À l’aide de systèmes de culture de plusieurs étapes, les auteurs rapportent une in vitro de cellules B au modèle de différenciation de cellules de plasma.
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Article de méthode
Dans modèle de différenciation in Vitro des cellules de la mémoire humaine normale B à longue durée de vie des cellules de Plasma
Dans cet article
Résumé
Résumé
Plasmocytes (PCs) sécrètent de grandes quantités d’anticorps et se développent à partir des cellules de B qui ont été activés. SCP est rares cellules localisées dans la moelle osseuse ou de la muqueuse et assurent l’immunité humorale. En raison de leur faible fréquence et de l’emplacement, l’étude de la SCP est difficile chez l’homme. Nous avons signalé un B PC modèle de différenciation in vitro à l’aide de certaines combinaisons de cytokines et l’activation des molécules qui permettent de reproduire la différenciation des cellules séquentielles survenant in vivo. Dans ce modèle in vitro, mémoire des cellules B (MBCs) permet de différencier en pre plasmablasts (prePBs), plasmablasts PCs (PBs), au début et enfin, dans la longue durée de vie avec un phénotype PCs, fermer à leurs homologues chez les individus sains. Nous avons construit également un libre accès bioinformatique outils pour analyser les informations principales de données LGE liées à la différenciation de PC. Ces ressources peuvent être utilisées pour étudier les humain B à la différenciation de PC et dans la présente étude, nous avons étudié la régulation de l’expression génique des facteurs épigénétiques pendant B humaine à la différenciation de PC.
Introduction
La différenciation des cellules B à plasmocytes (PCs) est essentielle à l’immunité humorale et protéger l’hôte contre l’infection1. B à la différenciation de la PC est associée à des changements majeurs dans la capacité de la transcription et le métabolisme pour accueillir à la sécrétion d’anticorps. Les facteurs de transcription qui contrôlent B à la différenciation de PC ont été largement étudiées et révélées réseaux exclusifs y compris spécifiques PC et B transcription factors (TFs)2. Dans les cellules de B, PAX5, BCL6 et BACH2 TFs sont les gardiens des lymphocytes B identité2,
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Protocole
Le protocole suit les directives conformément à la déclaration d’Helsinki et l’accord du Centre hospitalier de l’Université de Montpellier pour les ressources biologiques.
1. dans le modèle de différenciation pour le plasmocyte Vitro normale
Remarque : SCP est générés par une culture de quatre étapes11,12,13.
-
Différenciation et l’amplification de lymphocytes b
- Utiliser des cellules du sang périphérique chez des volontaires sains pour mémoire purification de cellules ....
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Résultats
La procédure globale de différenciation in vitro de PC normale est représentée dans la Figure 1. En utilisant le protocole présenté ici, nous pourrions produire une quantité suffisante de cellules qui ne peut pas être obtenu avec ex vivo des échantillons humains. Bien que le rôle du réseau complex de facteurs de transcription impliqués dans la différenciation de PC a été étudié, les mécanismes qui régissent les principaux réseaux de transcription de différenc.......
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Discussion
Chez l’homme, PC sont rares cellules avec des stades de différenciation qui ont lieu dans des endroits anatomiques qui entravent la caractérisation biologique complet. Nous avons développé un B in vitro au modèle de différenciation de PC à l’aide de systèmes de culture de plusieurs étapes où les différentes combinaisons de molécules d’activation et de cytokines sont appliquées par la suite afin de reproduire la différenciation des cellules séquentielles qui se produisent dans la différents organes/tissus en vivo
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer
Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions de Français INCA (Institut National du Cancer) Institut (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) et ITMO Cancer (MM & TT).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| billes magnétiques anti-CD2 | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter ; | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter ; | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter ; | A07779 | |
| Anti-histidine | R& D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*T*C*G*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*T*C*G*T*T | |
| transfert humainin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-&alpha ; | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinan Human CD40L-hi | R& D Systems | 2706-CL | |
| Recombinant Humain APRIL | R& D Systems | 5860-AP-010 | |
| IL-10 humain recombinant | R& D Systems | 217-IL-IL-Humain | |
| recombinant IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Protéine IL-2 humaine recombinante | R& D Systems | 202-IL-IL-IL-6 | |
| humain recombinant | Peprotech | 200-06 |
Références
- Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
- Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-17....
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Réimpressions et autorisations
