Summary
यह लेख गिनी पिग एंडोलिम्फेटिक थैली को मिटाने के लिए एक विवाहेतर दृष्टिकोण को दर्शाता है और प्रयोगात्मक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक ठीक लेने के साथ एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करता है।
Abstract
एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स स्कैला मीडिया का एक विस्तार है जो अक्सर मेनियर की बीमारी से जुड़ा होता है, हालांकि पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र (एस) अस्पष्ट रहता है। एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स की विशेषताओं का पर्याप्त रूप से अध्ययन करने के लिए, जैसे कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उत्पत्ति, एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है। गिनी पिग एक अच्छा मॉडल है क्योंकि यह कम आवृत्ति वाले क्षेत्रों में सुनता है जो एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स से प्रभावित होते हैं। पिछले शोध से पता चला है कि एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को इंट्राड्यूरल या एक्स्ट्राड्यूरल दृष्टिकोणों के माध्यम से शल्य चिकित्सा से प्रेरित किया जा सकता है जिसमें एंडोलिम्फेटिक डक्ट और थैली पर ड्रिलिंग शामिल है। हालांकि, क्या एंडोलिम्फेटिक डक्ट और थैली पर खतरनाक ड्रिलिंग से बचने वाले एक विवाहेतर दृष्टिकोण का उपयोग करके एक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स मॉडल बनाना संभव था, अज्ञात था। इस अध्ययन का उद्देश्य एंडोलिम्फेटिक थैली को मिटाकर और एक ठीक लेने के साथ एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करके 30 दिनों के बाद प्रायोगिक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक संशोधित विवाहान्तर दृष्टिकोण प्रदर्शित करना था । नमूना आकार में सात गिनी सूअर शामिल थे। सुनवाई के कार्यात्मक माप बनाए गए थे और बाद में हस्तकथा विश्लेषण के लिए लौकिक हड्डियों को काटा गया था। इस दृष्टिकोण में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्राप्त करने में 86% की सफलता दर थी। सेरेब्रोस्पाइनल फ्लूइड लीक का खतरा कम था। नमूने में पीछे की अर्धवृत्ताकार नहर में कोई पेरिऑपरेटिव मौत या चोट नहीं आई। प्रस्तुत विधि 30 दिनों के अपेक्षाकृत त्वरित समय बिंदु पर एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने का एक सुरक्षित और विश्वसनीय तरीका दर्शाती है। नैदानिक निहितार्थ यह है कि प्रस्तुत विधि कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उत्पत्ति का पता लगाने के लिए एक विश्वसनीय मॉडल प्रदान करती है जो एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स से जुड़ी हो सकती है।
Introduction
एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स स्कैला मीडिया का विस्तार है। स्कैला मीडिया के क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र का उपयोग करके एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स की उपस्थिति को मापा जा सकता है। यह सोचा जाता है कि नैदानिक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स कम आवृत्ति सेंसरिन्युल हियरल हियरल हियरल हानि से जुड़े हो सकते हैं, जैसे कि मेनियर की बीमारी में देखा जाता है। लेकिन सुनवाई हानि की उत्पत्ति (ओं) अस्पष्ट बनी हुई है । एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स से जुड़े कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उत्पत्ति का पर्याप्त रूप से अध्ययन करने के लिए, एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है।
1 9 65 में, किमुरा और शुकनेच ने बताया कि एक इंट्राड्यूरल दृष्टिकोण1का उपयोग करके गिनी पिग में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को कैसे प्रेरित किया जाए। उनकी तकनीक में ऑपरकुलम और सबरक्यूएट फॉसा तक पहुंचने के लिए पीछे के कपाल खात दृष्टिकोण का उपयोग करना शामिल था। कदम ड्यूरा चीरना शामिल है, एक रिंगर समाधान लथपथ कपास पैड के साथ सेरिबैलम वापस लेने, और एंडोलिम्फेटिक वाहिनी और एंडोलिम्फेटिक थैली के मध्यवर्ती भाग भर में ड्रिलिंग । इसके बाद बोन वैक्स को एंडोलिम्फेटिक डक्ट को डिस्टल एंडोलिम्फेटिक थैली से अलग करने के लिए ऑपरक्यूलम में रखा गया था । क्रैनिओटॉमी दोष को अवशोषित जिलेटिन पाउडर (जैसे, गेलफोम) रखकर और अंतर्निहित मांसपेशियों को काटकर बंद कर दिया गया था। एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स के हिस्टोलॉजिक सबूत लगातार पोस्ट-ऑपरेटिव दिनों 1, 3, 7, 14, 21 और 30 में पाए गए, यह प्रदर्शित करते हुए कि इंट्राड्यूरल दृष्टिकोण हिस्टोलॉजिकल रूप से पुष्टि किए गए एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक विश्वसनीय तरीका था। किमुरा और शुकनेच के समान इंट्राड्यूरल दृष्टिकोण का उपयोग करना, लेकिन विभिन्न समय बिंदुओं के साथ, नमक और DeMott ने पुष्टि की कि कॉकलेया के दूसरे मोड़ में स्कैला मीडिया को 4 दिन और2से परे काफी बढ़ा दिया गया था। जबकि किमुरा और शुकनेच के इंट्राड्यूरल दृष्टिकोण का उपयोग करके सेरेब्रोस्पाइनल फ्लूइड (सीएसएफ) रिसाव को प्रेरित करने की वास्तविक रुग्णता मूल अध्ययन में सूचित नहीं की गई थी, सीएसएफ रिसाव की उपस्थिति दिमागी होने के जोखिम को बढ़ा सकती है। यह सुझाव दिया गया है कि सीएसएफ के नुकसान से पेरिलिम्फ का बहिर्गमन हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप गिनी पिग3में एंडोलिम्फेटिक वॉल्यूम का एक साथ अस्थायी विस्तार हो सकता है। एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक विवाहेतर दृष्टिकोण एक सुरक्षित विकल्प होगा।
1 9 8 9 में, एंड्रयूज और बोहमर ने एंडोलिम्फेटिक थैली और डक्ट तक पहुंचने के लिए दो विवाहान्तर सर्जिकल दृष्टिकोणों का वर्णन किया, या तो एक मध्य कपाल फॉसा दृष्टिकोण या पीछे कपाल फॉसा दृष्टिकोण के माध्यम से, एंडोलिम्फेटिक थैली4को मिटाने के लिए। वे एक हीरे की ड्रिल के साथ operculum हटाने का वर्णन किया है, और फिर या तो एंडोलिम्फेटिक थैली के मध्यवर्ती भाग ड्रिलिंग या एक ठीक लेने का उपयोग करने के लिए एंडोलिम्फेटिक थैली और वाहिनी को बाधित । 1 99 3 में, ली, राइट और मेयरहॉफ ने इसी तरह के दृष्टिकोण का वर्णन किया, जिसमें एंडोलिम्फेटिक सैक और डक्ट के माध्यम से ड्रिलिंग शामिल थी, लेकिन इसमें मतभेद था कि उन्होंने कॉकलियर जलसेतु5को भी एक साथ बाधित किया। उन्होंने एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स की उपस्थिति का प्रदर्शन किया, जैसा कि हिटोलॉजी के माध्यम से मूल्यांकन किया गया है, चार सप्ताह में एंडोलिम्फेटिक थैली को काटना और कॉकलियर जलसेतु में बाधा डालने के बाद । मेगेरियन एट अल पहले एंडोलिम्फेटिक थैली और वाहिनी के एक विवाहेतर विलोपन का प्रदर्शन करने वाला एक वीडियो लेख प्रकाशित करने वाला था जिसमें एंडोलिम्फेटिक थैली और डक्ट6में प्रवेश करने के लिए ऑपरक्यूलम के मध्यस्थ हिस्से पर सीधे ड्रिलिंग शामिल थी। उन्होंने सर्जरी के बाद 28 सप्ताह में बलिदान किए गए गिनी पिग में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स के हिस्टोलॉजिक सबूतों का प्रदर्शन किया, साथ ही 16 किलोवाट क्षेत्र6में सुनवाई हानि भी की । क्या यह एक प्रारंभिक समय बिंदु पर विवाह विज्ञान की पुष्टि की एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स और कम आवृत्ति सुनवाई हानि को प्रेरित करना संभव था, यह अज्ञात था।
इस रिपोर्ट का समग्र लक्ष्य एंडोलिम्फेटिक थैली को काटना और एक ठीक लेने के साथ एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करके 30 दिनों के बाद प्रायोगिक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक विवाहातर दृष्टिकोण प्रदर्शित करना है । इस तकनीक के इस्तेमाल के पीछे तर्क पेट्रोस टेम्पोरल बोन पर ड्रिल करने की जरूरत से बचने का फायदा है, जिससे ड्यूरा को गलती से घायल होने का खतरा दूर हो जाता है और सीएसएफ लीक होने का खतरा पैदा हो जाता है, जिससे पीछे सेमीसर्कुलर नहर में घायल होने की संभावना कम हो जाती है और सिग्नोइड सीनस में चोट लगने का खतरा कम हो जाता है।
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Protocol
प्रोटोकॉल अनुभाग में तुरंत नीचे सूचीबद्ध सभी प्रक्रियाओं को सेंट लुइस इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी में वाशिंगटन विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल में वर्णित किया गया था ।
1. एनेश्थेटिक इंडक्शन और महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी
नोट: इस अध्ययन में एक घर में प्रजनन कॉलोनी से प्राप्त वर्णक NIH-तनाव गिनी सूअरों का इस्तेमाल किया ।
- या तो सेक्स के गिनी सूअरों का प्रयोग करें, कम से कम 350 ग्राम वजनी।
- गिनी पिग को नवजात वार्मिंग आइसोलेट में रखें और इंडक्शन एनेस्थीसिया के लिए केटामाइन/जाइलाजिन मिश्रण इंट्रापेरिटोनली (50 मिलीग्राम/किलो ग्राम केटामाइन और 10 मिलीग्राम/किलो जाइलाज़ीन) दें। गिनी सुअर का निरीक्षण करें जब तक कि यह अंगूठे-चुटकी पलटा खो देता है।
- एक बार अंगूठे चुटकी सजगता के नुकसान होता है, पीछे गर्दन और एक बाल ट्रिमर आम तौर पर मानव उपयोग के लिए विज्ञापित ट्रिमर के साथ गिनी सुअर के सिर दाढ़ी ।
- जानवर के पीछे स्तनपान कराने वाले रिंगर के समाधान के 12 मिलील के एक चमड़े के नीचे बोलस इंजेक्ट करें।
- पैरों के साथ एक वार्मिंग पैड पर गिनी सुअर सुपाइन रखें और 27.5 ग्राम तितली सुई इंट्रापेरिटोनी रखें। सत्यापित करें कि तितली सुई इंट्रापेरिटोनियल अंतरिक्ष में केवल हवा को सुनिश्चित करके सही स्थिति में है। यदि रक्त या तरल पदार्थ को एस्पिरेटेड किया जाता है, तो संवहनी या आंत्र प्रणाली में वितरण की चिंता है। तितली सुई संज्ञाहरण के बार प्रशासन के लिए प्रयोग किया जाता है।
- गिनी पिग को प्रवण स्थिति में पलटें और सिर को स्टीरियोटैक्टिक धारक को सुरक्षित करें।
- पैर के लिए एक पल्स ऑक्सीमीटर सुरक्षित करें। यदि पिगमेंक्त गिनी सूअरों का उपयोग करके, वर्णक पंजे ऑक्सीजन संतृप्ति पढ़ने को रोक सकते हैं। इसलिए, पल्स ऑक्सीमीटर को किसी भी पंजा पर रखें जो वर्णक नहीं है।
- शरीर के तापमान की निगरानी के लिए गुदा तापमान जांच डालें। गुदा जांच एक वार्मिंग कंबल प्रणाली का हिस्सा है जो शरीर के तापमान को 38 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखता है। वार्मिंग कंबल पर बारी नहीं जब तक गुदा जांच जगह में है वार्मिंग कंबल overheating से बचने के लिए । यदि गुदा जांच रखने में कठिनाई हो रही है, यह गिनी सुअर के शरीर के साथ रखा जा सकता है ।
- कॉर्नियल घर्षण को रोकने के लिए गिनी पिग की दोनों आंखों पर स्नेहक लगाएं।
- 90% से ऊपर ऑक्सीजन संतृप्ति के स्तर को बनाए रखने के लिए नाक के पास तैनात रबर ट्यूबिंग के माध्यम से आवश्यक पूरक ऑक्सीजन का प्रबंध करें।
- एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस के रूप में एनरोफ्लोक्सासिन 0.5 मिलीग्राम/किलोग्राम सबक्यूटेनस दें।
- स्थानीय संज्ञाहरण और वासोकॉन्स्ट्रिक प्रभावों के लिए प्रत्याशित चीरा स्थल पर 1:100,000 एपिनेफ्रीन के साथ 0.25 मिलीग्राम/किलो बुपिवाकेन दें।
- 4 चक्रों के लिए हर 20 मिनट में रखरखाव संज्ञाहरण प्रदान करें और फिर केवल महत्वपूर्ण संकेतों के आधार पर आवश्यक के रूप में। नियमित रूप से शरीर के तापमान, श्वसन दर, ऑक्सीजन संतृप्ति और हृदय गति से संज्ञाहरण की गहराई की निगरानी करें।
- हर 15 मिनट (तापमान, श्वसन दर, हृदय गति, और ऑक्सीजन संतृप्ति) महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी करें।
2. सर्जिकल तैयारी
- एक बार गिनी सुअर का सिर एक स्टीरियोटैक्टिक धारक में सुरक्षित रूप से तैनात हो जाता है, तो ऑक्सीपुट को ओवरलाइंग त्वचा के साथ पर्याप्त तनाव प्रदान करने के लिए पीठ पर मास्किंग टेप का एक टुकड़ा रखें। स्टीरियोटैक्टिक धारक को टेप के सिरों को सुरक्षित करें।
- आयोडीन समाधान और 70% इथेनॉल के साथ आयोडीन समाधान और 70% इथेनॉल के साथ तीन बार त्वचा को उदारतापूर्वक प्रस्तुत करना।
- इस बिंदु पर, बाँझ सावधानियों और स्वचालित उपकरणों का उपयोग करें। गिनी पिग के ऊपर बाँझ पर्दे रखें।
3. सर्जिकल प्रक्रिया
- एक 15 ब्लेड का उपयोग करना, पीछे की गर्दन में नीचे का विस्तार करने के पीछे occiput के साथ एक छोटे, मिडलाइन चीरा बनाते हैं । एक बार त्वचा के नीचे, आइरिस कैंची का उपयोग करने के लिए occipital हड्डी से सही पीछे गर्भाशय ग्रीवा की मांसपेशियों को अलग । यदि मांसपेशियों को काटते समय कोई रक्तस्राव होता है, तो बाँझ कपास की गेंद के साथ दबाव लागू करके नियंत्रित करें।
-
5-0 सक्शन और बाँझ सिंचाई के साथ #3 मिमी, #2 मिमी और #1 एमएम डायमंड बर्र के संयोजन का उपयोग करके, एक क्रैनिओटॉमी करें जो बाहरी ऑक्सीपिटल क्रेस्ट, लैम्बोइडल रिज, ऑक्सिसिटोमास्टोमाइड सीचर लाइन और फोरमेन मैग्नम के पृष्ठीय मार्जिन से घिरा हुआ है।
- ड्यूरा से ऑक्सीपिटल बोन को अलग करते हुए धीरे-धीरे हड्डी के नीचे खारा-गीला सूती गेंद का एक छोटा सा टुकड़ा रखें।
- कंकाल एक #0.5 मिमी हीरे के burr के साथ सिग्माइड सीनस को साफ़ करते हैं और सावधानी से इसे ओवरलाइंग करने वाली हड्डी को हटा दें।
- एक बार सिग्माइड सीनस उजागर हो जाने के बाद, धीरे-धीरे एक सूती गेंद का उपयोग करके सिग्माइड सिनस को धीरे से वापस ले लें और 3-0 सक्शन का उपयोग करने के लिए स्विच करें।
- ऑपरकुलम को एक भट्ठा जैसी संरचना के रूप में पहचानें जो पेट्रोस लौकिक हड्डी के भीतर स्थित है। सबआर्क्यूएट फॉसा बेहतर ढंग से स्थित होगा और सिग्माइड सीनस इसमें मध्यस्थता करेंगे। एंडोलिम्फेटिक थैली के अतिरिक्त-ओसेसस हिस्से को तब ओपरक्यूलम में प्रवेश करने वाली एक स्पष्ट थैली के रूप में कल्पना की जाती है और सिग्मोइड सीनस को ओवरलाइंग करने वाले ड्यूरा से जुड़ा हुआ है। ऑपरकुलम अंडाकार आकार का होता है, लगभग 3 से 4 मिमी 1.5 से 2 मिमी तक होता है। हालांकि, जैसा कि सर्जिकल दृश्य से देखा गया है, ऑपरकुलम लगभग 1 मिमी भट्ठा के रूप में दिखाई देता है। सर्जिकल दृश्य से थैली का दृश्य हिस्सा लगभग एक ही आकार है जो ऑपरकुलम के दृश्य वाले हिस्से के समान है, यदि छोटा नहीं है।
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एंडोलिम्फेटिक थैली के अतिरिक्त-ऑसियस हिस्से की स्पष्ट रूप से कल्पना करने और एंडोलिम्फेटिक थैली के असाधारण और इंट्राओसेसियस भागों के बीच तनाव बढ़ाने के लिए सिग्मोइड सिनस मीडियाली पर कोमल रिऐक्शन लागू करें।
- एंडोलिम्फेटिक थैली के मध्यवर्ती हिस्से को धीरे-धीरे निकालने के लिए एक ठीक कोण वाली पिक का उपयोग करें। यह महत्वपूर्ण है कि निष्कासन प्रक्रिया ड्यूरा और ऑपरकुलम के बीच कोई दृश्यमान संबंध नहीं छोड़ती है; फिर इसे घायल करने के लिए हड्डी के अंदर मोटे तौर पर परिमार्जन करने के लिए ऑपरकुलम के अंदर एक ठीक उठाओ रखें।
- एंडोलिम्फेटिक डक्ट की दिशा में ठीक लेने की बारी और आंख बंद करके अस्तर को बाधित करें। इस बिंदु पर कुछ रक्तस्राव ऑपरकुलम के भीतर एक पोत से हो सकता है। इसे कपास के एक छोटे से टुकड़े से नियंत्रित किया जा सकता है।
- कपास के एक छोटे से टुकड़े के साथ खाली ऑपरकुलम को सुखा लें। कपास को सूखा रखने के लिए आवश्यक 3-0 सक्शन का उपयोग करना।
- लौकिक हड्डी के स्क्वैमसल हिस्से के साथ परिमार्जन करने के लिए एक छोटे से क्यूरेट का उपयोग करके हड्डी धूल प्राप्त करें। उदारता से हड्डी धूल के साथ ऑपरकुलम पैक। हड्डी की धूल से पैकिंग करते समय क्षेत्र को सूखा रखने के लिए एक कपास की गेंद और सक्शन का उपयोग करें।
- इसे सील करने के लिए ओपरकुलम पर बोन वैक्स लगाएं। सुनिश्चित करें कि खोपड़ी में कोई अतिरिक्त हड्डी मोम नहीं है।
- खोपड़ी दोष को कवर करने के लिए हड्डी मोम का उपयोग करें।
- एक बाधित फैशन में 4-0 लट, अवशोषित सीवन के साथ पीछे गर्भाशय ग्रीवा की मांसपेशियों का अनुमान है।
- 4-0 लट, अवशोषित सीवन का उपयोग करके एक चमड़े के बंद करो।
4. पोस्ट-प्रोसीजर केयर
- कस्टम स्टीरियोटैक्टिक धारक से गिनी सुअर निकालें और एक वार्मिंग आइसोलेट के लिए स्थानांतरित करें।
- 2 मिलीग्राम/किलो Atipamezole और स्तनपान वल्डर के समाधान के 24 मिलीग्राम (चीरा से दूर नीचे) दे । जाइलाज़ी के मूत्रवर्धक प्रभावों के कारण स्तनपान कराने वाला रिंगर का समाधान दें। पोस्ट-ऑपरेटिव एनाल्जेसिक कवरेज के लिए 0.2 मिलीग्राम/किलो मेमोक्सीकैम को नीचे प्रशासित करें।
- हर 15 मिनट में महत्वपूर्ण संकेत प्राप्त करें जब तक गिनी सुअर पूरी तरह से संज्ञाहरण से उभर रहा है।
- वसूली अवधि के दौरान सर्जरी के अंत से लगभग 2 घंटे स्तनपान कराने वाले रिंगर के समाधान के अतिरिक्त 12 एमएल द्रव बोलस दें।
- एक बार गिनी सुअर सतर्क है, ambulating, शून्य, और आंत्र आंदोलनों होने, पशु सुविधा के लिए गिनी सुअर वापस । गिनी पिग को संज्ञाहरण से पूरी तरह से उभरने के लिए लगभग 2 से 4 घंटे की आवश्यकता होती है।
- पहले तीन पोस्ट ऑपरेटिव दिनों के लिए रोजाना दो बार गिनी सूअरों की निगरानी करें। यदि असुविधा के लक्षण देखे जाते हैं, तो आवश्यकतानुसार हर 24 घंटे में 0.2 मिलीग्राम/किलो मेमोक्सीकैम को नीचे प्रशासित करें। वैकल्पिक रूप से, यदि लक्षणों को मेलोक्सिकैम द्वारा पर्याप्त रूप से प्रबंधित नहीं किया जाता है तो बुप्रेनोर्फिन (0.05 मिलीग्राम/किलो) को चमड़े से प्रशासित किया जा सकता है।
- स्तनपान कराने वाले रिंगर के समाधान के 12 mL द्रव बोलस को तीन दिनों तक दिन में दो बार दें जब तक कि गिनी पिग प्री-ऑपरेटिव वजन तक न पहुंच जाए। यदि गिनी पिग तीसरे पोस्ट-ऑपरेटिव दिन से पहले अपने पूर्व-ऑपरेटिव वजन तक पहुंचता है, तो तरल पदार्थ बोलस बंद करें। यदि गिनी सुअर पहले तीन दिनों के बाद वजन कम करने के लिए जारी है, एक पूरक पोषण शेक आम तौर पर कुचल गिनी सुअर भोजन छर्रों के साथ मिश्रित मानव उपभोग के लिए विज्ञापित का उपयोग करें ।
- गिनी सूअरों को उनके अंतिम बिंदु तक साप्ताहिक मॉनिटर करते हैं।
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Representative Results
प्रस्तुत विधि ने एंडोलिम्फेटिक थैली को मिटाने और दो पुरुषों और पांच महिलाओं से मिलकर सात गिनी सूअरों में एक ठीक लेने के साथ एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करने के लिए एक विवाहेतर दृष्टिकोण का उपयोग किया। सर्जरी की औसत अवधि चीरा से बंद करने के लिए 2 घंटे था । ड्रिल का कुल समय 5-10 मिनट से लेकर रहा । गिनी पिग को संज्ञाहरण से पूरी तरह उभरने के लिए 4 घंटे तक की जरूरत थी। सैंपल में इंट्रा ऑपरेटिव या पोस्ट ऑपरेटिव मौतें नहीं हुईं । गिनी-चुनी सूअरों में से किसी में पीछे की अर्धवृत्ताकार नहर या दुरा को कोई चोट नहीं आई । सिग्माइड सिनस को चोट एक गिनी पिग (डेटा विश्लेषण से बाहर) में हुई।
गिनी सूअरों को श्रवण समारोह मापन बनाने के लिए बलिदान के दिन (पोस्ट-ऑपरेटिव दिन 30) पर एक दूसरी प्रक्रिया से गुजरना पड़ा जिसमें श्रवण तंत्रिका ओवरलैप ्ड वेवफॉर्म (ANOW) और कॉकलियर यौगिक कार्रवाई क्षमता (सीएपी) शामिल थे। ANOW और कैप माप बनाए गए थे, और विश्लेषण किया गया, पहले7,,8,,9वर्णित तरीकों का उपयोग करके। एओओएक विशुद्ध रूप से तंत्रिका माप है जो एपिकल कॉकलियर छमाही7, 8,,9में तंत्रिका उत्तेजना से उत्पन्न होता है ।8 श्रवण समारोह परीक्षणों के बाद, कानों को तुरंत काटा गया और पहले10वर्णित तरीकों का उपयोग करके हिस्टोलॉजिक विश्लेषण के लिए तैयार किया गया। सफल हिस्टोलॉजिकल तैयारी छह कानों में पूरी हो गई, लेकिन एक कान में रिसनर की झिल्ली में आंसू दिखाई दिए। आंसुओं के साथ कान को हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण से खत्म कर दिया गया था लेकिन शारीरिक विश्लेषण में रखा गया था। स्काला मीडिया के क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र को इमेजजे11का उपयोग करके मापा गया था। लौकिक हड्डियों के हिस्टोलॉजिक विश्लेषण बाएं कॉकलिया(चित्रा 1)की तुलना में दाएं कोचलिया में सात गिनी सूअरों में से छह में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स का पता चला। चित्रा 1में, संचालित, दाहिने कान (लाल) पर स्कैला मीडिया क्रॉस सेक्शनल क्षेत्र को कॉन्ट्रालेटरल, बाएं कान (नीले) की तुलना में बढ़ाया जाता है, जो दाहिने कान में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स का प्रदर्शन करता है। प्रत्येक मोड़ पर स्काला मीडिया के क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र को भी निर्धारित किया गया था और गिनी सूअरों(चित्रा 2)को नियंत्रित करने की तुलना में। एक कान से उपाय चित्रा 2 में शामिल नहीं थे क्योंकि एक हिस्टोलॉजिकल तैयारी की समस्या है कि Reisner झिल्ली आंसू के कारण । नियंत्रण गिनी सूअरों या तो नकली सर्जरी से गुजरना पड़ा था (जिसमें एंडोलिम्फेटिक थैली की पहचान की गई थी लेकिन परेशान नहीं) या श्रवण समारोह उपाय करने के लिए आवश्यक के अलावा किसी भी सर्जरी नहीं आया था । नियंत्रण की तुलना में, क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र आम तौर पर एंडोलिम्फेटिक थैली(चित्रा 2)के विलोपन के 30 दिनों के बाद जीवित कानों में बड़ा था। ANOW थ्रेसहोल्ड (‧1 kHz) सात गिनी सूअरों में से छह में वृद्धि हुई है कि गिनी सूअरों को नियंत्रित करने की तुलना में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स का प्रदर्शन किया, कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उपस्थिति का प्रदर्शन(चित्रा 3)। श्रवण ब्रेनस्टेम प्रतिक्रिया, या कॉकलियर यौगिक कार्रवाई क्षमता (कैप) की लहर 1, थ्रेसहोल्ड सात गिनी सूअरों में से छह में 8 किलोवाट से ऊपर आवृत्तियों पर सामान्य सीमा के भीतर थे(चित्रा 3)।
चित्रा 1: गिनी पिग कॉकलेया के मध्य-मोडोलर कट की हिस्टोलॉजिक छवियां। यह गिनी पिग एक विवाहेतर दृष्टिकोण का उपयोग करके एंडोलिम्फेटिक थैली के विलोपन के 30 दिनों बाद बच गया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: कॉकलियर लंबाई के एक समारोह के रूप में स्काला मीडिया के क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र। सात में से छह व्यक्तिगत कानों से उपाय लाल रंग में होते हैं। ग्रे धराशायी लाइनें नियंत्रण कानों से उपायों के ± 1 मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3: श्रवण समारोह माप (ANOW और CAPs) पोस्ट ऑपरेटिव दिन 30 पर मापा । एओए उपाय 1 किलोमीटर हर्ट्ज और कैप उपाय किए गए हैं और 1 किलोवाट हर्ट्ज। अलग-अलग कानों से उपाय लाल रंग में होते हैं। ग्रे धराशायी लाइनें गिनी सूअरों को नियंत्रित करने के लिए थ्रेसहोल्ड के ± 1 मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
प्रस्तुत विवाहेतर विधि हिस्टोलॉजिकल रूप से पुष्टि की एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स और कम आवृत्ति सुनवाई हानि को प्राप्त करने में ८६% की सफलता दर थी । विधि मज़बूती से पोस्ट ऑपरेटिव दिन 30 द्वारा एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स के हिस्टोलॉजिकल सबूत हासिल की, पूर्व अध्ययन है कि एक अंतरकर्ण दृष्टिकोण2का इस्तेमाल के अनुरूप । मौजूदा तरीकों के संबंध में विधि का महत्व यह है कि सीएसएफ रिसाव की आवश्यकता नहीं है, इस प्रकार एक संभावित भ्रामक चर को हटा दिया गया है जिसके परिणामस्वरूप एंडोलिम्फेटिक वॉल्यूम3का प्रतिपूरक, अस्थायी विस्तार करने का सुझाव दिया गया है। कुल मिलाकर, विधि प्रयोगात्मक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक त्वरित, सुरक्षित और विश्वसनीय तरीका दर्शाता है।
प्रस्तुत विधि में पूर्व अध्ययनों की तुलना में कई ताकतें हैं। सबसे पहले, दृष्टिकोण विवाहेतर था, संभावित रुग्णता और एक सीएसएफ रिसाव के भ्रामक प्रभावों को कम । दूसरा, एंडोलिम्फेटिक थैली को निकालने और एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करने के लिए ड्रिल के बजाय एक ठीक पिक का उपयोग करके, विधि पीछे की अर्धवृत्ताकार नहर में किसी भी संभावित चोट से बचती है। एक महत्वपूर्ण कदम ड्यूरा और ऑपरकुलम के बीच कोई दिखाई संबंध सुनिश्चित कर रहा है । तीसरा, एक ड्रिल के बजाय लौकिक हड्डी में एक ठीक लेने का उपयोग कर, विधि पेट्रोस लौकिक हड्डी पर ड्रिलिंग की वजह से ध्वनिक आघात के लिए क्षमता को कम । अंत में, विधि गिनी सूअरों की तेजी से वसूली और सफल पोस्ट-ऑपरेटिव पाठ्यक्रम सुनिश्चित करने के लिए एक अनुकूलित पेरी-ऑपरेटिव पशु प्रोटोकॉल प्रदान करती है। विधि की एक सीमा केटामाइन/जाइलाज़ीन का उपयोग है, जिसे स्टीरियोटैक्सिक डिवाइस का उपयोग करके दूर किया जा सकता है जो आइसोफ्लोरीन डिलीवरी की अनुमति देता है।
परिणामों के वैज्ञानिक निहितार्थ 30 दिनों के अपेक्षाकृत त्वरित समय बिंदु पर एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक सुरक्षित और विश्वसनीय तरीके का विकास कर रहे हैं। नैदानिक निहितार्थ यह है कि विधि एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स का एक विश्वसनीय मॉडल प्रदान करती है ताकि संबंधित कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उत्पत्ति का पता लगाया जा सके। विधि के भविष्य के अनुप्रयोगों का उपयोग एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स से जुड़े कम आवृत्ति सुनवाई हानि की उत्पत्ति (एस) का आगे अध्ययन करने के लिए किया जाएगा। निष्कर्ष में, प्रस्तुत विधि एक संशोधित ऑक्सीपिटल, विवाहेतर दृष्टिकोण है जिसमें एंडोलिम्फेटिक थैली को काटना और गिनी पिग में 30 दिनों के बाद प्रयोगात्मक एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक ठीक लेने के साथ एंडोलिम्फेटिक डक्ट को घायल करना शामिल है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
हम आंकड़ों और सामग्री की मेज के साथ सहायता के लिए शांनोन एम Lefler शुक्रिया अदा करते हैं । इस प्रकाशन में रिपोर्ट अनुसंधान राष्ट्रीय बहरापन संस्थान और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के भीतर अंय संचार विकारों संस्थान द्वारा समर्थित था, "चिकित्सक के विकास के माध्यम से/ सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करता है ।
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
12 mL syringe | Henke-Sass Wolf | 5100-X00V0 | |
1 mL and 3 mL syringe | BD Precision(Ordered from Fischer Sci) | 14-826-87 15859152 | |
27.5 butterfly gauge needle | Terumo Surflo Winged Infusion Set, Terumo Corporation, Japan) (Ordered from McKesson) | 448407 | |
4-0 suture | McKesson | 1034507 | |
4 x 4 gauze sponges | Dukal (Ordered form McKesson) | 374454 | |
60 mL syringe | Fisher Sci | 22-031-375 | |
Anspach otologic drill | Anspach | SC2100 | |
atipamezole | Zoetis | 107204-6 | |
autoclave | Fisher sci | 15-103-0508 | |
autoclave bags | McKesson | 524881 | |
bayonet separator | Olympus | AL 130564 | |
bupivicaine | auro Medics Pharma | 555150-169-10 | |
clear sterile drape | 3M | 1020 | |
cotton balls | Fisherbrand (ordered from Fisher Sci) | 22-456-885 | |
cotton swabs | McKesson | 508716 | |
diamond burrs #3, #2, #1, and #0.5 mm | Anspach | QD8-3SD; QD8-2SD; QD8-1SD; QD8-05SD | |
diaper pad | McKesson | 945330 | |
disposable 15 blade | Swann-Morton | 0305 | |
enrofloxacin | Hospira | 0409-4888-01 | |
epinephrine | McKesson | 63739-0456 | |
eye ointment | Dechra Vet Products | 17033-211-38 | |
Freer elevator | Grace Medical | 215100FX | |
gelfoam | Pfizer (Ordered from McKesson) | 82830 | |
hair trimmers | Oster Power Pro Cordless (ordered from Amazon) | 078400-020-000 | |
iodine scrub | Purdue Pharma (ordered from mcKesson) | 521243 | |
iris scissors | Olympus | CL-542114 | |
ketamine | Henry Schein Animal Health | 55853 | |
lactated ringers | B. Braun Medical (ordered from McKesson) | 186662 | |
lancet knife by Rosen | Grace Medical | 151100FX | referred to as curette in the text |
lubricant | Milex (ordered from Cooper Surgical) | MX5030 | |
masking tape | 3M (ordered from fisher sci | 19047259 | |
metal rectangle basin | Amazon | B07NQDBC6T | |
needle holder | Olympus | CR 213015-ENT | |
needles: 27 gage, 18 gauge | BD Precision(Ordered from Fischer Sci) | 14-826-48 14-826-5D | |
neonatal warming isollete | Air Borne Life Support Systems | 731-1800 | |
operating microscope | Carl Zeiss | OPMI pico | |
oxygen tank | AirGas | OX USP200 | |
pulse ox | CapnoTrue (Ordered from Medacx) | M-3090112001 | |
rectal probe with heating blanket | Harvard Apparatus | probe: PY2 50-7217 Heating Blanket: PY2 50-7214 | |
red body holder | Lichtenhan Lab | N/A | In-house product |
right angle | Olympus | BV-230337 | |
rosen needle | Olympus | AM-130566 | customized, it is the instrument I use to tear the sac |
rubber tubing for O2 administration | Fisher Sci | 14-171-104 | |
saran wrap | Fisher Sci | NC9617977 | |
stereotactic head holder | WUSTL Instrument Machine Shop | N/A | In-house product |
sterile drapes | Cardinal Health | 7553 | |
suction tube by Baron | Grace Medical | 034903FX 034905FX | #3 and #5 Suction |
tissue forceps adson brown | Grace Medical | 325112FX | |
Weitlander retractor | Olympus Grace Medical | BL200011 100313FX | |
xylazine | Akorn | 59399-110-20 |
References
- Kimura, R. S., Schuknecht, H. F. Membranous Hydrops in the Inner Ear of the Guinea Pig after Obliteration of the Endolymphatic Sac. Pract oto-rhino-laryng. 27, 343-354 (1965).
- Salt, A. N., DeMott, J. Time course of endolymph volume increase in experimental hydrops measured in vivo with an ionic volume marker. Hearing Research. 74 (1-2), 165-172 (1994).
- Walsted, A., Garbarsch, C., Michaels, L. Effect of craniotomy and cerebrospinal fluid loss on the inner ear. An experimental study. Acta Oto-Laryngologica. 114 (6), 626-631 (1994).
- Andrews, J. C., Bohmer, A. The surgical approach to the endolymphatic sac and the cochlear aqueduct in the guinea pig. American Journal of Otolaryngology. 10 (1), 61-66 (1989).
- Lee, J. R., Wright, C. G., Meyerhoff, W. L. Modified occipital approach to the endolymphatic sac and cochlear aqueduct of the guinea pig. American Journal of Otolaryngology. 14 (2), 165-169 (1993).
- Megerian, C. A., et al. Surgical induction of endolymphatic hydrops by obliteration of the endolymphatic duct. Journal of Visualized Experiments. (35), (2010).
- Lichtenhan, J. T., Cooper, N. P., Guinan, J. J. Jr A new auditory threshold estimation technique for low frequencies: proof of concept. Ear and Hearing. 34 (1), 42-51 (2013).
- Lichtenhan, J. T., Hartsock, J., Dornhoffer, J. R., Donovan, K. M., Salt, A. N. Drug delivery into the cochlear apex: Improved control to sequentially affect finely spaced regions along the entire length of the cochlear spiral. Journal of Neuroscience Methods. 273, 201-209 (2016).
- Lichtenhan, J. T., Hartsock, J. J., Gill, R. M., Guinan, J. J. Jr, Salt, A. N. The auditory nerve overlapped waveform (ANOW) originates in the cochlear apex. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 15 (3), 395-411 (2014).
- Lichtenhan, J. T., Hirose, K., Buchman, C. A., Duncan, R. K., Salt, A. N. Direct administration of 2-Hydroxypropyl-Beta-Cyclodextrin into guinea pig cochleae: Effects on physiological and histological measurements. PloS One. 12 (4), e0175236 (2017).
- Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).