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दबाव-वॉल्यूम लूप विश्लेषण द्वारा निर्धारित β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के लिए कार्डियक रिस्पांस

Published: May 19, 2021 doi: 10.3791/62057
Automatic Translation
*1,2, *1,2,3, *1,2,4, 1,2, 1,2
1Pharmakologisches Institut, Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg, 2DZHK (German Centre for Cardiovascular Research), partner site Heidelberg/Mannheim, 3Department of Internal Medicine III, University of Heidelberg, 4Department of Anesthesiology, University Hospital RWTH Aachen
* These authors contributed equally

Summary

यहां हम आंतरिक हृदय कार्य और चूहों में β-एड्रेनेर्जिक रिजर्व निर्धारित करने के लिए नसों में संचार आइसोप्रोटेरेनॉल की बढ़ती खुराक के तहत कार्डियक प्रेशर-वॉल्यूम लूप विश्लेषण का वर्णन करते हैं। हम दबाव-मात्रा लूप माप के लिए एक संशोधित ओपन-चेस्ट दृष्टिकोण का उपयोग करते हैं, जिसमें हम सकारात्मक अंत-समाप्ति दबाव के साथ वेंटिलेशन शामिल करते हैं।

Abstract

हृदय कार्य का निर्धारण हृदय रोगों के पशु मॉडल में एक मजबूत अंत बिंदु विश्लेषण है ताकि दिल पर विशिष्ट उपचार के प्रभाव की विशेषता हो। आनुवंशिक जोड़तोड़ की व्यवहार्यता के कारण माउस हृदय समारोह का अध्ययन करने और नए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों की खोज करने के लिए सबसे आम स्तनधारी पशु मॉडल बन गया है। यहां हम बेसल स्थितियों के दौरान दबाव-मात्रा लूप माप और विश्लेषण का उपयोग करके वीवो में कार्डियक फ़ंक्शन निर्धारित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं और आइसोप्रोटेरेनोल की बढ़ती सांद्रता के नसों में जलसेक द्वारा β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के तहत। हम खुली छाती के माप के दौरान नकारात्मक प्रभावों को सुधारने के लिए सकारात्मक अंत-समाप्ति दबाव को ध्यान में रखते हुए वेंटिलेशन समर्थन सहित एक परिष्कृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, और प्रक्रिया के दौरान दर्द से पैदा किए गए बेकाबू मायोकार्डियल तनाव से बचने के लिए शक्तिशाली एनाल्जेसिया (बुप्रेनोरफिन)। सभी एक साथ प्रक्रिया और संभावित नुकसान के बारे में चर्चा का विस्तृत विवरण अत्यधिक मानकीकृत और प्रजनन दबाव मात्रा पाश विश्लेषण सक्षम बनाता है, संभव पद्धति पूर्वाग्रह को रोकने के द्वारा प्रयोगात्मक पलटन से जानवरों के बहिष्कार को कम करने ।

Introduction

हृदय रोग आमतौर पर हृदय कार्य को प्रभावित करते हैं। यह अंक पशु रोग मॉडल में वीवो विस्तृत हृदय समारोह में आकलन करने में महत्व बताते हैं । पशु प्रयोग तीन रुपये (3Rs) मार्गदर्शक सिद्धांतों (कम/Refine/प्रतिस्थापित) के एक फ्रेम से घिरा हुआ है । वर्तमान विकास स्तर पर प्रणालीगत प्रतिक्रियाओं (यानी हृदय रोगों) से जुड़ी जटिल विकृतियों को समझने के मामले में, मुख्य विकल्प उपलब्ध तरीकों को परिष्कृत करना है। रिफाइनिंग से कम परिवर्तनशीलता के कारण आवश्यक पशु संख्या में कमी आएगी, जिससे विश्लेषण और निष्कर्षों की शक्ति में सुधार होगा । इसके अलावा, हृदय रोग के पशु मॉडलों के साथ हृदय अनुबंध माप का संयोजन, जिसमें न्यूरोह्यूमोरल उत्तेजना से प्रेरित या महाधमनी बैंडिंग जैसे दबाव अधिभार शामिल हैं, जो उदाहरण के लिए परिवर्तितकैटेकोलामाइन/β-एड्रेनेर्जिक स्तर1, 2,3,4,पूर्व-नैदानिक अध्ययनों के लिए एक शक्तिशाली विधि प्रदान करता है। इस बात को ध्यान में रखतेहुएकि कैथेटर-आधारित विधि हृदय संकुचन 5 के गहराई से मूल्यांकन के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला दृष्टिकोण बना हुआ है, हमने यहां इस दृष्टिकोण 6 के विशिष्ट मापदंडों के मूल्यांकन सहित पिछले अनुभव के आधार पर β दबाव-मात्रा लूप (पीवीएल) माप केदौरानचूहों में वीवो कार्डियक फंक्शन में परिष्कृत माप पेश करने का लक्ष्य रखाहै, 7.

कार्डियक हेमोडायनामिक मापदंडों को निर्धारित करने के लिए जिनमें इमेजिंग या कैथेटर-आधारित तकनीकें शामिल हैं, उपलब्ध हैं। दोनों विकल्प फायदे और नुकसान के साथ हैं जिन्हें संबंधित वैज्ञानिक प्रश्न के लिए सावधानीपूर्वक विचार करने की आवश्यकता है। इमेजिंग दृष्टिकोण इकोकार्डियोग्राफी और चुंबकीय अनुलाता इमेजिंग (एमआरआई) शामिल हैं; दोनों सफलतापूर्वक चूहों में इस्तेमाल किया गया है। इकोकार्डियोग्राफिक माप में चूहों की उच्च हृदय गति के लिए आवश्यक उच्च गति जांच से उच्च प्रारंभिक लागत शामिल है; यह एक अपेक्षाकृत सरल गैर-आक्रामक दृष्टिकोण है, लेकिन यह ऑपरेटरों के बीच परिवर्तनीय है जिन्हें आदर्श रूप से हृदय संरचनाओं को पहचानने और कल्पना करने का अनुभव किया जाना चाहिए। इसके अलावा, कोई दबाव माप सीधे प्रदर्शन किया जा सकता है और गणना आकार परिमाण और प्रवाह माप के संयोजन से प्राप्त कर रहे हैं । दूसरी ओर, यह लाभ है कि एक ही जानवर पर कई माप किए जा सकते हैं और रोग प्रगति के दौरान उदाहरण के लिए हृदय कार्य की निगरानी की जा सकती है। वॉल्यूम मापन के बारे में, एमआरआई स्वर्ण मानक प्रक्रिया है, लेकिन इकोकार्डियोग्राफी के समान, कोई प्रत्यक्ष दबाव माप संभव नहीं है और केवल प्रीलोड निर्भर पैरामीटर8प्राप्त किए जा सकते हैं। सीमित कारक भी उपलब्धता, विश्लेषण प्रयास और परिचालन लागत हैं। यहां कैथेटर आधारित तरीकों हृदय समारोह को मापने के लिए एक अच्छा विकल्प है कि इसके अतिरिक्त इंट्राकार्डिएक दबाव की सीधी निगरानी और पूर्व लोड भर्ती स्ट्रोक काम (PRSW)9)की तरह लोड स्वतंत्र संकुचन मापदंडों के निर्धारण के लिए अनुमति देते हैं । हालांकि, एक दबाव-आचरण कैथेटर (चालकता निर्धारण के माध्यम से) द्वारा मापा गया वेंट्रिकुलर वॉल्यूम एमआरआई से उन लोगों की तुलना में छोटे होते हैं लेकिन समूह मतभेद एक ही सीमा10में बनाए रखे जाते हैं। विश्वसनीय मात्रा मूल्यों को निर्धारित करने के लिए संबंधित अंशांकन की आवश्यकता होती है, जो पीवीएल माप के दौरान एक महत्वपूर्ण कदम है। यह हाइपरटॉनिक नमकीन11,12के बोलस इंजेक्शन के दौरान मायोकार्डियम के समानांतर चालन के लिए वीवो विश्लेषण में मात्रा-अंशांकित क्यूवेट (आचरण को मात्रा में बदलने) में रक्त चालकता के पूर्व वीवो माप को जोड़ती है। इसके अलावा, वेंट्रिकल के अंदर कैथेटर की स्थिति और वेंट्रिकल की देशांतर धुरी के साथ इलेक्ट्रोड का सही अभिविन्यास उनके द्वारा उत्पादित आसपास के विद्युत क्षेत्र की पहचान क्षमता के लिए महत्वपूर्ण हैं। फिर भी माउस दिल के कम आकार के साथ कैथेटर के इंट्रावेंट्रिकुलर अभिविन्यास में परिवर्तन द्वारा उत्पादित कलाकृतियों से बचना संभव है, यहां तक कि फैली हुई वेंट्रिकल्स5,10में भी, लेकिन कलाकृतियों β-एड्रेनेरिक उत्तेजना6,13के तहत विकसित हो सकती है। आचरण विधियों के अतिरिक्त प्रवेश आधारित विधि का विकास अंशांकन चरणों से बचने के लिए दिखाई दिया, लेकिन यहां मात्रा मूल्यों को14,15से अधिक आंका गया है।

चूंकि माउस हृदय अनुसंधान और β में सबसे महत्वपूर्ण पूर्व-नैदानिक मॉडलों में से एक है-हृदय का एड्रेनेर्जिक रिजर्व कार्डियक फिजियोलॉजी और पैथोलॉजी में केंद्रीय रुचि का है, इसलिए हम यहां β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के दौरान पीवीएल माप द्वारा चूहों में वीवो कार्डियक फंक्शन में निर्धारित करने के लिए एक परिष्कृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

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Protocol

सभी पशु प्रयोगों को मंजूरी दे दी और कार्ल्सरुहे के क्षेत्रीय परिषद और हीडलबर्ग विश्वविद्यालय (AZ 35-9185.82/A-2/15, के नियमों के अनुसार प्रदर्शन किया गया AZ 35-9185.82/A-18/15, AZ 35-9185.81/G131/15, AZ 35-9185.81/G121/17) वैज्ञानिक प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जानवरों की सुरक्षा पर यूरोपीय संसद के निर्देश 2010/63/EU से दिशा निर्देशों के अनुरूप । इस प्रोटोकॉल में दिखाए गए डेटा जंगली प्रकार C57Bl6/N पुरुष चूहों (17 ± १.४ सप्ताह की आयु) से प्राप्त होते हैं । हीडलबर्ग मेडिकल फैकल्टी के पशु सुविधा (आईबीएफ) में चूहों को निर्दिष्ट रोगजनक मुक्त स्थितियों के तहत बनाए रखा गया था। चूहों को 12 घंटे के हल्के-अंधेरे चक्र में रखा गया था, जिसमें 56-60% के बीच सापेक्ष आर्द्रता, प्रति घंटे 15 गुना हवा में परिवर्तन और 22 डिग्री सेल्सियस के कमरे का तापमान +/-2 डिग्री सेल्सियस था । वे पारंपरिक पिंजरों प्रकार द्वितीय या प्रकार द्वितीय लंबे समय में रखा गया था संवर्धन के रूप में पशु बिस्तर और ऊतक कागजात के साथ प्रदान की । विज्ञापन लिबिटमका उपभोग करने के लिए मानक ऑटोक्लेवित भोजन और ऑटोक्लेवित पानी उपलब्ध थे।

1. उपकरणों और दवा समाधान की तैयारी

  1. केंद्रीय शिरीकार कैथेटर: माइक्रो ट्यूब (0.6 मिमी बाहरी व्यास) को ~ 20 सेमी लंबी कैथेटर ट्यूब में काटें। ट्यूब के एक छोर को 23 गेज कैनुला की नोक पर खींचने के लिए संदंश का उपयोग करें। एक तेज टिप बनाने के लिए ट्यूबिंग के दूसरे छोर को तिरछे काट लें जो फेमोरल नस को छेद सकता है।
  2. एंडोट्रेक्ल ट्यूब: एक इंस्टुबेशन ट्यूब के लिए सिरिंज अटैचमेंट को हटाने के लिए लंबाई में 20 गेज वेनिपुपंक्चर-कैनुला 3 सेमी काट दिया।
    1. यदि इंस्टुबेशन ट्यूब वेंटिलेटर कनेक्शन को पूरी तरह से फिट नहीं करता है, तो ट्यूब के अंत में पैराफिल्म लपेटें जहां वेंटिलेशन डिवाइस जुड़ा हुआ है। कनेक्शन स्थिर होना चाहिए और मोटा(चित्रा 1A)द्वारा सील किया जाना चाहिए। 20 गेज वेनिपुपंक्चर-कैनुला के मेटल गाइड पिन को 2.7 सेमी तक छोटा करें और इसे इंस्टीबेशन एड के तौर पर इस्तेमाल करें। श्वासनली के दृश्य को सुविधाजनक बनाने के लिए हल्के रेशों सहित इंडिकेबेशन के लिए परिष्कृत दृष्टिकोण भी अच्छी तरह से वर्णित हैं, उदाहरण के लिए दास और सहयोगियों द्वारा16।
  3. इंटुबेशन के लिए उपयोग किया जाने वाला एनेस्थेटिक मिश्रण: तेल-इन-वॉटर पायस आधारित उत्पाद से 50 माइक्रोन 0.9% एनएसीएल और 2 मिलीग्राम/मिलियन एटोमिडेट के 750 माइक्रोन के साथ हेपरिन (1000 आईयू/एमएल) के 200 माइक्रोन मिलाएं। प्रत्येक माउस (0.1 मिलीग्राम/किलो बीडब्ल्यू बुप्रेनोरफिन 10 मिलीग्राम/किलो बीडब्ल्यू बीडब्ल्यू एटोमिडेट) के लिए 7 माइक्रोन/जी बॉडी वेट (बीडब्ल्यू) का उपयोग करें।
  4. मांसपेशियों में आराम: 0.9% एनएसीएल के 100 मिलीग्राम पनक्यूरोनियम-ब्रोमाइड को 100 मिलीग्राम में भंग करें। प्रत्येक माउस के लिए 1.0 μL/g शरीर के वजन (1 मिलीग्राम/kg BW) का उपयोग करें।
  5. आइसोप्रोटेरेनॉल समाधान: 0.9% एनएसीएल (1 माइक्रोग्राम/माइक्रोल) के 100 मिलीग्राम आइसोप्रोटेरेनोल को 100 मिलीग्राम आइसोप्रोटेरेनॉल भंग करें। निम्नलिखित कमजोर पड़ने(तालिका 1)तैयार करें और प्रत्येक को 1 मिलील सिरिंज में स्थानांतरित करें।
    1. कमजोर पड़ने 1 प्राप्त करने के लिए, स्टॉक 1:1.8 को पतला करें। कमजोर पड़ने 2 प्राप्त करने के लिए, स्टॉक 1:6 को पतला करें। तनु 3 प्राप्त करने के लिए, 1:10 में कमजोर तनु 1। अंत में, कमजोर पड़ने के 1:10 कमजोर पड़ने से 4 को कमजोर पड़ने 2 प्राप्त करें।
  6. 15% हाइपरटॉनिक एनएसीएल (w/v): डबल डिस्टिल्ड एच2ओ के 10 एमएल में 1.5 ग्राम एनएसी 0.9% एनएसीएल को घोलें 0.45 माइक्रोन पोर सिरिंज फिल्टर के साथ समाधान को फ़िल्टर करें।
  7. 12.5% एल्बुमिन समाधान (w/v): 0.9% एनएसीएल के 10 एमएल में 1.25 ग्राम गोजातीय सीरम एल्बुमिन को भंग करें। 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर समाधान इनक्यूबेट करें। कमरे के तापमान को ठंडा करें और 0.45 माइक्रोन पोर सिरिंज फिल्टर के साथ समाधान को फ़िल्टर करें।
  8. सेटअप की तैयारी: सबसे पहले हीटिंग प्लेट पर स्विच करें और इसे 39-40 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें। हीटिंग पैड पर नमकीन से भरी सिरिंज रखें और प्रेशर-वॉल्यूम लूप (पीवीएल) कैथेटर को सिरिंज में ट्रांसफर करें। स्थिरीकरण के लिए उपयोग से पहले कम से कम 30 मिनट के लिए कैथेटर को पूर्व-इनक्यूबेट करें। हम जिस सेटअप का उपयोग करते हैं, उसमें 1.4-एफ दबाव-आचरण कैथेटर, एक नियंत्रण इकाई और संबंधित सॉफ्टवेयर शामिल हैं, और इसे ग्राफिक रूप से चित्रा 1B पर वर्णित किया गया है और प्रदाता संदर्भ सामग्री की तालिकामें सूचीबद्ध हैं।

2. एनेस्थीसिया

  1. इंटुबेशन से 30 मिनट पहले बुप्रेनोरफिन (0.1 मिलीग्राम/किलो बीडब्ल्यू इंट्रापेरिटोनली) इंजेक्ट करें।
  2. माउस को एक ऐक्रेलिक ग्लास-चैंबर में रखें, जो 2.5% आइसोफलून के साथ पूर्व-संतृप्त हो और कक्ष के आधार पर रखे हीटिंग पैड के साथ पूर्व-गर्म हो।
  3. जैसे ही माउस सोता है (पलटा की कमी), एनेस्थेटिक मिश्रण (7 एमएल/किलो बीडब्ल्यू) जिसमें 10 मिलीग्राम/किलो एटोमिडेट और हेपरिन (१,२०० आईयू/किलो बीडब्ल्यू) इंट्रापेरिटेली इंजेक्ट करें ।

3. वेंटिलेशन

  1. एनेस्थेटिक इंजेक्शन के 3-4 मिनट बाद जानवर को इंस्टुबेशन प्लेटफॉर्म(चित्रा 1C)3-4 मिनट में स्थानांतरित करें। माउस ऑपरेटर का सामना करना पड़ पृष्ठीय दृश्य के साथ दांतों से लटका हुआ है।
  2. धीरे-धीरे जीभ को संदंश से उठाएं। ग्लोटिस की पहचान करने के लिए, माउस के निचले जबड़े को दूसरे संदंश के साथ थोड़ा उठाएं।
  3. ध्यान से एंडोट्रेक्ल ट्यूब(चित्रा 1A)को श्वासनली में डालें और गाइड रॉड को हटा दें।
  4. हीटिंग प्लेट पर जानवर को स्थानांतरित करें, इसे पीठ पर रखें और इंडबेशन ट्यूब को छोटे जानवर श्वसन यंत्र से कनेक्ट करें।
  5. 11 ± 1सीएमएच2ओ के पीक प्रेरणादायक दबावों के लिए श्वसन दर को 53.5 x (ग्राम में शरीर का वजन)-0.26 [न्यूनतम-1],समायोजित करें।
  6. चिपकने वाली स्ट्रिप्स के साथ हीटिंग प्लेट पर माउस के चरम हिस्सों को ध्यान से ठीक करें और सूखापन को रोकने के लिए दोनों आंखों पर आंखों का मरहम लागू करें।
  7. एक गुदा तापमान जांच डालें और 0.2 डिग्री सेल्सियस पर 37 ± कोर शरीर के तापमान को बनाए रखें।
  8. एक 1-लीड ईसीजी स्थापित करें और संज्ञाहरण गहराई और स्थिरता के लिए एक संकेतक के रूप में ऑन-लाइन हृदय गति की निगरानी करें।
  9. इंटरडिजिटल सजगता की अनुपस्थिति पर, मांसपेशियों के 1 मिलीग्राम/किलो बीडब्ल्यू बीडब्ल्यू इंजेक्ट करें जो कि इंटेस पैनक्यूनियम-ब्रोमाइड इंट्रापेरिटोली में आराम करता है। यह पीवीएल माप के दौरान श्वसन कलाकृतियों को रोकता है।

4. सर्जरी

  1. सामान्य सिफारिशें
    1. सर्जरी के दौरान, ओ 2 के साथ वाष्पित ~ 1.5-2% आइसोफ्लुएन के साथ हवादार। आइसोफ्लुने एकाग्रता भी माउस तनाव, लिंग, आयु और जानवरों के वजन की तरह चर पर निर्भर कर सकते हैं, लेकिन यह व्यक्तिगत और प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित करने की जरूरत है और यहां मूल्यों C57BL6/N माउस तनाव के लिए संदर्भ हैं । महत्वपूर्ण बात यह है कि वेंटिलेटर एक निष्कर्षण प्रणाली से जुड़ा हुआ है ताकि ऑपरेटर को आइसोफलून को साँस लेने से रोका जा सके।
    2. सर्जिकल प्रक्रियाओं के लिए स्टीरियो माइक्रोस्कोप से 1.5-4x के बीच एक आवर्धन का उपयोग करें।
      नोट: गैर-जीवित सर्जरी के लिए जानवर की तैयारी पर संस्थागत/स्थानीय मार्गदर्शन का उल्लेख करें ।
  2. फीमोरल कैनुलेशन
    1. 70% इथेनॉल के साथ हिंडलिम्ब कुल्ला, बाएं इंगिनल क्षेत्र को चीरना और बाईं फीमेल नस का पर्दाफाश करें।
    2. एक कौटे के साथ एपिगैस्ट्रिक धमनी और नस विस्फोट।
    3. कैथेटर का उपयोग करने के लिए डिस्टल रखा एक सीवन के साथ नारी नस लिगेट।
    4. नारीनाशी के नीचे एक सीवन पास करें और पंचर साइट की एक गाँठ कपाल तैयार करें। 1 मिली सिरिंज से जुड़ी तैयार माइक्रो ट्यूब (चरण 1.1 देखें) के साथ फेमोरल नस को पंचर करें।
    5. बर्तन के अंदर ट्यूब को ठीक करने के लिए गाँठ को नीचे बांधें।
    6. 0.9% एनएसीएल के जलसेक द्वारा तरल पदार्थ हानि का प्रतिकार करें, जो स्वचालित सिरिंज पंप के साथ 15 माइक्रोल/न्यूनतम की जलसेक दर पर 12.5% एल्बुमिन के साथ पूरक है। इसके अतिरिक्त, पूर्व-गर्म 0.9% एनएसीएल का उपयोग करके उजागर ऊतक आर्द्र रखें।
  3. थोराकोटॉमी
    1. 70% इथेनॉल के साथ छाती कुल्ला।
    2. जाइफोड प्रक्रिया के ठीक नीचे त्वचा को झुकाएं और छाती की दीवार से छाती की मांसपेशियों को संदंश या कॉटरी के साथ स्पष्ट रूप से अलग करें।
    3. संदंश के साथ जाइफोइड प्रक्रिया को उठाएं, और फिर छाती की दीवार के माध्यम से काट दिया जाता है जो दोनों तरफ एक कौटे के साथ बाद में चलती है जब तक कि डायाफ्राम पूरी तरह से नीचे से दिखाई न दे।
    4. डायाफ्राम को नीचे से चीरा ना जाए और कार्डियक अपेक्स का पर्दाफाश करें। फिर सावधानी से संदंश के साथ पेरिकार्डियम को हटा दें।
    5. बाईं ओर सीमित कॉस्टोटॉमी करें जैसा कि पहले6वर्णित है ।
    6. बाद के चरणों के दौरान प्रीलोड कमी करने के लिए अवर कैवल नस के नीचे एक सीवन पास करें।
    7. धीरे-धीरे 25 गेज कैनुला (अधिकतम 4 मिमी) के साथ कार्डियक एपेक्स को पंचर करते हैं। कैनुला निकालें और पीवी कैथेटर डालें जब तक कि सभी इलेक्ट्रोड वेंट्रिकल के भीतर न हों।
    8. कोमल आंदोलनों द्वारा कैथेटर की स्थिति को समायोजित करें और आयताकार आकार के छोरों(चित्रा 2 ए)तक बदल जाता है।
    9. हमेशा सभी उजागर ऊतक आर्द्र पूर्व गरम 0.9% NaCl का उपयोग कर रखें।

5. माप

  1. सामान्य सिफारिशें
    1. माप के दौरान, ~ 1.5-2% आइसोफ्लुएन के साथ हवादार 100% O2 के साथ वाष्पित।
    2. खुराक प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के प्रत्येक चरण पर 2 बेसलाइन माप के साथ-साथ 2 वेना कावा ऑक्क्लुस करें।
      नोट: यह महत्वपूर्ण है कि पहली और दूसरी वेना कावा ऑक्सक्लसेशन के बाद, दबाव और मात्रा दोनों मूल्य पहले के रूप में स्थिर-राज्य मूल्यों पर लौटते हैं। इंट्रावेंट्रिकुलर वॉल्यूम में सीरियल में कटौती के कारण कैथेटर की स्थिति में बदलाव को पहचानने के लिए यह अवलोकन आवश्यक है। यदि कैथेटर स्थिति में बदलाव का मामला होगा, विशेष रूप से मात्रा मूल्यों को स्थानांतरित कर दिया जाएगा ।
  2. मापदंडों (हृदय गति, स्ट्रोक की मात्रा, डीपी/डीटीमैक्स)का ऑन-लाइन विश्लेषण करें और स्थिर-राज्य हृदय समारोह प्राप्त होने तक प्रतीक्षा करें। C57Bl6/N चूहों में यहां उपयोग की जाने वाली सेटिंग के साथ अपेक्षित पैरामीटर रेंज के लिए कृपया प्रकाशित परिणामों का उल्लेख करें6।
  3. श्वसन यंत्र को अंत-समाप्ति की स्थिति में रोकें और बेसलाइन मापदंडों को रिकॉर्ड करें। 3 से 5 सेकंड के बाद प्रीलोड स्वतंत्र मापदंडों(चित्रा 2B)प्राप्त करने के लिए संदंश के साथ अवर कैवल नस के नीचे सीवन उठाने के द्वारा हृदय प्रीलोड को कम करें। वेंटिलेटर चालू करें। जब तक हेमोडायनामिक पैरामीटर स्थिर न हो जाएं तब तक दूसरे ऑक्क्यूज़ेशन के लिए कम से कम 30 सेकंड तक प्रतीक्षा करें।
  4. बेसल स्थितियों के तहत माप प्राप्त करने के बाद तैयार सिरिंज पर स्विच करके आइसोप्रोटेरेनॉल की खुराक-प्रतिक्रिया के लिए आगे बढ़ें। यहां कार्डियक प्रीलोड के संशोधनों से बचने के लिए जलसेक दर अपरिवर्तित रहती है। सिरिंज बदलते समय हवा के बुलबुले को न डालने का ध्यान रखें।
    1. जब तक नए स्थिर-राज्य हृदय समारोह प्राप्त नहीं होता है तब तक कम से कम 2 मिनट प्रतीक्षा करें, फिर से श्वसन यंत्र को अंत-समाप्ति की स्थिति में रोकें और बेसलाइन मापदंडों को रिकॉर्ड करें। 3 से 5 सेकंड के बाद प्रीलोड स्वतंत्र मापदंडों को प्राप्त करने के लिए अवर कैवल नस के नीचे सीवन को उठाकर कार्डियक प्रीलोड को कम करें।
    2. दूसरे ऑक्क्यूशन के लिए कम से कम 30 सेकंड तक रुकें। बाद में अगले आइसोप्रोटेरेनॉल एकाग्रता के साथ तैयार सिरिंज पर स्विच करना और बेसलाइन और प्रीलोड स्वतंत्र मापदंडों की रिकॉर्डिंग दोहराएं।
      नोट: एंड-सिस्टोलिक प्रेशर-स्पाइक (ईएसपीएस, फिगर 2सी)जैसी कलाकृतियां आइसोप्रोटेरेनोल की खुराक में वृद्धि के दौरान हो सकती हैं, जो कैथेटर फंसाने से परिणाम देती हैं। बेसल मापदंडों की शुरुआत से पहले होने वाली कलाकृतियों को कैथेटर की फिर से स्थिति के माध्यम से आसानी से ठीक किया जा सकता है।

6. अंशांकन

नोट: अंशांकन प्रक्रियाएं पीवीएल प्रणाली के आधार पर भिन्न हो सकती हैं।

  1. समानांतर-संचालन अंशांकन
    1. आइसोप्रोटेरेनॉल खुराक-प्रतिक्रिया से अंतिम माप के बाद फेमोरल कैनुला के लिए 15% एनएसीएल समाधान युक्त सिरिंज को कनेक्ट करें। ध्यान से ट्यूब में शेष हाइपरटॉनिक समाधान के 5 माइक्रोन को संचार करें जब तक कि पीवीएल ऑन-लाइन विज़ुअलाइज़ेशन के दौरान दाईं ओर थोड़ा बदलाव न करे। फिर तब तक प्रतीक्षा करें जब तक छोरों स्थिर राज्य में वापस नहीं आ जाते।
    2. अंत-समाप्ति पर श्वसन यंत्र बंद करें और 2 से 3 सेकंड के भीतर 15% एनएसीएल के 10 माइक्रोन के एक बोलस इंजेक्ट करें। जांच करें कि पीवीएल काफी हद तक व्यापक है और ऑन-लाइन दृश्य के दौरान दाईं ओर स्थानांतरित कर दिया जाता है।
  2. कंडक्टेंस-टू-वॉल्यूम अंशांकन
    1. 5 मिनट रुको, कम नहीं, ताकि हाइपरटॉनिक नमकीन बोलस पूरी तरह से पतला हो जाए। बाद में कैथेटर को हटा दें और 1 मिलीलीटर सिरिंज और 21 गेज कैनुला का उपयोग करके धड़कने वाले दिल के बाएं वेंट्रिकल से कम से कम 600 माइक्रोन रक्त खींचें। इस समय बिंदु पर जानवर वेंटिलेशन और दिल को हटाने को रोककर, बड़े पैमाने पर रक्तस्राव द्वारा गहरे संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया के तहत इच्छामृत्यु है।
    2. रक्त को पूर्व-गर्म (37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में) अंशांकन क्यूवेट में ज्ञात मात्रा के सिलेंडरों के साथ स्थानांतरित करें। प्रत्येक सिलेंडर में पीवी कैथेटर को केंद्रीय रूप से रखें और चालन को रिकॉर्ड करें। प्रत्येक जानवर के लिए एक मानक वक्र की गणना करके, चालन इकाइयों को पूर्ण मात्रा मूल्यों में परिवर्तित किया जा सकता है।

7. विश्लेषण

  1. बेसल स्थितियों और आइसोप्रोटेरेनॉल उत्तेजना के तहत सफल पीवीएल माप के बाद, एक उपयुक्त पीवीएल विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके कार्डियक फ़ंक्शन (जैसे पीआरएसडब्ल्यू, डीपी/डीटी, एंड-डायस्टोलिक दबाव और मात्रा, अंत-सिस्टोलिक दबाव और मात्रा, विश्राम निरंतर ताऊ) की विशेषता वाले मापदंडों की कल्पना, डिजिटलीकरण, गणना और निकालें। इसके अलावा सांख्यिकीय विश्लेषण और चित्रमय अभ्यावेदन मानक विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ किया जा सकता है।
  2. प्रीलोड स्वतंत्र मापदंडों का विश्लेषण
    नोट: इस कदम के लिए प्रक्रिया को मानकीकृत करना महत्वपूर्ण है।
    1. प्रीलोड स्वतंत्र मापदंडों(चित्रा 2डी)के विश्लेषण के लिए सभी मापों में कम प्रीलोड दिखाते हुए पहले 5-6 पीवीएल का चयन करें। प्रीलोड कमी के दौरान विश्लेषण के लिए चयनित पीवीएल की एक निरंतर संख्या प्राप्त मापदंडों के माप के बीच परिवर्तनशीलता को कम करेगी।
    2. प्रोटोकॉल के प्रत्येक चरण पर दो मापों के औसत मूल्य की गणना करें।

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Representative Results

दबाव मात्रा-लूप (पीवीएल) माप दवाओं के कार्डियक फार्माकोडायनामिक्स का विश्लेषण करने और सामान्य और रोग स्थितियों के तहत आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस मॉडल के कार्डियक फेनोटाइप की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। प्रोटोकॉल वयस्क माउस मॉडल में कार्डियक β-एड्रेनेरिक रिजर्व के आकलन की अनुमति देता है। यहां हम बूप्रेनोरफिन (एनाल्जेसिक) और पैनक्यूरोनियम (मांसपेशियों में आराम) के साथ संयुक्त आइसोफ्लुन एनेस्थीसिया के तहत एक खुली छाती विधि का वर्णन करते हैं, जो एक फीमोरल नसों कैथेटर के माध्यम से आइसोप्रोटेरेनॉल सांद्रता को ग्लूसेक करके β-एड्रेनेर्जिक उत्तेजना के लिए हृदय प्रतिक्रिया पर केंद्रित है। इस प्रोटोकॉल में दिखाए गए कुछ प्रतिनिधि डेटा जंगली प्रकार C57Bl6/N वयस्क पुरुष चूहों(चित्रा 3 और तालिका 2)से प्राप्त होते हैं । हमारे पीवीएल विश्लेषण द्वारा मापा कुछ महत्वपूर्ण मापदंडों की परिवर्तनशीलता के संकेतक के रूप में हमने डब्ल्यूटी समूह और मुफ्त उपलब्ध जी * पावर सॉफ्टवेयर17के परिणामों का उपयोग करके एक शक्ति विश्लेषण (0.05 की α त्रुटि संभावना और 0.8 की शक्ति) का प्रदर्शन किया। तालिका 3 में गणना प्रभाव आकार और हृदय गति के लिए आवश्यक नमूना आकार, पीआरएसडब्ल्यू, स्ट्रोक की मात्रा, विश्राम निरंतर ताऊ, डीपी/डीटीमैक्स और डीपीटी/डीटीमिन के तहत प्रत्येक पैरामीटर के लिए 10% से 30% के बीच परिवर्तन मानते हुए 0, ०.८२५ और ८.२५ एनजी/मिन आइसोप्रोटेरेनॉल चित्रित किए गए हैं ।

दबाव-मात्रा संबंधों का चित्रमय विश्लेषण एक्स-एक्सिस पर वाई-एंड प्रेशर (एमएमएचजी) पर वॉल्यूम (μL) की साजिश रचने से किया जाता है। यदि कैथेटर को वेंट्रिकल के भीतर सही ढंग से रखा जाता है, तो एक पूर्ण हृदय चक्र का प्रतिनिधित्व आयताकार आकार के पीवीएल(चित्रा 2 ए और चित्रा 3 ए)द्वारा किया जाता है। शीघ्र ही, सिस्टोल आइसोवोलुमेट्रिक संकुचन (डीपी/डीटीमैक्सकी विशेषता) के चरण के साथ शुरू होता है, जिसके दौरान दोनों कार्डियक वाल्व बंद हो जाते हैं (सही ऊर्ध्वाधर किनारे)। जब वेंट्रिकुलर दबाव महाधमनी दबाव से अधिक हो जाता है, तो महाधमनी वाल्व खुलता है और रिजेक्शन चरण (ऊपरी क्षैतिज) के दौरान रक्त को महाधमनी में पंप किया जाता है। इसके बाद, जब महाधमनी दबाव वेंट्रिकुलर दबाव से अधिक हो जाता है, तो महाधमनी वाल्व बंद हो जाता है और डायस्टोल शुरू होता है। आइसोवोल्यूमेट्रिक विश्राम के दौरान (मापदंडों डीपी/डीटीमिन और ताऊ की विशेषता) वेंट्रिकुलर दबाव तब तक गिरता है जब तक कि एट्रियल दबाव वेंट्रिकुलर दबाव से अधिक न हो जाए और माइट्रल वाल्व खुलता है (बाएं ऊर्ध्वाधर किनारे)। अब निष्क्रिय डायस्टोलिक भरने, अंत डायस्टोलिक दबाव-मात्रा संबंध (EDPVR) की विशेषता है, अगले हृदय चक्र शुरू होने तक जगह लेता है (नीचे क्षैतिज)(चित्रा 2A-B)।

पीवीएल विश्लेषण हृदय कार्य में विस्तृत अंतर्दृष्टि प्रदान करता है क्योंकि यह कार्डियक प्रीलोड से स्वतंत्र हृदय कार्य निर्धारित करने में सक्षम है। इस प्रकार, इसे प्रायोगिक सेटअप5में हृदय कार्य निर्धारित करने के लिए स्वर्ण-मानक के रूप में वर्णित किया गया है। C57Bl6/N चूहों का उपयोग कर वर्णित प्रोटोकॉल में, हम इस तरह के हृदय समारोह के सामांय मापदंडों पर उत्पादित आइसोप्रोटेरेनॉल के जवाब का मूल्यांकन किया, जैसे हृदय गति, हृदय उत्पादन, स्ट्रोक की मात्रा और स्ट्रोक का काम करते हैं । प्रत्येक पैरामीटर पर आइसोप्रोटेरेनॉल का एक महत्वपूर्ण प्रभाव विभिन्न आइसोप्रोटेरेनॉल सांद्रता(चित्रा 3 B)के तहत खुराक प्रतिक्रिया में देखा जाता है। पीआरएसडब्ल्यू और डीपी/डीटीमैक्स जैसे कार्डियक संकुचन के मापदंडों ने आइसोप्रोटेरेनोल इन्फ्यूजन(चित्रा 3ए-बी)के तहत खुराक-प्रतिक्रिया में अपेक्षित वृद्धि दिखाई । दूसरी ओर, डायस्टोलिक मापदंडों में कमी (विश्राम ताऊ और डीपी/डीटीन्यूनतमकी निरंतर) बढ़ती आइसोप्रोटेरेनोल सांद्रता के साथ(चित्रा 3C)दर्ज की गई क्योंकि स्वस्थ हृदय में कैटेकोलैमिन द्वारा उत्पादित सकारात्मक ल्यूसिट्रोपिक प्रभाव से उम्मीद की जा रही थी। चित्रा 3 (यानी, अंत-सिस्टोलिक दबाव और मात्रा, अंत-डायस्टोलिक दबाव और मात्रा, अधिकतम दबाव, अन्य लोगों के बीच) में दिखाए गए लोगों से आगे के पैरामीटर पीवीएल विश्लेषण से भी प्राप्त किए जाते हैं और वैज्ञानिक प्रश्न, आनुवंशिक या रोग मॉडल और प्राप्त टिप्पणियों के आधार पर भी विश्लेषण किया जा सकता है। वृद्धिशील β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के दौरान प्रत्येक चरण पर पीवीएल में कार्डियक फ़ंक्शन के सबसे आम मापदंडों के लिए अतिरिक्त और विस्तृत मूल्य, जिसमें हाइपरटॉनिक खारा के साथ समानांतर-चालन के लिए अंशांकन का समय बिंदु शामिल है जो हृदय की मात्रा के मापदंडों को अत्यधिक प्रभावित करता है, लेकिन कार्डियक इनोट्रॉपी और विश्राम को भी पहले1,6बताया गया है।

Figure 1

चित्रा 1। संज्ञाहरण और दबाव-मात्रा लूप सेटअप। (क) माउस इंस्टुबेशन के लिए अनुकूलित 20 गेज वेनिपुपंक्चर-कैनुला । (ख) आरेख एनेस्थेटिक गैस की प्रवाह दिशा सहित उपयोग किए गए दबाव-मात्रा माप सेटअप के विभिन्न घटकों के संगठन और कनेक्शन को दिखाता है । (ग) इंडुबेशन प्लेटफॉर्म तेजी से और सुरक्षित इंडबेशन के लिए चूहों को लटकाने के लिए इस्तेमाल किया जाता था । फांसी धागे (ii) के अंत में दोनों पक्षों पर शिकंजा (i) माउस वजन के आधार पर खतरे को कसने के लिए शामिल किया गया है। तीर आइसोफ्लारेन एक्सपोजर के लिए कनेक्शन की संभावना को इंगित करता है। अस्थायी.: तापमान; ईसीजी: इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम; न्यूनतमएक्सप्रेस:न्यूनतम समाप्ति दबाव; MaxPexp:अधिकतम समाप्ति दबाव; पीवी: दबाव की मात्रा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2

चित्रा 2। प्रतिनिधि दबाव-मात्रा विश्लेषण। (क) अनुकरणीय दबाव-मात्रा रिकॉर्डिंग जहां बेसल मापन के दौरान विश्लेषण किए गए मापदंडों को दर्शाया जाता है और हृदय चक्र के दौरान मुख्य घटनाओं को दर्शाया जाता है । (ख) प्रीलोड-रिडक्शन के दौरान ईएसपीवीआर, ईडीपीवीआर और पीआरएसडब्ल्यू के पैरामीटर दर्शाए गए हैं। (ग) बेसल मापन (ऊपरी पैनल) के दौरान या आइसोप्रोटेरेनोल उत्तेजना के तहत ऑक्लंफ्यूजन पैंतरेबाज़ी (लोअर पैनल) के दौरान एंड-सिस्टोलिक प्रेशर-स्पाइक्स प्रस्तुत किए जाते हैं । एलवी: लेफ्ट वेंट्रिकुलर; डी पी/डीटीन्यूनतम:न्यूनतम डीपी/डीटी; डी पी/डीटीमैक्स:अधिकतम डीपी/डीटी; वीes:अंत सिस्टोलिक मात्रा; वीएड:एंड-डायस्टोलिक वॉल्यूम; ईएसपीवीआर: एंड-सिस्टोलिक प्रेशर-वॉल्यूम संबंध; PRSW: प्रीलोड भर्ती स्ट्रोक काम; EDPVR: अंत-डायस्टोलिक दबाव-मात्रा संबंध। चित्रा हमारे पिछले काम 20196के पूरक से अनुकूलित किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3

चित्रा 3। C57BL6/N चूहों में पीवीएल-माप का विश्लेषण। (क) C57BL6/N नियंत्रण चूहों से अवर घुड़सवार नस ऑक्सीक्यूशन के दौरान प्रतिनिधि पीवीएल और बढ़ती आइसोप्रोटेरेनोल सांद्रता के अधीन । (ख) बेसल स्थितियों के दौरान और आइसोप्रोटेरेनॉल के दौरान सामान्य हृदय कार्य हृदय गति, हृदय उत्पादन, स्ट्रोक की मात्रा और स्ट्रोक के काम के विश्लेषण से वर्णित है । (ग) पीआरएसडब्ल्यू, निरंतर विश्राम ताऊ (Weiss समीकरण18)और अधिकतम और न्यूनतम डीपी/डीटी जैसे कार्डियक संकुचन और डायस्टोलिक कार्य का आकलन करने के लिए अतिरिक्त मापदंडों का विश्लेषण किया गया । डेटा मानक विचलन के ± मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। बीपीएम: प्रति मिनट धड़कता है; PRSW: प्रीलोड भर्ती स्ट्रोक काम; द: चूहों की संख्या। * * पी < ०.०१: पी-बेसल हालत के खिलाफ जोड़ा छात्र टी परीक्षण से मूल्यों (isoproterenol = 0 एनजी/मिनट) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

आइसोप्रोटेरेनॉल एकाग्रता (pg/μL) जलसेक दर (μL/मिनट) खुराक (एनजी/न्यूनतम)
भंडार 1000
कमजोर पड़ने 1 550 15 8.25
कमजोर पड़ने 2 165 15 2.475
कमजोर पड़ने 3 55 15 0.825
कमजोर पड़ने 4 16.5 15 0.2475

तालिका 1. β-एड्रेनेर्जिक उत्तेजना बढ़ाने के लिए आइसोप्रोटेरेनॉल का कमजोर पड़ना।  कृपया इस टेबल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

आइसोप्रोटेरेनॉल (एनजी/मिन)
0 0.2475 0.825 2.475 8.25
वैश्विक पैरामीटर और वॉल्यूम
हृदय गति (बीपीएम) 470 ± 19.6 490 ± 19.3 542 ± 20.6 605 ± 20.5 638 ± 20.5
स्ट्रोक की मात्रा (μl) 16.2 ± 2.6 17.6 ± 2.1 20.3 ± 2.8 22.3 ± 2.2 23.9 ± 2.5
कार्डियक आउटपुट (μl/min) 7627 ± 1210 8609 ± 1097 11000 ± 1616 13502 ± 1494 15291 ± 1761
एंड सिस्टोलिक वॉल्यूम (माइक्रोन) 13 ± 3.1 10.5 ± 3.5 4.81 ± 2.3 1.94 ± 1.9 1.5 ± 1.7
एंड-डायस्टोलिक वॉल्यूम (माइक्रोन) 27.4 ± 3 26.6 ± 3.0 24.1 ± 3.1 23.8 ± 2.6 24.8 ± 2.7
मतलब दबाव (एमएमएचजी) 27.4 ± 2.2 28.6 ± 2.2 29.2 ± 1.9 29.7 ± 1.9 30.5 ± 1.9
धमनी इलास्टेंस (एमएमएचजी/माइक्रोन) 4.44 ± 0.6 4.18 ± 0.7 3.46 ± 0.5 2.78 ± 0.9 2.91 ± 1
सिस्टोलिक पैरामीटर
प्रीलोड भर्ती स्ट्रोक वर्क 67.8 ± 7.62 76.3 ± 9.85 96.1 ± 14.62 108 ± 14.56 113 ± 13.02
ईएसपीवीआर 4.96 ± 1.29 5.15 ± 1.16 7.2 ± 2.28 17.3 ± 42.04 40 ± 107.55
रिजेक्शन अंश (%) 52.59 ± 9.57 60.9 ± 9.94 80.23 ± 8.65 92.16 ± 7.2 94.18 ± 6.15
स्ट्रोक वर्क (एमएमएचजी एक्स माइक्रोन) 1007 ± 244.26 1153 ± 193 1399 ± 261 1582 ± 234 1720 ± 216
अधिकतम डीओपी/डीटी (एमएमएचजी/एस) 6128.7 ± 1398.39 7087 ± 1401 8982.4 ± 1481 11422 ± 1477 13256 ± 1165
न्यूनतम डीवी/डीटी (μl/s) - 523 ± 105.58 - 613 ± 102 - 835 ± 151 - 1103 ± 165 - 1273 ± 177
एंड सिस्टोलिक प्रेशर (एमएमएचजी) 70.8 ± 6.98 72.5 ± 7.42 69 ± 6.28 61.2 ± 17.36 68.2 ± 19.72
अधिकतम शक्ति (एमएमएचजी एक्स माइक्रोल/एस) 3009 ± 955.31 3541 ± 1188 4185 ± 1058 4272 ± 959 4918 ± 1418
डायस्टोलिक पैरामीटर
ईडीपीवीआर 1 ± 0.93 1.23 ± 0.88 1.5 ± 0.86 1.87 ± 0.92 1.96 ± 0.99
ताऊ (एमएस, Weiss'समीकरण) 6.14 ± 0.64 5.67 ± 0.44 4.92 ± 0.44 4.83 ± 0.55 4.96 ± 0.65
न्यूनतम डीओपी/डीटी (एमएमएचजी/एस) - 7272 ± 1403 - 8119 ± 1295 - 8998 ± 1240 - 8618 ± 1129 - 8648 ± 1468
एंड-डायस्टोलिक प्रेशर (एमएमएचजी) 5.29 ± 1.01 5.74 ± 1.07 5.6 ± 1.51 5.37 ± 1.13 5.76 ± 1.15
अधिकतम dV/dt (μl/s) 765 ± 174 817 ± 178 972 ± 156 1158 ± 163 1264 ± 153

तालिका 2. C57BL6/N चूहों में पीवीएल-माप का विश्लेषण। बेसल स्थितियों के दौरान और आइसोप्रोटेरेनॉल इनफ्यूजन के दौरान कार्डियक फंक्शन के पीवीएल पैरामीटर। डेटा 18 पुरुष वयस्क चूहों से मानक विचलन ± मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं । पीवी: दबाव की मात्रा; बीपीएम: प्रति मिनट धड़कता है; ईएसपीवीआर: एंड-सिस्टोलिक पीवी-रिलेशनशिप की ढलान, कम इंट्रा-वेंट्रिकुलर वॉल्यूम (2.475 और 8.25 एनजी/मिन आइसोप्रोटेरेनॉल) पर अपर्याप्त गणना; EDPVR: एंड-डायस्टोलिक पीवी-रिलेशनशिप, घातीय प्रतिगमन (अल्फा गुणांक)। कृपया इस टेबल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

डेल्टा (%) प्रभाव का आकार प्रति समूह नमूना आकार
आइसोप्रोटेरेनॉल एनजी/मिन आइसोप्रोटेरेनॉल एनजी/मिन
0 0.825 8.25 0 0.825 8.25
हृदय गति
10 2.4 2.6 3.1 4 4 3
15 3.6 3.9 4.6 3 3 3
20 4.8 5.3 6.2 3 3 3
25 6.0 6.6 7.8 3 3 3
30 7.2 7.9 9.3 3 3 3
स्ट्रोक की मात्रा
10 0.6 0.7 1.0 42 30 18
15 0.9 1.1 1.5 20 15 9
20 1.2 1.5 2.0 12 9 6
25 1.5 1.8 2.4 8 6 4
30 1.8 2.2 2.9 6 5 4
प्रीलोड भर्ती स्ट्रोक का काम
10 0.9 0.7 0.9 21 38 22
15 1.3 1.0 1.3 10 18 11
20 1.8 1.3 1.7 7 11 7
25 2.2 1.6 2.2 5 7 5
30 2.7 2.0 2.6 4 6 4
डीओपी/डीटीमैक्स
10 0.4 0.6 1.1 83 44 14
15 0.7 0.9 1.7 38 20 7
20 0.9 1.2 2.3 22 12 5
25 1.1 1.5 2.8 15 8 4
30 1.3 1.8 3.4 11 6 3
ताऊ
10 1.0 1.1 0.8 19 14 28
15 1.4 1.7 1.2 9 7 13
20 1.9 2.2 1.5 6 5 8
25 2.4 2.8 1.9 4 4 6
30 2.9 3.4 2.3 4 3 5
डीपी/डीटीमिन
10 0.5 0.7 0.6 60 31 47
15 0.8 1.1 0.9 27 15 22
20 1.0 1.4 1.2 16 9 13
25 1.3 1.8 1.5 11 6 9
30 1.6 2.2 1.8 8 5 7
अंत सिस्टोलिक दबाव-मात्रा संबंध
10 0.4 0.3 0.04 >100 >100 >100
15 0.6 0.5 0.06 48 73 >100
20 0.8 0.6 0.07 28 41 >100
25 1.0 0.8 0.09 19 27 >100
30 1.2 1.0 0.11 13 19 >100
एंड-डायस्टोलिक वॉल्यूम
10 0.9 0.8 0.9 20 27 20
15 1.4 1.2 1.4 10 13 10
20 1.8 1.6 1.8 6 8 6
25 2.3 2.0 2.3 5 6 5
30 2.8 2.4 2.8 4 5 4

तालिका 3. C57BL6/N पुरुष चूहों में देखे गए मूल्यों के आधार पर चयनित मापदंडों के लिए अनुमानित प्रभाव आकार और आवश्यक नमूना आकार। डेल्टा एक नियंत्रण (यानी, जंगली प्रकार) और एक उपचार समूह के बीच पैरामीटर में एक हाइपोथेटिक अंतर को दर्शाया गया है। प्रभाव आकार और प्रति समूह आवश्यक नमूना आकार नियंत्रण डेटा (मतलब और मानक विचलन), अल्फा त्रुटि (०.०५) और बिजली (०.८) जी * पावर 19के माध्यम से उपयोग की गणना की जाती है । बोल्ड मान (तालिका के ऑनलाइन संस्करण में हरी पृष्ठभूमि) आइसोप्रोटेरेनॉल की प्रत्येक खुराक पर प्रत्येक पैरामीटर के लिए एक सुझाए गए सीमा प्रभाव आकार (1≤) और नमूना आकार का संकेत देता है। डी पी/डीटीन्यूनतम:न्यूनतम डीपी/डीटी; डीओपी/डीटीमैक्स:अधिकतम डीपी/डीटी । कृपया इस टेबल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

यहां, हम बढ़ती β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के तहत चूहों में वीवो कार्डियक फंक्शन का विश्लेषण करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। प्रक्रिया का उपयोग आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों में या हस्तक्षेप पर कार्डियक फ़ंक्शन के आधारभूत मापदंडों और एड्रेनेरेर्गिक रिजर्व (जैसे, इनोट्रोपी और क्रोनोट्रोपी) दोनों को संबोधित करने के लिए किया जा सकता है। कार्डियक फंक्शन का निर्धारण करने के अन्य साधनों की तुलना में दबाव-मात्रा लूप (पीवीएल) माप का सबसे प्रमुख लाभ आंतरिक, लोड-स्वतंत्र हृदय समारोह का विश्लेषण है। अन्य सभी तरीकों (जैसे, एमआरआई और इकोकार्डियोग्राफी) केवल हृदय समारोह के लोड-निर्भर मापदंडों का आकलन कर सकते हैं और विशेष रूप से हृदय संकुचन मज़बूती से निर्धारित नहीं किया जा सकता है। यह पीवीएल को कार्डियक फ़ंक्शन5के गहराई से विश्लेषण के अंतिम बिंदु मापों के लिए सोने के मानक को मापता है। हालांकि, कार्डियक फ़ंक्शन के अनुक्रमिक विश्लेषण के लिए अनुमति देने से पहले नामित तरीके, उन्हें देशांतर टिप्पणियों (उदाहरण के लिए, रोग प्रगति के दौरान) के लिए सबसे आगे लाते हैं। इसके अलावा, इंट्रावेंट्रिकुलर वॉल्यूम, और बाद में स्ट्रोक की मात्रा और अन्य व्युत्पन्न मापदंडों को चूहों20में एमआरआई की तुलना में पीवीएल माप में कम करके आंका जा सकता है।

प्रोटोकॉल के दौरान चार महत्वपूर्ण कदम हैं जो वैध पीवीएल डेटा प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण हैं: 1) इंस्टुबेशन, 2) फेमोरल नस कैथेटर का प्लेसमेंट, 3) दबाव-आचरण कैथेटर का प्लेसमेंट और 4) पेरिप्रोसेडरल रेजिमेन। चूहों के गैर-आक्रामक इंटुबेशन के लिए कुछ अनुभव की आवश्यकता होती है और आइसोफ्लारेन का उपयोग करते समय जटिल होता है क्योंकि इंटुबेशन के लिए समय सीमा संकीर्ण है (20 - 40 एस)। इस प्रकार, इंस्टुबेशन के बाद वेंटिलेटर श्वसन दर में फेरबदल करते समय मुरीन छाती आंदोलनों की जांच करके सही ट्यूब प्लेसमेंट की सावधानीपूर्वक जांच की जानी चाहिए। इंडबेशन के लिए खिड़की को चौड़ा करने के लिए, हमने यहां शॉर्ट एक्टिंग कृत्रिम निद्रावस्था के etomidate के सहवर्ती उपयोग का वर्णन किया। इसके अलावा, ग्लॉटिस के दृश्य की सुविधा के लिए हल्के फाइबर16उपलब्ध हैं। बाद के चरणों के दौरान आइसोप्रोटेरेनोल के अनुप्रयोग के लिए फीमोरल नस कैथेटर का उचित स्थान आवश्यक है। इस चरण के दौरान, वायु एम्बोलिज्म फेफड़े के एम्बोलिज्म को उत्प्रेरण करने वाले जानवरों को गंभीर रूप से नुकसान पहुंचा सकता है। फेमोरल कैथेटर की सही नियुक्ति शुरू में शिरा रक्त की सावधानीपूर्वक आकांक्षा द्वारा जांच की जा सकती है। जब बाद के चरणों के दौरान उचित कैथेटर प्लेसमेंट अनिश्चित होता है, तो अंत-डायस्टोलिक मात्रा की जांच की जा सकती है, जो पीवीएल ऑन-लाइन की कल्पना करते समय थोड़ी सी बोली के जवाब में बढ़ना चाहिए। अधिकांश अन्य जांचकर्ताओं के विपरीत, हम यहां नारीनाद नस के कैनुलेशन का वर्णन करते हैं, जबकि अन्य अक्सर केंद्रीय शिराओं का उपयोग12, 21के लिए लक्ष्य पोत के रूप में जुगुलर नस का उपयोग करते थे। इस दृष्टिकोण को vagal तंत्रिका के करीब हेरफेर नहीं करने का लाभ है, के रूप में बंद छाती दृष्टिकोण में किया जाता है जब कैरोटिड तैयार किया जाता है, और इस प्रकार हम मानते है कि बस को छूने/ वेंट्रिकल के भीतर पीवी कैथेटर का उचित प्लेसमेंट विशेष रूप से वॉल्यूम मापदंडों से संबंधित सार्थक डेटा प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है। जब इलेक्ट्रोड पूरी तरह से वेंट्रिकल के अंदर नहीं होते हैं या कैथेटर को वेंट्रिकल की देशांतर धुरी के साथ ठीक से नहीं रखा जाता है, तो वॉल्यूम मापदंडों को अत्यधिक कम करके आंका जाता है। इसके अलावा, एंडोकार्डियम और प्रेशर ट्रांसड्यूसर के बीच संपर्क करने से एंड-सिस्टोलिक प्रेशर स्पाइक्स होते हैं जिन्हें बेसलाइन मापनके दौरानबर्दाश्त नहीं किया जाना चाहिए 6 . अंत में, संज्ञाहरण गहराई और तरल पदार्थ प्रबंधन सहित पेरिप्रोसेडरल आहार चूहों में पीवीएल डेटा की विश्वसनीयता पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है। एनेस्थेटिक अंडर-या ओवरडोसिंग दोनों हीमोडायनामिक मापदंडों को गंभीर रूप से प्रभावित कर सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप अक्सर हृदय कार्य कम हो जाता है। द्रव हानि, जो ज्यादातर रक्त हानि और वाष्पीकरण के कारण होती है, को उपयुक्त समाधानों के निरंतर अर्क के साथ प्रतिकार किया जाना चाहिए जैसे कि 0.9% एनएसीएल में भंग 12.5% एल्बुमिन, जिसकी हम सिफारिश करते हैं। होने के नाते कि दृष्टिकोण बहुत आक्रामक है, कोई कम महत्वपूर्ण नहीं है Buprenorphine की तरह एक शक्तिशाली एनाल्जेसिक के शामिल करने के लिए अपर्याप्त दर्द परिहार द्वारा पैदा हृदय कार्यों पर प्रभाव को कम करने के लिए है । हम इंस्टुबेशन से पहले एनाल्जेसिक दवा इंजेक्ट करते हैं। पूरी प्रक्रिया शुरू करने से पहले इंजेक्शन ~ 30 मिनट करना महत्वपूर्ण है, खासकर यदि ऑपरेटर अनुभव किया जाता है, और इस प्रकार तेजी से, जांच चरण के दौरान किसी भी दर्द से बचने के लिए उचित एनाल्जेसिक प्रभाव तक पहुंचने के लिए। इसके अतिरिक्त, जब मोटापे से ग्रस्त मॉडल के साथ काम कर शायद उच्च खुराक इस पदार्थ की उच्च लिपोफिलिसिटी के कारण विचार किया जाना चाहिए । अंत में, इस प्रोटोकॉल को अन्य कैटेकोलामिनेर्गिक उत्तेजनाओं जैसे डोबुटामाइन या एपिनेफ्रीन के जवाब का निर्धारण करने में भी संशोधित किया जा सकता है; उदाहरण के लिए कैलिगारिस और सहयोगियों द्वारा कियागया 22 जिन्होंने डोबुटामाइन उत्तेजना के दौरान इंट्रावेंट्रिकुलर दबाव में विश्लेषण का वर्णन किया।

पीवीएल मापन की रिकॉर्डिंग और विश्लेषण के बारे में कई कदम हैं जिन पर विचार करने की आवश्यकता है। सबसे पहले, एक प्रयोगात्मक डेटा सेट में पीवीएल रिकॉर्डिंग का लगातार विश्लेषण करना भारी महत्व का है। श्वसन कलाकृतियों जो बारी पल्मोनरी दबाव के कारण विकसित होती है जिसके परिणामस्वरूप यांत्रिक वेंटिलेशन के दौरान बारी-बारी से कार्डियक प्रीलोड को रिकॉर्डिंग के दौरान वेंटिलेटर बंद करके टाला जाना चाहिए। श्वसन कलाकृतियों को और खत्म करने के लिए, हम मांसपेशियों को आराम करने वाले पैनक्यूरोनियम का उपयोग करने की सलाह देते हैं ताकि आइसोफलुने एनेस्थीसिया के दौरान अक्सर देखे जाने वाले डायाफ्राम के संकुचन को रोका जा सके। इसके अलावा, यह अंत-समाप्ति पर वेंटिलेशन को रोकने और 8-10 छोरों का चयन करने की सिफारिश करने वाले अन्य प्रोटोकॉलों के विपरीत, सभी चयनित छोरों का विश्लेषण करना और फिर 5-6 अंत-समाप्ति वाले छोरों की पहचान करना संभव बनाता है जिनका बाद में23विश्लेषण किया जाता है। महत्वपूर्ण बात यह है कि हाइपोवेंटिलेशन से बचने के लिए एपनिया की अवधि कम रखी जानी चाहिए जिसके परिणामस्वरूप हाइपरकैप्निया और श्वसन एसिडोसिस होता है। ऑक्सीजन में सुधार और एटइलेक्टेसिस के गठन को रोकने के लिए, हमने पहले चूहों 6 में पीवीएल माप केदौरानझलक-वेंटिलेशन के उपयोग की जांच की। प्रीलोड स्वतंत्र डेटा के विश्लेषण के लिए छोरों का चयन करते समय, पहले 5-6 छोरों का चयन करें जो अंत-डायस्टोलिक मात्रा को कम करते हैं और लूप सहित से बचें जहां केवल दबाव घट रहा है, लेकिन मात्रा स्थिर है। इसके अलावा, अतिरिक्त धड़कन को विश्लेषण में शामिल नहीं किया जाना चाहिए, क्योंकि वे पीवीएल मापदंडों को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करते हैं। उल्लेखनीय है, अक्सर अतालता धड़कता है ऑक्सक्लूशन सीवन और मुरीन दिल के बीच संपर्क के कारण होते हैं। हाइपरटॉनिक खारा के अर्क के माध्यम से समानांतर आचरण के लिए अंशांकन हृदय समारोह के मापदंडों पर एक जबरदस्त प्रभाव पड़ता है और, हमारी समझ के लिए, एक प्रयोग6के अंत में किया जाना चाहिए । विशेष रूप से, हृदय कार्य पर इसके प्रभाव के कारण, प्रोटोकॉल के दौरान समानांतर आचरण के लिए अंशांकन केवल एक बार किया जाता है। हालांकि, एड्रेनेर्गिक उत्तेजना पर वेंट्रिकल आकार में परिवर्तन के कारण प्रोटोकॉल के दौरान समानांतर आचरण थोड़ा बदलता है। चूहों में पीवीएल आकलन के लिए प्रवेश प्रणाली उपलब्ध है कि खारा अंशांकन के लिए कोई ज़रूरत नहीं है और पीवीएल रिकॉर्डिंग भर में गतिशील रूप से समानांतर आचरण की गणना कर सकते हैं । हालांकि , इस विधि की सटीकता पर अभी भी बहस चल रही है5,8,24,25.

हमने अपनी टिप्पणियों से निर्धारित किया है कि वयस्क स्वस्थ जंगली प्रकार के पुरुष चूहों (यानी, C57Bl6/N) में इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते समय, सिस्टोलिक दबाव बेसलाइन पर 70 एमएमएचजी से 90 एमएमएचजी और β-एड्रेनोरेसेप्टर एगोनिस्ट आइसोप्रोटेनोल के साथ अधिकतम उत्तेजना के दौरान 80 और 100 एमएमएचजी के बीच है। इसी तरह, स्ट्रोक की मात्रा बेसलाइन पर 13 माइक्रोन से 20 माइक्रोन की सीमा में और अधिकतम उत्तेजना के दौरान 20 माइक्रोन और 35 माइक्रोन के बीच देखी गई। हृदय गति बेसलाइन पर प्रति मिनट 450 से 520 बीट्स के आसपास थी और अधिकतम उत्तेजना के दौरान प्रति मिनट 650 बीट से अधिक हो सकती है। प्रीलोड-इंडिपेंडेंट कार्डियक संकुचन के संबंध में, सबसे मजबूत पैरामीटर प्रीलोड रिक्रूटेबल स्ट्रोक वर्क (पीआरएसडब्ल्यू) को बेसलाइन पर 60 एमएमएचजी से 80 एमएमएचजी के बीच और अधिकतम उत्तेजना के दौरान 100 एमएमएचजी और 140 एमएमएचजी के बीच पर्याप्त माना गया था। यदि बेसलाइन पैरामीटर आमतौर पर प्राप्त लोगों से काफी हट जाते हैं, या जब हृदय कार्य अनुपयुक्त रूप से β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना, जटिलताओं (जैसे, अनोभकारी रक्त हानि, शरीर के तापमान में गिरावट/वृद्धि या खुराक के नीचे/

इसके अलावा, चूहों में पीवीएल माप के दौरान कुछ कलाकृतियां उत्पन्न हो सकती हैं। सबसे आम विरूपण साक्ष्य अंत सिस्टोलिक दबाव-स्पाइक (ईपीएस, चित्रा 2C)है, जो कैथेटर फंसाने से परिणाम देता है और यह 0 एनजी/मिन आइसोप्रोटेरेनॉल पर बेसल माप से पहले कैथेटर को फिर से स्थिति बनाकर आसानी से सुधारा जा सकता है । सार्थक डेटा प्राप्त करने के लिए ईएसपीएसएस को आधारभूत परिस्थितियों में खत्म करने से पहले माप शुरू नहीं करना चाहिए, क्योंकि ईएसपीएस कार्डियक फंक्शन6के कई मापदंडों को प्रभावित कर सकता है। हालांकि, जब एक ईएसपीएस बेसलाइन पर अप्रभावित मापों में परिवर्तित वेंट्रिकुलर आकृति विज्ञान के कारण आइसोप्रोटेरेनोल के साथ वृद्धिशील उत्तेजना के दौरान होता है, तो यह सुधार योग्य नहीं है, क्योंकि कैथेटर रिपोजिशनिंग खुराक प्रतिक्रिया प्रोटोकॉल के दौरान समानांतर आचरण को बदल देगा। किसी को इसकी बारीकी से जांच करनी होती है, क्योंकि इसी तरह बेसलाइन पर, इन ईएसपीएसएस को न केवल हृदय कार्य के मापदंडों को काफी हद तक बदलने के लिए दिखाया गया है, न केवल अधिकतम दबाव13,26के माध्यम से, बल्कि कम मात्रा का पता लगाने के माध्यम से भी6।

बेसलाइन स्थितियों के तहत पीवीएल मापों द्वारा प्राप्त हेमोडायनामिक मापदंडों के लिए प्रतिनिधि मूल्य और चूहों में आइसोप्रोटेरेनोल के साथ वृद्धिशील उत्तेजना के दौरान विभिन्न पद्धतिगत दृष्टिकोणों और विभिन्न माउस उपभेदों में व्यापक रूप से भिन्न होते हैं27,28. इसके अलावा, किसी को इस बात की जानकारी होनी चाहिए कि आनुवंशिक रूप से बदले हुए चूहों के फेनोटाइप भी अलग आनुवंशिक पृष्ठभूमि तक सीमित हो सकते हैं । पद्धति से, चूहों में दबाव-मात्रा विश्लेषण करने के दो सर्वोपरि दृष्टिकोण हैं। प्रत्येक विधि के अपने (dis) फायदे हैं और पसंद की विधि अक्सर प्रयोगशाला और उसके जांचकर्ताओं के अनुभवों पर निर्भर करती है। हम यहां खुली छाती प्रक्रिया पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जिसमें कैथेटर को शीर्ष पर पंचर के माध्यम से रखा जाता है। इस दृष्टिकोण दृष्टि के तहत कैथेटर प्लेसमेंट की उन्नति है जो सटीक कैथेटर स्थिति, चूहों में हृदय समारोह के सार्थक डेटा की रिकॉर्डिंग के लिए एक आवश्यक कारक के लिए अनुमति देता है । यह माइक्रोलीटर की सीमा में मात्रा मापदंडों की रिकॉर्डिंग के लिए विशेष रूप से सच है। इसके विपरीत, इस दृष्टिकोण का एक महत्वपूर्ण पहलू शारीरिक अंतर-वक्ष दबावों का नुकसान है, जिसके परिणामस्वरूप फेफड़े और एटइलेक्टेसिस गठन और शरीर के तरल पदार्थ का अधिक नुकसान होता है। हालांकि, सकारात्मक अंत-समाप्ति दबाव (PEEP) वेंटिलेशन का उपयोग करके, हम यहां एक रणनीति का वर्णन करते हैं जो चूहों 6 में खुली छाती पीवीएल केदौरानफेफड़े की क्षति का प्रतिकार करने के लिए साबित हुई है। दूसरा प्रयोगात्मक दृष्टिकोण कैरोटिड धमनी के माध्यम से कैथेटर डालने के लिए और फिर महाधमनी वाल्व के माध्यम से प्रतिगामी है । इस तकनीक का उपयोग करके, अंतर-वक्ष दबाव को सामान्य रूप से आयोजित किया जा सकता है, हालांकि यांत्रिक वेंटिलेशन की अभी भी आवश्यकता है, जो इस लाभ को कमजोर करता है। इसके अलावा, बंद छाती दृष्टिकोण सटीक कैथेटर स्थिति के लिए जांचकर्ताओं संभावनाओं को सीमित करता है । इसके अलावा, चूहों में उपयोग किए जाने वाले पीवी कैथेटर में 1 से 1.4 फ्रेंच (0.33 मिमी से 0.47 मिमी) तक व्यास होते हैं, जो बंद छाती के दृष्टिकोण का उपयोग करते समय मुरीन आउटफ्लो ट्रैक्ट की एक महत्वपूर्ण बाधा का तात्पर्य है, क्योंकि वयस्क चूहों के एोटास में आमतौर पर 0.8 मिमी से 1.2 मिमी29,30के बीच व्यास होते हैं। दिल की विफलता मॉडल में पीवीएल के उपयोग के संबंध में, खुले सीने का दृष्टिकोण ट्रांसवर्स महाधमनी संकीर्तन मॉडल के लिए विशेष महत्व रखता है, जहां संकीर्तन इनोमिनेट धमनी और बाएं कैरोटिड धमनी के बीच स्थित है। यहां कैथेटर कैरोटिड धमनी के माध्यम से नहीं रखा जा सकता है। दूसरी ओर, बंद छाती दृष्टिकोण फैला हुआ वेंट्रिकल्स के मुरीन मॉडल की जांच कर रहे शोधकर्ताओं के लिए रुचि का है, जैसे मायोकार्डियल इंफार्क्शन के शामिल होने के बाद, जहां शीर्ष का पंचर संभव नहीं है।

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Disclosures

हितों के टकराव की घोषणा नहीं करनी होगी ।

Acknowledgments

हम विशेषज्ञ तकनीकी सहायता के लिए हीडलबर्ग विश्वविद्यालय से मैनुएला रिट्जल, हंस-पीटर जेनशेमर, क्रिस्टीन रिक्टर और इंटरफाकुलटेर बायोमेडिजिनिचे फोर्स्चुंगइनरिच (आईबीएफ) की टीम के आभारी हैं।

इस काम को डीएचएचके (जर्मन सेंटर फॉर कार्डियोवैस्कुलर रिसर्च), बीएमबीएफ (जर्मन शिक्षा और अनुसंधान मंत्रालय), एक बाडेन-वुर्टेमबर्ग फेडरल स्टेट इनोवेशन शौकीन्स और ड्यूश फॉर्चुंग्सगेमेन्चेफ्ट (डीएफजी, जर्मन रिसर्च फाउंडेशन) प्रोजेक्ट-आईडी 239283807- टीआरआर 152, 2289 के लिए और सहयोगी अनुसंधान केंद्र (एसएफबी) 1118 द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.4F SPR-839 catheter Millar Instruments, USA 840-8111
1 ml syringes Beckton Dickinson, USA REF303172
Bio Amplifier ADInstruments, USA FE231
Bridge-Amplifier ADInstruments, USA FE221
Bovine Serum Albumin Roth, Germany 8076.2
Buprenorphine hydrochloride Bayer, Germany 4007221026402
Calibration cuvette Millar, USA 910-1049
Differential pressure transducer MPX Hugo Sachs Elektronik- Harvard Apparatus, Germany Type 39912
Dumont Forceps #5/45 Fine Science tools Inc. 11251-35
Dumont Forceps #7B Fine Science tools Inc. 11270-20
Graefe Forceps Fine Science tools Inc. 11051-10
GraphPad Prism GraphPad Software Ver. 8.3.0
EcoLab-PE-Micotube Smiths, USA 004/310/168-1
Etomidate Lipuro Braun, Germany 2064006
Excel Microsoft
Heparin Ratiopharm, Germany R26881
Hot plate and control unit Labotec, Germany Hot Plate 062
Isofluran Baxter, Germany HDG9623
Isofluran Vaporizer Abbot Vapor 19.3
Isoprenalinhydrochloride Sigma-Aldrich, USA I5627
Fine Bore Polythene tubing 0.61 mm OD, 0.28 mm ID Smiths Medical International Ltd, UK Ref. 800/100/100
MiniVent ventilator for mice Hugo Sachs Elektronik- Harvard Apparatus, Germany Type 845
MPVS Ultra PVL System Millar Instruments, USA
NaCl AppliChem, Germany A3597
NaCl 0.9% isotonic Braun, Germany 2350748
Pancuronium-bromide Sigma-Aldrich, USA BCBQ8230V
Perfusor 11 Plus Harvard Apparatus Nr. 70-2209
Powerlab 4/35 control unit ADInstruments, USA PL3504
Rechargeable cautery-Set Faromed, Germany 09-605
Scissors Fine Science tools Inc. 140094-11
Software LabChart 7 Pro ADInstruments, USA LabChart 7.3 Pro
Standard mouse food LASvendi GmbH, Germany Rod18
Stereo microscope Zeiss, Germany Stemi 508
Surgical suture 8/0 Suprama, Germany Ch.B.03120X
Venipuncture-cannula Venflon Pro Safty 20-gauge Beckton Dickinson, USA 393224
Vessel Cannulation Forceps Fine Science tools Inc. 00574-11
Water bath Thermo Fisher Scientific, USA
Syringe filter (Filtropur S 0.45) Sarstedt, Germany Ref. 83.1826

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References

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चिकित्सा अंक 171 β-एड्रेनेर्जिक उत्तेजना आइसोप्रोटेरेनोल कार्डियक फ़ंक्शन प्रेशर-वॉल्यूम लूप दिल माउस वीवो में खुली छाती
दबाव-वॉल्यूम लूप विश्लेषण द्वारा निर्धारित β-एड्रेनेर्गिक उत्तेजना के लिए कार्डियक रिस्पांस
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Medert, R., Bacmeister, L., Segin, S., Freichel, M., Camacho Londoño, J. E. Cardiac Response to β-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis. J. Vis. Exp. (171), e62057, doi:10.3791/62057 (2021).

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