Summary
هنا نصف طريقة جديدة للكشف عن نجاح إنشاء الدورة الدموية المشتركة من اثنين من الباربايوينتس من خلال حقن الوريد caudal من الجلوكوز، والذي يسبب الحد الأدنى من الضرر وليس قاتلا للبارابيوتر.
Abstract
Parabiosis هو طريقة تجريبية للجمع جراحيا اثنين من الحيوانات المتوازية على طول المحور الطولي للجسم. نقدم بروتوكولا للكشف عن نجاح إنشاء التشيميرة الدم في parabionts عن طريق حقن الوريد caudal من الجلوكوز. تم بناء الفئران البارابيوية. تم حقن الجلوكوز في الفأر المانح ة من خلال الوريد الذيل، وتم قياس تقلب مستوى السكر في الدم في كل من الفئران باستخدام مقياس غلوككوز الدم في نقاط زمنية مختلفة. أظهرت نتائجنا أنه بعد حقن الجلوكوز ، زاد مستوى السكر في الدم في الفئران المانحة بشكل حاد بعد دقيقة واحدة وانخفض ببطء بعد ذلك. وفي الوقت نفسه، بلغ مستوى السكر في الدم للفئران المتلقية ذروته بعد 15 دقيقة من الحقن. تم الحصول على نتائج مماثلة مع إيفانز الأزرق, تستخدم كتحكم إيجابي للجلوكوز. يشير التذبذب المتزامن لمستويات السكر في الدم إلى أن تدفق الدم بين الفئران اثنين تم إنشاؤه بنجاح.
Introduction
Parabiosis هو طريقة النمذجة التي يتم فيها ضم اثنين من الكائنات الحية معا جراحيا وتطوير كنظام فسيولوجي واحد مع نظام الدورة الدموية المشتركة1. وقد استخدمت هذه النماذج على نطاق واسع لدراسة علم وظائف الأعضاء نظرا لميزة أن المواد التي ينتجها فرد واحد يمكن أن تعمل على كل من الحيوانات في نفس الوقت عن طريق نظام الدورة الدموية المشتركة. منذ منتصف 1800s عندما كانت التجارب الباربايوية رائدة من قبل بول بيرت2، أصبحت أساليب بناء النماذج البارابيوية موحدة. ومع ذلك ، فقد طريقة واضحة ومريحة للتحقق من نجاح إنشاء التشيهالدم. وقد أفيد أنه يمكن تقييم التداول عبر بنجاح عن طريق حقن داخل البيتونيا 0.5٪ صبغة زرقاء إيفانز في واحدة من البارابيوات تليها قياس امتصاص الأزرق إيفانز في الدم من كل من الباربايوينتس مع قارئ microplate3. طريقة أخرى تتطلب سلالة الماوس محددة تحتوي على CD45.1+ -وCD45.2+- المسمى monocytes في كل بارابيونت. ثم يتم استخدام الخلايا لتحديد التشيميرة الدم عن طريق قياس تواتر اثنين من علامات في monocytes من الطحال أو الدم4. ومع ذلك ، فإن هذه الأساليب غالبا ما تكون قاتلة أو مرهقة للحيوانات ، وطريقة آمنة وبسيطة للتحقق السريع والموثوق به من النماذج البارابيوية أمر مرغوب فيه للغاية. في هذه الدراسة ، أنشأنا طريقة جديدة لهذا الغرض ، والتي تم التحقق من صحتها في نموذج الماوس من parabiosis. يتم قياس تركيز الجلوكوز في عينات الدم المسحوبة من الوريد الذيل باستخدام مقياس الجلوكوز ، ويعتبر نمط التغيرات في مستوى الجلوكوز في الفئران المانحة والمتلقية مؤشرا على تشيميرية الدورة الدموية. نحن اسمه هذا الأسلوب "طريقة تقلب الجلوكوز". لا يقتصر تطبيق طريقة التحقق هذه على الفئران ولكن يمكن توسيعها إلى نماذج مرضية متنوعة باستثناء أولئك الذين يعانون من dysregulation خطيرة من استقلاب الجلوكوز. الإجراء بسيط، توفير الوقت، وآمنة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات ورعايتها من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية واستخدامها في جامعة هاربين الطبية.
ملاحظة: يتم سرد الأدوات والمعدات المطلوبة للطريقة في جدول المواد.
1. إعداد المواد والحيوانات
- اطلب C57BL/6 فئران ذكور بوزن يتراوح بين 20 جم-25 جم من مورد الحيوانات المختبرية القياسي.
- اعمل على تناول الفئران في دورة من الضوء 12 ساعة: 12 ساعة من الظلام عند 24-26 درجة مئوية مع وصول الإعلانية libitum إلى الماء والغذاء.
2- بارابويس
- تحقن الفئران بحقن داخل البرتونية من 20 غرام/لتر 2,2,2-تريبروموثانول بتركيز 0.1 مل/10 ز. تأكد من الحقن السليم كما هو مبين باسترخاء العضلات، والتنفس البطيء والمطرد، وفقدان انعكاس تحفيز الجلد، واختفاء منعكس القرنية.
- تطبيق مرهم العيون مع Q-تلميح لمنع جفاف العينين.
- تنفيذ إجراء parabiosis كما هو موضح سابقا5.
- وضع الفئران في موقف supine. اعمل على الإنزلاف الدقيق للجانب الأيسر من فأر ة واحدة والجانب الأيمن من الفأرة الأخرى بدءًا من حوالي 1 سم فوق الكوع إلى 1 سم تحت الركبة باستخدام آلة التكال. استخدام كريم إزالة الشعر لمسح تماما الفراء على الجلد حليق.
- مسح المناطق النابة مع iodophor. ضع الفئران على وسادة ساخنة مغطاة بوسادة معقمة.
- إنشاء شقوق الجلد الطولية بدءا من 0.5 سم فوق الكوع إلى 0.5 سم تحت مفصل الركبة باستخدام زوج من مقص حاد على الجانب كل الحيوان حليق.
- فصل الجلد من اللفافة تحت الجلد بلطف بعد شق.
- ربط olecranon والركبة من البارابيون مع خياطة 3-0.
- خياطة الجلد الحليق مع خياطة مستمرة 5-0.
- حقن 0.5 مل من 0.9٪ NaCl تحت الجلد إلى كل فأر ة لمنع الجفاف.
- حقن الترامادول (10 ملغ/25 غرام/يوم) عضليا لكل فأر لتخفيف الألم.
3. التحقق من صحة التشيميرة الدموية
- طريقة تقلب الجلوكوز
ملاحظة: تحقق من البناء الناجح لتشية الدورة الدموية بين الباربايوينت باستخدام طريقة تقلب الجلوكوز (عدم الصيام) في اليوم العاشر بعد جراحة الباربوريس.- تحقن البارابيوتينات بالحقن داخل البراتوران 20 غ/لتر 2,2,2-تريبروموثانول لكل فأر بتركيز 0.1 مل/10 جم.
- إصلاح الفئران المانحة في المثبت ذيل الماوس البصرية Venous.
- فرك الأوردة الكودالية في جناح أحد ذيل البارابيون مع كرة قطنية غارقة في الكحول 70-75٪ لتنظيف الذيل وتمدد الأوعية الدموية.
- احمل حقنة 1.0 مل تحتوي على الجلوكوز في اليد اليمنى وابق الإبرة موازية للوريد (أقل من 15 درجة).
- أدخل الإبرة في موضع يبعد حوالي 2-4 سم عن طرف الذيل.
- حقن 100 ميكرولتر من الجلوكوز (1.2 غرام/ كجم) في المتبرع في غضون 10 ق.
ملاحظة: يشير مصطلح المتبرع إلى الباربايوين تتلقي حقن الجلوكوز من خلال الوريد الذيل. المتلقي هو البارابيونة الأخرى، التي لا تتلقى الجلوكوز مباشرة. - تنظيف اللّزوبة مع iodophor. قطع أطفأ الفئران المانحة والمتلقية بمقص وجمع قطرة دم في نقاط زمنية مختلفة بعد حقن الجلوكوز (دقيقة و5 دقيقة و10 دقيقة و15 دقيقة و20 دقيقة و30 دقيقة و40 دقيقة و50 دقيقة و60 دقيقة). قم بإزالة جلطة الدم في كل نقطة زمنية للجمع لتجنب المزيد من الضرر.
ملاحظة: كان حجم الدم الذي تم جمعه 10-25 ul لاختبار واحد، و 90-225 ul في المجموع. - التنقيط الدم في مركز شرائط اختبار الجلوكوز للكشف عن مستوى الجلوكوز.
- استخدام كونترستين الأزرق ايفان كتحكم إيجابي3.
- حقن 200 ميكرولتر من 0.5٪ الأزرق إيفان مضادة للبقع داخل داخل الفأر المانحة.
- 2 ساعة في وقت لاحق, القتل الرحيم البارابيوتر عن طريق الحقن داخل البريكنتال من 20 ز/لتر 2,2,2,2-تريبروموثانول لكل فأر بتركيز 0.2 مل/10 غرام, وجمع الدم من كل من الباربايوينت عن طريق ثقب القلب.
- الطرد المركزي عينات الدم في 916 x ز لمدة 15 دقيقة.
- جمع المصل من supernatant.
- تمييع المصل مع 0.9٪ NaCl في 1:50.
- قياس امتصاص عينات المصل المخفف في 620 نانومتر مع مطياف.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في ستة فئران متبرعة، ارتفعت مستويات السكر في الدم بشكل حاد إلى 26.5 ميكرومول/لتر (زيادة 173%) بمعدل دقيقة واحدة بعد حقن 100 ميكرولتر من الجلوكوز (1.2 جرام/كغ) عبر وريد الذيل ثم انخفضت تدريجياً إلى 13.3 ميكرومول/لتر عند 60 دقيقة. في الفئران المتلقية، زاد مستوى السكر في الدم ببطء بعد الحقن ووصل إلى مستوى الذروة الأول عند 15 دقيقة (زيادة 47٪، 12.2 ميكرومول/لتر). بناءعلى النتائج المذكورة أعلاه، تم تحديد معيار تشيميرسية الدورة الدموية على النحو التالي: 1) زيادة حادة في مستوى السكر في الدم (زيادة 100٪ كحد أدنى أو أكثر من 20 ميكرومول / لتر) في الفئران المانحة في غضون دقيقة واحدة بعد حقن الجلوكوز، و 2) زيادة كبيرة في مستوى السكر في الدم في الفئران المتلقية 15 دقيقة بعد الحقن (زيادة 37٪ كحد أدنى)(الشكل 1).
كما أشار تركيز صبغة إيفانز الزرقاء في مصل البارابيوينت إلى نجاح بناء التشيميرة(الشكل 2). نحن القتل الرحيم البارابيوتيون ات بعد قياس جلوكوز الدم باستخدام 5 مل من 2,2,2-تريبروموثانول (20 غرام/ لتر). لوحظت بوضوح تقاطعات الأوعية الدموية تحت الجلد بين الباربايوينتس(الشكل 3).
يوضح الشكل التكميلي 1 أن الفئران المانحة كان لها زيادة كبيرة في مستوى السكر في الدم بعد 1 دقيقة من حقن الجلوكوز ، في حين لم يتم رفع مستوى الجلوكوز في الدم للفئران المتلقية ، مما يدل على أن التشيميرة الدموية في البارابيوات لم يتم تأسيسها بنجاح بعد يوم واحد من جراحة الباربوميس. وبالمثل، لم يكن مستوى OD في الدم في الفئران المتلقية مرتفعًا مثل مستوى الفئرانالمانحة (الشكل التكميلي 2).
بناء على النتائج من طريقة تقلب الجلوكوز، وجدنا أن اثنين من أزواج من البارابيوات لم تثبت تشيازية الدم بعد 15 يوما من جراحة الباربوريس. كما هو موضح في الجدول التكميلي 1، لم يكن لدى الفئران المتلقية زيادة في مستوى السكر في الدم في غضون 60 دقيقة بعد حقن الجلوكوز في الفئران المانحة. كما لم يتم رفع تركيز الدم من إيفانز الأزرق في المتلقين اثنين(الجدول التكميلي 2),مما يدل على أن طريقة تقلب الجلوكوز كانت حساسة مثل طريقة إيفانز الزرقاء.
وعلاوة على ذلك، لتقييم تأثير الجلوكوز عن طريق الحقن على استقلاب الأنسولين، اكتشفنا مستوى الأنسولين في الدم 1 ح و 3 ساعة بعد حقن 100 ميكرولتر من الجلوكوز (1.2 غرام / كغ) في الفئران(الشكل التكميلي 3). انخفض مستوى الأنسولين في الدم بشكل ملحوظ 1 ساعة بعد حقن الجلوكوز بسبب زيادة الجلوكوز بسرعة وتعافى إلى المستويات العادية في 3 ساعة. أظهرت هذه النتائج أن آثار الجلوكوز الذي حقنناه على استقلاب الأنسولين كانت قابلة للراحة.
الشكل 1: تغيرات مستوى السكر في الدم في البارابايوينت بعد حقن الجلوكوز من خلال الوريد الكودالي. (أ)مستوى السكر في الدم من الفئران المانحة. (ب)مستوى السكر في الدم للفئران المتلقية (n = 6). يتم تقديم البيانات على أنها متوسط ± SEM. * p < 0.05، **p < 0.01، ***p < 0.001 مقابل 0 دقيقة. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: تركيز إيفانز الأزرق في عينات المصل من الباربايونات التي تقاس من قبل قارئ لوحة دقيقة. يتم تقديم البيانات على أنها متوسط ± SEM. ***p < 0.001 (n = 6). يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: توليد vasoganglions تحت الجلد تحت الجلد في الجلد متصلة بين parabionts. إلى اليسار: صورة تمثيلية لفئران البارابيوس. إلى اليمين: صورة تمثيلية للفاسوجانغليون تحت الجلد بين البارابيوات. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 1: تم اختبار مستوى السكر في الدم من البارابايونتس بعد يوم واحد من جراحة الباربوزية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 2: تركيز إيفانز الأزرق يقاس من قبل قارئ microplate في مصل البارابيوات 1 بعد يوم من جراحة parabiosis. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 3: تركيز الأنسولين في مصل الفئران بعد حقن الجلوكوز. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| 0 دقيقة | 5 دقيقة | 15 دقيقة | 20 دقيقة | 40 دقيقة | 60 دقيقة | |
| الجهات المانحة-1 | 5.7 | 26.2 | 21.2 | 17.6 | 16.9 | 15.4 |
| مستلم-1 | 6.7 | 5.8 | 5.9 | 6.2 | 5.2 | 5.4 |
| الجهات المانحة-2 | 8.4 | 25.5 | 21.1 | 20.5 | 17.4 | 13.8 |
| المستلم-2 | 6.7 | 5.8 | 5.9 | 6.2 | 5.2 | 5.4 |
الجدول التكميلي 1: مستوى السكر في الدم (ميكرومول/لتر) في البارابايوينتس بعد 15 يوماً من جراحة البارابوسيد.
| التحكم-1 | الجهات المانحة-1 | مستلم-1 | التحكم-2 | الجهات المانحة-2 | المستلم-2 | |
| قيمة OD | 0.059 | 0.935 | 0.062 | 0.068 | 0.862 | 0.073 |
الجدول التكميلي 2: تركيز الدم من ايفانز الأزرق (قيمة OD) في الباربايوات بعد 15 يوما من جراحة الباربوات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Parabiosis يشير إلى التقنية الجراحية لربط اثنين من الحيوانات الحية لإنشاء نظام الأوعية الدموية المشتركة بالوسائل التجريبية6،7،8. ميزة هذا النموذج هو أن المواد التي تنتجها فرد واحد يمكن أن تعمل على كل من الحيوانات في نفس الوقت. وهكذا، يمكن استخدام نموذج البارابوسيدس لاستكشاف دور مادة أو عامل في مرض ذي صلة، مما ينتج العديد من الاستنتاجات المجدية والمبتكرة. في ضوء قيمة تطبيقه كبيرة، وقد جلبت نموذج عن فهم أفضل لأمراض الجهاز القلبي الوعائي8،9،10،11،12،13،اضطرابات الجهاز العصبي14،15،زرع الأعضاء16،ومرض السكري17،18.
ومع ذلك ، فإن التحقق من النجاح في إنشاء الششيب الدورة الدموية هو الخطوة الأولى والحاسمة للدراسات مع parabiosis. وقد ذكرت الدراسات الحالية بعض الطرق للكشف عن التشيميرية الدورة الدموية. وأفادت Loffredo وآخرون4 أن تأكيد تشية الدم في أزواج الباربايوتيك عن طريق قياس التردد المختلط من monocytes في الطحال مع علامات مختلفة المسمى في المتبرع (CD45.1+) والمتلقي (CD45.2+) الفئران. في هذه الطريقة ، تم استخدام فئران محددة مع CD45.1+- أو CD45.2+أحادية التسمية لكل بارابيوينت للبارابيوس. كان هناك حاجة إلى قياس خلايا الخلية لتحديد تشيميرية الدم عن طريق قياس تكامل خلايا الدم المميزة. وبالإضافة إلى ذلك، قيّم مارتا وآخرون3 الدوران المتبادل عن طريق حقن 200 ميكرولتر من 0.5 في المائة صبغة إيفانز الزرقاء في أحد البارابايوينات. تم جمع الدم من كل من البارابيوينت 2 ح في وقت لاحق عن طريق ثقب القلب. تم تحديد تشية الدم من خلال زيادة تركيز إيفانز الأزرق في الفئران المتلقية ، والتي تم اختبارها من قبل قارئ microplate. على الرغم من أن هذه الاستراتيجيات تسمح لنا بتحديد تشيثارية الدم، لا تزال هناك العديد من القيود التي لا يمكن تجاهلها. أولاً، بالنسبة للطرق القاتلة، لا يمكن تأكيد تشيثارالدم إلا عند الإعدام. ومع ذلك ، في طريقتنا ، يمكن اختبار إنشاء تشيثارية الدم في أي وقت بعد جراحة الباربوريس. يمكن استبعاد البارابيوتمع مع التشيميرة غير الناجحة الراسخة لمزيد من الدراسة مسبقًا لتقليل عبء العمل غير الضروري. في الواقع، باستخدام طريقة تقلب الجلوكوز لدينا تمكنا من اختيار الفئران مع بناء غير ناجحة من تشيازية الدم في بعض الباربايوات، والتي قد تكون بسبب عدم كفاية الوقت من الباربوميس، والتلاعب جراحة غير مستقرة، تأخر التئام الجروح، أو قطع أنسجة الجسم الناجمة عن الحيوانات تكافح. في مثل هذه الظروف ، تم تأكيد فشل تشيثارية الدم أيضًا باستخدام طريقة إيفانز الزرقاء. وتشير هذه النتائج إلى أن طريقة تقلب الجلوكوز كانت فعالة مثل طريقة إيفانز الزرقاء(الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2، والجدول التكميلي 1 والجدول التكميلي 2). ثانياً، إن أساليب التحقق المستخدمة حالياً تستغرق وقتاً طويلاً وصعبة للغاية، على عكس هذه الطريقة الجديدة، وهي بسيطة وفعالة.
في هذه الدراسة، اختبرنا بنجاح لتشية الدورة الدموية في الفئران الباربايوتيك بطريقة تقلب الجلوكوز. تم حقن الفئران لحقن الجلوكوز وقياسات مستوى السكر في الدم ، مما جعل التلاعب بها أسهل. حقننا 100 ميكرولتر من الجلوكوز (1.2 غرام/كغ) من خلال الوريد الذيل للفئران في غضون 10 ق. وفي ظل هذه الظروف، لوحظ تقلب منتظم في مستويات السكر في الدم في الفئران المانحة والمتلقية. الأهم من ذلك، فإن كمية الجلوكوز التي استخدمناها تميل إلى رفع مستوى السكر في الدم بشكل ثابت ضمن نطاق معين. وعلاوة على ذلك، أظهرت النتائج أن مستوى الأنسولين في الدم تعافى إلى المعدل الطبيعي 3 ح بعد حقن الجلوكوز(الشكل التكميلي 3)،مما يشير إلى أن كمية الجلوكوز حقن في الفئران كان لها آثار ضئيلة على استقلاب الأنسولين. بالإضافة إلى ذلك ، كانت جرعة الجلوكوز التي أعطيناها للمتبرع أقل من تلك المستخدمة لاختبار تحمل الجلوكوز للفئران (بالنسبة لـ GTT ، يتم حقن 2 جرام / كجم من الجلوكوز داخل العينين للفئران ، أي ما يعادل حوالي 1.6 جرام / كجم من خلال حقن الوريد الكودالي19،20،21) ، مما يعني أن جرعة الجلوكوز لطريقة تقلب الجلوكوز لن تسبب ارتفاع السكر في الدم والتعديلات الضارة الأخرى. في الختام ، فإن الطريقة التي استخدمناها فعالة وغير ضارة وموفرة للوقت. ومع ذلك ، قد يقتصر على الفئران السكرية في parabiosis ، والتي لا تزال بحاجة إلى مزيد من التجارب لتأكيد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة في الصين (81570399 و 81773735) ، والبرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين - مشروع أبحاث تحديث الطب الصيني التقليدي (2017YFC1702003) ، وهي لونغ جيانغ صندوق علوم الشباب المتميز (JC2017020).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| curved forceps | JZ surgical Instruments, China | J31340 | |
| fine scissors | JZ surgical Instruments, China | WA1030 | |
| needle forcep | JZ surgical Instruments, China | 60017961 | |
| 2.5 mL syringes | Agilent, USA | 5182-9642 | |
| Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
| penicillin | Solarbio, China | IP0150 | |
| tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
| glucometer | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Active test strips | |
| Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
| depilatory cream | Nair, USA | LL9161 | |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
| Electrical shaver | Codos, China | CP-5000 | |
| 3-0,5-0 surgical suture |
Shanghai Medical Suture Needle Factory, China | SYZ 3-0#, SYZ 5-0# |
References
- Baruch, K., et al. Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function. Science. 346 (6205), 89-93 (2014).
- Zhang, Y., et al. Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).
- Torres, M., et al. Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia. Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).
- Loffredo, F. S., et al. Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy. Cell. 153 (4), 828-839 (2013).
- Kamran, P., et al. Parabiosis in mice: a detailed protocol. Journal of Visualized Experiments. (80), e50556 (2013).
- Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity. Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).
- Eggel, A., Wyss-Coray, T. A revival of parabiosis in biomedical research. Swiss Medical Weekly. 144, w13914 (2014).
- Brack, A. S. Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors! EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).
- Wu, J. M., et al. Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury. Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).
- Kaiser, J. 'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice. Science. 344 (6184), 570-571 (2014).
- Rando, T. A., Finkel, T. Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors? New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).
- Heidt, T., et al. Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction. Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).
- McPherron, A. C. Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy. Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).
- Villeda, S. A., et al. Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice. Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).
- Katsimpardi, L., et al. Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors. Science. 344 (6184), 630-634 (2014).
- Starzl, T. E., et al. The lost chord: microchimerism and allograft survival. Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).
- Coleman, D. L. A historical perspective on leptin. Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).
- Salpeter, S. J., et al. Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication. Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).
- Sheldon, R. D., et al. Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis. Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).
- Martineau, M. G., et al. The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth. Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).
- Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease. International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587 (2019).
