Her beskriver vi en ny metode til påvisning af vellykket etablering af fælles blodcirkulation af to parabionter gennem en caudal vene injektion af glukose, som forårsager minimal skade og er ikke dødelig for parabionts.
Parabiosis er en eksperimentel metode til kirurgisk kombinere to parallelle dyr langs den langsgående akse af kroppen. Vi præsenterer en protokol for påvisning af en vellykket etablering af blodkimerisme i parabionter ved en caudal vene injektion af glukose. Parabiotiske mus blev bygget. Glucose blev injiceret i donormusen gennem halevenen, og udsvingene i blodsukkerniveauet blev målt i begge mus ved hjælp af en blodglucometer på forskellige tidspunkter. Vores resultater viste, at efter glukoseinjektion steg blodsukkerniveauet i donormus kraftigt efter 1 min og faldt langsomt derefter. I mellemtiden toppede blodsukkerniveauet for recipientmusene 15 min efter injektion. Lignende resultater blev opnået med Evans blå, anvendes som en positiv kontrol for glukose. Den synkrone udsving i blodsukkerniveauet indikerer, at blodgennemstrømningen mellem de to mus blev etableret med succes.
Parabiosis er en modelmetode, hvor to levende organismer samles kirurgisk og udvikles som et enkelt fysiologisk system med et fælleskredsløbssystem 1. Sådanne modeller har været meget anvendt til at studere fysiologi på grund af den fordel, at de stoffer, der produceres af en enkelt person, kan handle på begge dyr på samme tid via det fælles kredsløbssystem. Siden midten af 1800-tallet, hvor parabiotiske eksperimenter blev banebrydende af Paul Bert2, metoderne til at konstruere parabiotiske modeller er blevet standardiseret. Men en enkel og bekvem metode til at kontrollere en vellykket etablering af blodkimerisme har manglet. Det er blevet rapporteret, at cross-cirkulation kan med held vurderes ved intraperitonealt indsprøjtning 0,5% Evans blå farvestof i en af de parabionts efterfulgt af måling af absorbans af Evans blå i blodet af begge parabionter med en mikroplade læser3. En anden metode kræver en specifik muserace, der indeholder CD45.1+– og CD45.2+-mærket monocytter i hver parabiont. Cellecytometri anvendes derefter til at bestemme blodkimerisme ved at måle hyppigheden af de to markører i monocytter fra milt eller blod4. Men disse metoder er ofte dødelige eller besværlige for dyrene, og en sikker og enkel metode til hurtig og pålidelig kontrol af parabiotiske modeller er meget ønskeligt. I denne undersøgelse etablerede vi en ny metode til dette formål, som blev valideret i en musemodel af parabiosis. Glukosekoncentrationen i blodprøver, der er udtaget fra en halevene, måles ved hjælp af en glucometer, og mønsteret af ændringer i glukoseniveauet hos donor- og recipientmus betragtes som en indikation af kimærisme i omløb. Vi kaldte denne metode for “glukoseudsvingsmetoden”. Anvendelsen af denne valideringsmetode er ikke begrænset til mus, men kan udvides til forskellige patologiske modeller undtagen dem med alvorlig dysregulering af glukosemetabolismen. Proceduren er enkel, tidsbesparende og sikker.
Parabiosis henviser til den kirurgiske teknik til at forbinde to levende dyr til at etablere et fælles vaskulære system ved forsøg betyder6,7,8. Fordelen ved denne model er, at de stoffer, der produceres af en enkelt person, kan handle på begge dyr på samme tid. Således kan parabiosis model bruges til at udforske den rolle, et stof eller en faktor i en beslægtet sygdom, der producerer mange meningsfulde og innovative konk…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af National Nature Science Foundation of China (81570399 og 81773735), National Key Research and Development Program of China – Traditional Chinese Medicine Modernization Research project (2017YFC1702003), og Hei Long Jiang Fremragende Ungdomsvidenskabfond (JC2017020).
curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |