Met behulp van scriptingregel cultuur systemen, wij brengen verslag een in vitro B-cel plasma cel differentiatie model.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
In Vitro differentiatie Model van menselijke normale B geheugencellen te langlevende plasmacellen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Plasmacellen (PCs) grote hoeveelheid antilichamen afscheiden en ontwikkelen van B-cellen die zijn geactiveerd. PC's zijn van zeldzame cellen zich in het beenmerg of de mucosa en zorgen Humorale immuniteit. Vanwege hun lage frequentie en de locatie, de studie van PC's is moeilijk in de mens. We gemeld een B naar PC in-vitro differentiatie model met behulp van geselecteerde combinaties van cytokinen en activering moleculen die toestaan om te reproduceren de sequentiële celdifferentiatie optreedt in vivo. In deze in vitro model geheugen B cellen (MBCs) zal onderscheiden in pre plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs), vroeg PC's en ten slotte in langlevende Kortbij PC's, met een fenotype hun tegenhangers in gezonde individuen. Ook bouwden we een open toegang bioinformatica tools voor het analyseren van de meest prominente informatie van GEP gegevens met betrekking tot differentiatie van de PC. Deze middelen kunnen worden gebruikt voor het bestuderen van de menselijke B PC differentiatie en in de huidige studie, we onderzocht de expressie genregulatie epigenetische factoren tijdens menselijke B naar PC differentiatie.
Inleiding
De differentiatie van B-cellen tot plasmacellen (PCs) is essentieel voor de Humorale immuniteit en beschermen van de host tegen infecties1. B bij PC differentiatie wordt geassocieerd met grote veranderingen in de transcriptie capaciteit en metabolisme geschikt voor tot antilichaam secretie. De transcriptiefactoren waarmee B naar PC differentiatie zijn uitvoerig bestudeerd en geopenbaarde exclusieve netwerken met inbegrip van B - en PC-specifieke transcriptie factoren (TFs)2. In de B-cellen zijn PAX5, BCL6 en BACH2 TFs de hoeders van de B-cel identiteit2,3. Induct....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Het protocol volgt de richtsnoeren overeenkomstig de verklaring van Helsinki en de overeenkomst van de Montpellier Universiteit ziekenhuis centrum voor biologische hulpbronnen.
1. in Vitro normaal Plasma cel differentiatie Model
Opmerking: PC's worden gegenereerd door middel van een vier-stappen cultuur11,12,13.
-
Versterking van de b-cel en differentiatie
- Perifere bloedcellen van gezonde vrijwilligers voor geheugen zuivering van de B-cel gebruiken
- Verdun 7,....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De algemene procedure voor in-vitro differentiatie voor normale PC wordt afgebeeld in Figuur 1. Met behulp van het protocol hier gepresenteerd, kunnen wij voldoende hoeveelheid cellen die niet kon worden verkregen met ex vivo menselijke specimens genereren. Hoewel de rol van het complexe netwerk van transcriptiefactoren die betrokken zijn bij PC differentiatie heeft onderzocht, blijven de mechanismen tot regeling van de belangrijkste PC differentiatie transcr.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In de mens zijn PC zeldzame cellen met differentiatie etappes plaatsvinden in anatomische plaatsen die volledige biologische karakterisering in de weg staan. We hebben ontwikkeld, een in vitro B PC differentiatie model met behulp van scriptingregel cultuur systemen waar verschillende combinaties van moleculen van activering en cytokines worden vervolgens toegepast om te reproduceren de sequentiële celdifferentiatie optreedt de verschillende organen/weefsels in vivo11,1.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door subsidies van de Franse INCA (Institut National du Cancer) Instituut (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) en ITMO kanker (MM & TT).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| anti-CD2 magnetische kralen | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Anti-histidine | R&D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T | |
| human Transferin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinant Human CD40L-hi | R&D Systems | 2706-CL | |
| Recombinant Human APRIL | R&D Systems | 5860-AP-010 | |
| Recombinant Human IL-10 | R&D Systems | 217-IL- | |
| Recombinant Human IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Recombinant Human IL-2 Protein | R&D Systems | 202-IL- | |
| Recombinant Human IL-6 | Peprotech | 200-06 |
Referenties
- Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
- Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-17....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
