الشرطة المدنية الوطنية .
واستخدمت أوراق التمويل أ- دي-المجلس الوطني الفلسطيني تسلل لتحديد توزيع دي-الشرطة المدنية الوطنية في نبات mesophyll الخلايا عن طريق تصوير [كنفوكل] (الشكل 5ألف و 5B). تصور كولوكاليزيشن بين دي-الشرطة المدنية الوطنية والمعايشة، كانت متحمس عينات أوراق دي-المجلس الوطني الفلسطيني تسلل مع ليزر نانومتر 514. انبعاث دي-الشرطة المدنية الوطنية بمبلغ 550-615 نانومتر لتجنب أي تداخل محتمل من إشارات أصباغ بلاستيدات الخضراء بعد ~ 650 نانومتر17. تم الكشف عن السيارات-الأسفار الكلوروفيل من الجبيلة من 700-800 نانومتر. تم تعيين إعدادات التصوير [كنفوكل] (طاقة الليزر وكسب) للتأكد من أن تم الكشف عن لا إشارات صبغ دي في نموذج ورقة عنصر تحكم (تسلل مع المخزن المؤقت فقط) (الشكل 5ج). ويمكن ملاحظة كولوكاليزيشن دي-الشرطة المدنية الوطنية مع المعايشة في خلايا أوراق mesophyll بصورة تراكب المكتشفة دي-الشرطة المدنية الوطنية وبلاستيدات الخضراء صبغة أوتوفلوريسسينسي (الشكل 5د).

تصوير [كنفوكل] من الشرطة الوطنية الكونغولية روس المسح في فيفو .
سلمت الشرطة المدنية الوطنية في 10 ملم الامتحانات المخزن المؤقت الحل في أوراق ألف-التمويل عبر طريقة تسلل الصفيحة نبات كما هو موضح في قسم البروتوكول 7. DHE (ديهيدروثيديوم) وح2دكفدا (2 '، اسيتات ديتشلوروديهيدروفلوريسسين 7') الفلورية الأصباغ تستخدم لتصور روس في الأنسجة النباتية8،18. ح2دكفدا المعروف لتحويلها إلى DCF الفلورسنت (2 '، ديتشلوروفلوريسسين 7'، مؤشرا على درجة الأكسدة عامة) نظراً للانقسام والمجموعات خلات بروس19. DHE صبغة أكثر تحديداً لأكسيد فائق زيادة شاردة الحاجة إلى منتج الفلورسنت (2-هيدروكسيثيديوم) عند التفاعل مع انيون دسموتاز20. في فيفو رصد روس الكسح ممكنة من الشرطة الوطنية الكونغولية في أقراص أوراق قياس DHE والمخصوم صبغ fluorescence كثافة التغيرات (الأرقام 6 ألف و 6 باء). المجلس الوطني الفلسطيني تسلل إلى أوراق كانت متحمس عينات مع 496 نانومتر الليزر. الانبعاث لصبغ DHE ومنتدى التعاون الإنمائي بمبلغ 500-600 نانومتر لتجنب أي تداخل محتمل مع إشارات السيارات-الأسفار بلاستيدات الخضراء. تم الكشف عن السيارات صباغ-الأسفار من الجبيلة من 700-800 نانومتر. بعد التأكيد على 3 دقائق للأشعة فوق البنفسجية، إشارات صبغ روس في المجلس الوطني الفلسطيني وتسللت إلى المخزن المؤقت-عينات أوراق تم رصدها بشكل منفصل. بالمقارنة مع سيطرة المخزن المؤقت لا نانوحبيبات (NNP)، تسللت إلى المجلس الوطني الفلسطيني يترك أظهرت إلى حد كبير أقل المنشط روس الفلورسنت DCF صبغ إشارة (الشكل 6A). كما وجدت نتائج مماثلة مع فائق أكسيد تنشيط شاردة صبغ DHE، حيث كان يترك المجلس الوطني الفلسطيني تسلل إلى كثافة صبغة DHE أقل بكثير مما تسلل إلى المخزن المؤقت يترك التحكم (الشكل 6ب).

القط الشرطة الوطنية الكونغولية mimetic نشاط الإنزيم . ووصفت المقايسة للشرطة الوطنية الكونغولية الكسح ح2س2 في 8 قسم البروتوكول. انخفاضا ريسوروفين التي تشير إلى مستوى2 2س ح في رد فعل خليط يحتوي على المجلس الوطني الفلسطيني قد لوحظ (الشكل 7)، مما يؤكد نشاط المجلس الوطني الفلسطيني المركب mimetic القط.

Figure 1
الشكل 1 : توليف وتوصيف للشرطة المدنية الوطنية- أ تلون نترات السيريوم، بولي حامض اﻷكريليك (PAA)، خليط من نترات السيريوم وأجزاء من الكمية المخصصة، والمجلس الوطني الفلسطيني المركب (جسيمات نانوية أكسيد السيريوم PAA المغلفة، الضوء الأصفر). باء طيف امتصاص تقاس بالأشعة فوق البنفسجية-فيما كانت الشرطة المدنية الوطنية. زيتا وقطرها هيدرودينامية جيم المحتملة للشرطة المدنية الوطنية المركبة. يعني خطأ معياري ± (n = 4). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 : المجلس الوطني الفلسطيني وسمها بصبغة الفلورسنت دي- أ المجلس الوطني الفلسطيني (الضوء الأصفر) ودي صبغ حل المجلس الوطني الفلسطيني المسمى (دي-الشرطة المدنية الوطنية، الوردي). باء طيف امتصاص من حل دي-الشرطة المدنية الوطنية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 : نبات تسلل الصفيحة من الشرطة المدنية الوطنية أو دي-المجلس الوطني الفلسطيني- ألف- التمويل (أ) ورقة قبل تسلل. الحل داخل المحاقن هو دي-الشرطة المدنية الوطنية. ب نبات تسلل مع دي-الشرطة المدنية الوطنية. جيم تنظيف الحل المتبقي من سطح أوراق مع المهمة الحساسة مناديل. دال تنظيف أوراق التمويل (أ) تسللت مع دي-الشرطة المدنية الوطنية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 : إعداد الشرائح نموذج ورقة- أ الفحص المجهري الشريحة الزجاجية مع حجم البازلاء مراقبة المواد الهلامية. باء الشريحة مع الجل المراقبة مسطحة. جيم الشريحة مع جل المراقبة مسطحة وجود بئر في الوسط. دال الشريحة مع أقراص ليف في جل المراقبة أيضا مليئة بحل بيروفلوروديكالين (PFD). هاء الشريحة مع أوراق أقراص معطلة بكشف الغطاء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5 : دي تصوير-الشرطة المدنية الوطنية في mesophyll ليف الخلايا عن طريق الفحص المجهري [كنفوكل]- أوراق ألف عينة هي التي شنت مقلوب مجهر [كنفوكل] وجود عدسة غمر مياه X 40. (ب) مجهر [كنفوكل] يستخدم للتصوير دي-الشرطة المدنية الوطنية والمعايشة. يتم تسجيل السيارات بلاستيدات الخضراء جيم-الأسفار في المخزن المؤقت التي تسللت إلى أوراق عينات دون جسيمات نانوية (NNP). دال يتم تصويرها دي-الشرطة الوطنية الكونغولية بلاستيدات الخضراء والإشارات السيارات-الأسفار في عينات أوراق دي-المجلس الوطني الفلسطيني تسلل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 6
الرقم 6 : رصد الشرطة الوطنية الكونغولية روس المسح في بﻻنتا عبر الفحص المجهري [كنفوكل]- DCF ألف صبغة الفلورسنت (للرصد العام روس إشارة) أقل بكثير في الخلايا mesophyll النباتات تسللوا إلى الشرطة المدنية الوطنية من مراقبة المخزن المؤقت (لا جسيمات نانوية، الحزب الوطني الجديد). صبغ DHE تخفيض ب الفلورية (لرصد انيون دسموتاز) في الخلايا mesophyll النباتات تسللوا إلى الشرطة المدنية الوطنية بالنسبة إلى مراقبة المخزن المؤقت (NNP). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 7
الشكل 7 : النشاط mimetic كاتالاز (CAT) للمجلس الوطني الفلسطيني- حضور الفجل البيروكسيديز، المسبار الفلورسنت ويتفاعل مع بيروكسيد الهيدروجين ويتم تحويلها إلى ريسوروفين (امتصاص 560 نانومتر). امتصاص ريسوروفين، ويدل على المستويات فوق أكسيد الهيدروجين، تم رصدها في 560 نانومتر. وأظهرت الشرطة الوطنية الكونغولية نشاطا ميميتيك القط. يعني ± سراج الدين (الخطأ المعياري) (n = 4). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في هذا البروتوكول، يصف لنا الشرطة الوطنية الكونغولية التوليف وتوصيف ووصفها بصبغة الفلورسنت وتصوير [كنفوكل] لجسيمات نانوية داخل الخلايا النباتية mesophyll يحمل في فيفو روس الكسح نشاطهم. المجلس الوطني الفلسطيني يتم تصنيعه من خليط من نترات السيريوم وحل جزء من الكمية المسندة في هيدروكسيد الأمونيوم. المجلس الوطني الفلسطيني تتميز بامتصاص سبيكتروفوتوميري وتركيز تحدد باستخدام القانون لمبرتس البيرة. وأكدت القياسات المحتملة زيتا مشحونة سلبا على سطح المجلس الوطني الفلسطيني لتحسين أداء للمعايشة8. وسم للشرطة الوطنية الكونغولية بصبغة فلورسنت دي تمكن في فيفو التصوير بالفحص المجهري [كنفوكل] داخل الخلايا mesophyll ليف حيث تظهر جسيمات نانوية مستويات عالية من كولوكاليزيشن مع المعايشة. استخدام الأصباغ الفلورية DHE ومنتدى التعاون الإنمائي، أكدنا أن قانون المجلس الوطني الفلسطيني زبال قوية انيون دسموتاز وروس في فيفو.

الأسلوب لتوليف المجلس الوطني الفلسطيني هو إجراء تدريجي بسيط أن تولد جسيمات نانوية أكسيد السيريوم مع المساحة الخاضعة للمراقبة، وشحنة سالبة، وروس مسح قدرات16. تتطلب أساليب أخرى، مثل التحلل الحراري، ارتفاع درجات الحرارة، والكيمياء تكلفة المعدات21،22. التوليف وتوصيف للمجلس الوطني الفلسطيني طريقة منخفضة التكلفة تنفيذها مع معدات المختبرات المشتركة. أنها لا تتطلب منحنى التعلم حاد مقارنة مع الأساليب الجزيئية في النباتات استناداً إلى overexpression الإنزيمات المضادة للأكسدة، مثلاً، الهيئة العامة للسدود، APX، و لجنة مناهضة التعذيب، لمسح الأنواع روس في نموذج نظم23. المجلس الوطني الفلسطيني هو قوية، للذوبان في الماء روس حفاز زبال لا تتطلب الاستنساخ شاقة وطرق التحويل التي تعتمد على المقاييس الجينية للنبات، وأدوات الجزيئية المتاحة.

خطوة حاسمة في هذا البروتوكول هو تسلل المستندة إلى حقنه من نبات mesophyll الخلايا مع الشرطة الوطنية الكونغولية. ينبغي أن يتم تسلل جسيمات نانوية إلى النباتات الحية برفق لتجنب الأضرار المادية التي لحقت ورقة24. وهكذا، كما هو الحال في البروتوكول الخطوة 4 من الأساليب، بلطف دفع ضد سطح أوراق مع المحاقن لتجنب تمزق أو ثقب السطح ليف أباكسيال. فمن الأفضل التسلل من سطح أباكسيال ليف التمويل (أ) نظراً لأنه أعلى كثافة ستوماتال من السطح أداكسيال25،26. وعلاوة على ذلك، حلاً مخزنة من الشرطة المدنية الوطنية أو دي-الشرطة المدنية الوطنية ضمن نطاق درجة الحموضة الفسيولوجية (~ درجة الحموضة 7.5) ينبغي أن تستخدم خلال تسلل الصفيحة ليف. آخر خطوة حاسمة في هذا البروتوكول تطبيق تركيز مناسب للشرطة الوطنية الكونغولية للأنسجة النباتية المدروسة. في هذا البروتوكول، لم يكن 50 مغ/لتر من الشرطة الوطنية الكونغولية السامة ليترك التمويل (أ) حين تمكن روس الشرطة الوطنية الكونغولية الحفاز الكسح. بعض القيود المفروضة على طريقة التسليم نانوحبيبات الحالية 1) غير قابلة لزراعة الأنواع التي لها البشرة سميكة وشمعيه أو منخفضة الكثافة ستوماتال، 2) لا قابلة للتطوير للتطبيقات في الميدان، 3) التكلفة العالية لنظام الفحص المجهري [كنفوكل] لرصد في فيفو التوزيع نانوحبيبات ومسح روس.

هذا البروتوكول يوضح التطبيق لروس مسح الشرطة المدنية الوطنية لدراسة وتحسين التسامح الإجهاد اللاأحيائية في النباتات من خلال طريقة سهلة لنبات الصفيحة تسلل. ويرافق تراكم روس اللاأحيائية تشدد في النباتات، وهذا بدوره يقلل من النباتات التمثيل الضوئي، والنمو، وتسفر عن8،،من2728. أساليب التعديلات الوراثية النباتية لروس التلاعب في فيفو غالباً ما تكون محدودة لزراعة الأنواع النموذجية أثناء مسح روس المجلس الوطني الفلسطيني لديه القدرة على أن تطبق على الأنواع النباتية المختلفة البرية نوع. نبات الصفيحة تسلل أسلوب بحث عملي لزيادة روس المسح في أنسجة نبات لفهم والهندسة النباتية الإجهاد اللاأحيائية التسامح.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

هذا العمل كان يدعمها في جامعة كاليفورنيا، ريفرسايد ووزارة الزراعة المعهد الوطني للأغذية والزراعة، المشروع هاتش 1009710 إلى J.P.G. ويستند هذا المواد العمل المدعوم من "المؤسسة الوطنية للعلوم" تحت المنحة رقم 1817363 إلى J.P.G.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cerium (III) nitrate hexahydrate Sigma-Aldrich 238538-100G
Molecular Biology Grade Water, Corning VWR 45001-044 
Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes VWR 14-959-49A
Poly (acrylic acid) 1,800 Mw Sigma-Aldrich 323667-100G
Fisherbrand Digital Vortex Mixer Fisher Scientific 02-215-370
Fisherbrand Digital Vortex Mixer Accessory, Insert Retainer Fisher Scientific 02-215-391
Fisherbrand Digital Vortex Mixer Accessories: Foam Insert Set Fisher Scientific 02-215-395
Ammonium hydroxide solution Sigma-Aldrich 05002-1L
PYREX Griffin Beakers, Graduated, Corning VWR 13912-149 
RCT basic IKA 3810001
Eppendorf Microcentrifuge 5424 VWR 80094-126
Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units Millipore-Sigma UFC901024
Allegra X-30 Series Benchtop Centrifuge Beckman Coulter B06314
UV-2600 Sptecrophotometer Shimadzu UV-2600 120V
Whatman Anotop 10 syringe filter Sigma-Aldrich WHA68091102
BD Disposable Syringes with Luer-Lok Tips Fisher Scientific 14-829-45
Zetasizer Nano S Malvern Panalytical Zen 1600
1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate Sigma-Aldrich 42364-100MG
Dimethyl Sulfoxide, ACS VWR BDH1115-1LP
Sunshine Mix #1 LC1 Green Island Distributors, Inc 5212601.CFL080P
Adaptis 1000 Conviron A1000
TES, >99% (titration Sigma-Aldrich T1375-100G
Magnesium chloride Sigma-Aldrich M8266-1KG
Air-Tite All-Plastic Norm-Ject Syringe Fisher Scientific 14-817-25
Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers Fisher Scientific 06-666A
Carolina Observation Gel Carolina 132700
Corning microscope slides, frosted one side, one end Sigma-Aldrich CLS294875X25-72EA
Cork Borer Sets with Handles Fisher Scientific S50166A
Perfluorodecalin Sigma-Aldrich P9900-25G
Micro Cover Glasses, Square, No. 1 VWR 48366-045
Leica Laser Scanning Confocal Microscope TCS SP5 Leica Microsystems TCS SP5
2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate Sigma-Aldrich D6883-250MG
Dihydroethidium Sigma-Aldrich D7008-10MG
Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL Fisher Scientific 05-408-129
Eppendorf Uvette cuvettes Sigma-Aldrich Z605050-80EA
Chlorophyll meter  Konica Minolta SPAD-502

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xu, C., Qu, X. Cerium oxide nanoparticle: A remarkably versatile rare earth nanomaterial for biological applications. NPG Asia Materials. 6 (3), 90-116 (2014).
  2. Nelson, B., Johnson, M., Walker, M., Riley, K., Sims, C. Antioxidant cerium oxide nanoparticles in biology and medicine. Antioxidants. 5 (2), 15 (2016).
  3. Gupta, A., Das, S., Neal, C. J., Seal, S. Controlling the surface chemistry of cerium oxide nanoparticles for biological applications. Journal of Materials Chemistry B. 4 (19), 3195-3202 (2016).
  4. Walkey, C., et al. Catalytic properties and biomedical applications of cerium oxide nanoparticles. Environ. Sci.: Nano. 2 (1), 33-53 (2015).
  5. Pulido-Reyes, G., et al. Untangling the biological effects of cerium oxide nanoparticles: the role of surface valence states. Scientific reports. 5, 15613 (2015).
  6. Dutta, P., et al. Concentration of Ce3+ and oxygen vacancies in cerium oxide nanoparticles. Chemistry of Materials. 18 (21), 5144-5146 (2006).
  7. Boghossian, A. A., et al. Application of nanoparticle antioxidants to enable hyperstable chloroplasts for solar energy harvesting. Advanced Energy Materials. 3, 881-893 (2013).
  8. Wu, H., Tito, N., Giraldo, J. P. Anionic cerium oxide nanoparticles protect plant photosynthesis from abiotic stress by scavenging reactive oxygen species. ACS Nano. 11 (11), 11283-11297 (2017).
  9. Giraldo, J. P., et al. Plant nanobionics approach to augment photosynthesis and biochemical sensing. Nature Materials. 13 (4), 400-408 (2014).
  10. Demidchik, V. Mechanisms of oxidative stress in plants: From classical chemistry to cell biology. Environmental and Experimental Botany. 109, 212-228 (2015).
  11. Rico, C. M., et al. Cerium oxide nanoparticles impact yield and modify nutritional parameters in wheat (Triticum aestivum L.). Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (40), 9669-9675 (2014).
  12. Rossi, L., Zhang, W., Lombardini, L., Ma, X. The impact of cerium oxide nanoparticles on the salt stress responses of Brassica napus L. Environmental Pollution. 219, 28-36 (2016).
  13. Xu, J., Duan, X., Yang, J., Beeching, J. R., Zhang, P. Enhanced reactive oxygen species scavenging by overproduction of superoxide dismutase and catalase delays postharvest physiological deterioration of cassava storage roots. Plant Physiology. 161 (3), 1517-1528 (2013).
  14. Wu, H., et al. Developing and validating a high-throughput assay for salinity tissue tolerance in wheat and barley. Planta. , (2015).
  15. Pirmohamed, T., et al. Nanoceria exhibit redox state-dependent catalase mimetic activity. Chemical communications. 46 (16), Cambridge, England. 2736-2738 (2010).
  16. Asati, A., Santra, S., Kaittanis, C., Perez, J. M. Surface-charge-dependent cell localization and cytotoxicity of cerium oxide nanoparticles. ACS nano. 4, 5321-5331 (2010).
  17. Li, J., Wu, H., Santana, I., Fahlgren, M., Giraldo, J. P. Standoff optical glucose sensing in photosynthetic organisms by a quantum dot fluorescent probe. ACS Applied Materials & Interfaces. , (2018).
  18. Wu, H., Shabala, L., Shabala, S., Giraldo, J. P. Hydroxyl radical scavenging by cerium oxide nanoparticles improves Arabidopsis salinity tolerance by enhancing leaf mesophyll potassium retention. Environmental Science: Nano. 5 (7), 1567-1583 (2018).
  19. Merad-Boudia, M., Nicole, A., Santiard-Baron, D., Saillé, C., Ceballos-Picot, I. Mitochondrial impairment as an early event in the process of apoptosis induced by glutathione depletion in neuronal cells: Relevance to Parkinson's disease. Biochemical Pharmacology. 56 (5), 645-655 (1998).
  20. Zhao, H., et al. Detection and characterization of the product of hydroethidine and intracellular superoxide by HPLC and limitations of fluorescence. Proceedings of the National Academy of Sciences. 102 (16), 5727-5732 (2005).
  21. Sun, C., Li, H., Chen, L. Nanostructured ceria-based materials: synthesis, properties, and applications. Energy & Environmental Science. 5 (9), 8475 (2012).
  22. Hirano, M., Inagaki, M. Preparation of monodispersed cerium(iv) oxide particles by thermal hydrolysis: influence of the presence of urea and Gd doping on their morphology and growth. Journal of Materials Chemistry. 10 (2), 473-477 (2000).
  23. Xi, D. M., Liu, W. S., Yang, G. D., Wu, C. A., Zheng, C. C. Seed-specific overexpression of antioxidant genes in Arabidopsis enhances oxidative stress tolerance during germination and early seedling growth. Plant Biotechnology Journal. 8 (7), 796-806 (2010).
  24. Wu, H., Santana, I., Dansie, J., Vivo Giraldo, J. P. In Vivo delivery of nanoparticles into plant leaves. Current Protocols in Chemical Biology. 9 (4), 269-284 (2017).
  25. Fukushima, K., Hasebe, M. Adaxial-abaxial polarity: The developmental basis of leaf shape diversity. Genesis. 52 (1), 1-18 (2014).
  26. Monda, K., et al. Enhanced stomatal conductance by a spontaneous Arabidopsis tetraploid, Me-o, results from increased stomatal size and greater stomatal aperture. Plant physiology. 170 (3), 1435-1444 (2016).
  27. Petrov, V., Hille, J., Mueller-Roeber, B., Gechev, T. S. ROS-mediated abiotic stress-induced programmed cell death in plants. Frontiers in Plant Science. 6, 1-16 (2015).
  28. Chaves, M. M., Flexas, J., Pinheiro, C. Photosynthesis under drought and salt stress: regulation mechanisms from whole plant to cell. Annals of Botany. 103 (4), 551-560 (2009).

Tags

الهندسة الحيوية، 138 قضية، والإجهاد اللاأحيائية، نانوسيريا، وتصوير [كنفوكل]، ليف الصفيحة التسلل، النبات، مسح روس
مسح الحفاز لمصنع الأكسجين التفاعلية الأنواع <em>في فيفو</em> بجسيمات نانوية أكسيد السيريوم أنيونى
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Newkirk, G. M., Wu, H., Santana, I., … More

Newkirk, G. M., Wu, H., Santana, I., Giraldo, J. P. Catalytic Scavenging of Plant Reactive Oxygen Species In Vivo by Anionic Cerium Oxide Nanoparticles. J. Vis. Exp. (138), e58373, doi:10.3791/58373 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter