Summary
Denne artikel beskriver metoder til at inducere og evaluere levodopa-induceret dyskinesier i en rottemodel af Parkinsons sygdom. Protokollen tilbyder detaljerede oplysninger om intensiteten og hyppigheden af en række dyskinetiske adfærd, både dystoniske og hyperkinetiske, hvilket giver et pålideligt værktøj til at teste behandlinger rettet mod dette uopfyldte medicinske behov.
Abstract
Levodopa (L-DOPA) forbliver den guldstandardbehandling, der anvendes til behandling af Parkinsons sygdom (PD) motoriske symptomer. Imidlertid udvikler uønskede ufrivillige bevægelser kendt som L-DOPA-inducerede dyskinesier (HED'er) ved langvarig brug af denne dopaminforløber. Det anslås, at forekomsten af LADEN eskalerer til ca. 90% af individerne med PD inden for 10-15 års behandling. At forstå mekanismerne i denne sygdom og udvikle både nye og effektive antidyskinesibehandlinger kræver konsekvent og nøjagtig modellering til præklinisk test af terapeutiske interventioner. En detaljeret metode til pålidelig induktion og omfattende klassificering af HED'er efter 6-OHDA-induceret nigral læsion i en rottemodel af PD præsenteres her. Pålidelig LID-vurdering hos rotter giver et kraftfuldt værktøj, der let kan bruges på tværs af laboratorier til at teste nye terapier med fokus på at reducere eller eliminere denne fælles behandlingsinducerede byrde for personer med PD.
Introduction
Selvom det har været mere end 50 år siden levodopa (L-DOPA) først blev introduceret som en behandling for personer med PD 1,2, er det bemærkelsesværdigt nok stadig den mest effektive behandling for parkinsoniske motoriske symptomer. De kliniske motoriske symptomer forbundet med PD stammer fra tabet af dopamin (DA) neuroner i substantia nigra (SN) pars compacta, hvilket resulterer i det dramatiske fald i tilgængelig dopamin i striatum. L-DOPA genopretter effektivt striatale DA-niveauer, hvilket resulterer i motorisk fordel tidligt i sygdommen 3,4. Uhensigtsmæssigt, med langvarig behandling, vil de fleste personer med PD udvikle L-DOPA induceret dyskinesier (LID), herunder chorea, dystoni og athetose, som ofte påvirker aktiviteterne i dagligdagen betydeligt 5,6,7.
Mens der findes flere adfærdsmodeller af LID hos gnavere, har forskelle i modellering og adfærdsmæssig vurdering af HED'er sat spørgsmålstegn ved reproducerbarheden af resultater mellem laboratorier samt pålideligheden af disse eksperimentelle værktøjer til præklinisk PD-forskning. Udviklet i samarbejde med en klinisk bevægelsesforstyrrelsesspecialist8 er den nuværende protokol en ligetil metode til LID-induktion og -klassificering og er velegnet til brug i en rottemodel af PD ved hjælp af 6-hydroxydopamin (6-OHDA)-induceret ensidig nigral læsion 9,10. LID-bedømmelsesskalaen, der er angivet her, inkluderer scoring for både intensiteten og hyppigheden af dyskinetisk adfærd i forskellige individuelle kropsdele. Relevante oplysninger om workflowoptimering af forsøg og passende pleje og håndtering af parkinsoniske og dyskinetiske dyr gives også.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De dyr, der præsenteres her, blev vedligeholdt og håndteret i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer. Alle dyreforsøg blev godkendt af Michigan State University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) i overensstemmelse med føderale og statslige regler.
1. Lægemiddelfri bekræftelse af 6-OHDA læsionsstatus
- Postural Hale hænge test 11,12,13
BEMÆRK: Vurder læsionsstatus mindst 1 uge efter 6-OHDA læsionsinduktion (se 9,10,35 for detaljer om læsion) hos forsøgspersoner (f.eks. Mand eller kvinde, voksne Sprague Dawley eller Fisher 344 rotter).- Suspender rotten ca. 6 cm over buret, fast ved bunden af halen, i ~ 5 s.
- Optag retningen af kropsforvrængning som + for et vellykket læsioneret dyr, der vrider kontralateralt til den læsionerede side og - i mangel af vridning eller vridning i begge retninger.
- BEMÆRK: Disse tests er valgfrie, men anbefales. Se 14,15,16,17 for yderligere lægemiddelfrie testmuligheder/variationer.
- Trinjustering af træktest (tilpasset fra16)
BEMÆRK: Vurder læsionsstatus mindst 1 uge efter ensidig 6-OHDA læsionsinduktion hos forsøgspersoner (f.eks. Mand eller kvinde, voksne Sprague Dawley eller Fisher 344 rotter).- Hold rotten ved bunden af halen, og løft bagfødderne fra overfladen med ~ 6 cm; træk baglæns hen over en flad, glat, men ikke glat overflade, ~75 cm, over 5-10 s.
- Observer og registrer antallet af tappe-/trinjusteringsbevægelser for hver forpote over tre gentagne tests.
- Scor emnet som + for vellykket ensidig læsion, når 0-2 forpotehaner observeres kontralateralt til den læsionerede side sammen med hurtig tapping (~ 10 vandhaner) fra forpoten ipsilateral til den læsionerede side (f.eks. Dyr, der ensidigt læsioneres på venstre side, viser tapping underskud (0-2 tryk) med den kontralaterale højre forpote).
- Omvendt skal du score moderat til hurtig tapping (5-10 tryk) fra begge forpoter som - for at indikere ufuldstændig eller ukendt læsionsstatus.
BEMÆRK: Et ængsteligt dyr kan vise hurtig tapping / trinjustering, selvom det lykkes at læsionere. Hvis der er mistanke om dette, skal du placere rotten tilbage i deres hjemmebur og teste ≥30 minutter senere.
2. Fremstilling af reagenser og forsyninger
- Bestemmelse af L-3,4-dihydroxyphenylalaninmethylesterhydrochlorid (levodopa eller L-DOPA) og benserazidhydrochlorid, en perifer decarboxylasehæmmer (se tabel over materialer) dosis, klassificeringsfrekvens og eksperimentel tidslinje, der er passende for undersøgelsesspørgsmålet 12,18,19,20 (figur 1).
BEMÆRK: Undersøgelsesspørgsmål kan stilles for at søge et vilkårligt antal spørgsmål, der spænder fra at spørge, om en bestemt terapi kan reducere eksisterende LID eller forhindre induktion af LID. De kan også undersøge, om terapeutisk effekt er afhængig af dosis af levodopa, eller om LID-ekspression og/eller terapeutisk effekt varierer afhængigt af forsøgspersonens køn, art og alder.
Figur 1: Eksempel på behandlingstidslinje. Eksempel på L-DOPA dosiseskaleringstidslinje på 12 uger i total længde, med 8 ugers L-DOPA-injektioner, der begynder 3 uger efter 6-OHDA-læsion og 4 uger efter eksperimentel behandling. I dette eksempel injiceres L-DOPA subkutant 5x om ugen (mandag-fredag) på omtrent samme tidspunkt hver dag i 2 uger ved hver foreskrevet L-DOPA-dosis (3, 6, 9 og 12 mg/kg). Adfærdsmæssige LID-vurderinger finder sted på dag 1, 6 og 10 af hvert L-DOPA-doseringsniveau. Klik her for at se en større version af denne figur.
- Der vejes rotter ugentligt for at beregne den relevante lægemiddelmængde baseret på de igangværende vægtændringer i løbet af undersøgelsen.
BEMÆRK: På grund af øget aktivitet hos LID+ rotter er der potentiale for vægttab med langvarige L-DOPA behandlinger. Hvis vægttab opstår, skal du give rotter ernæringsmæssigt komplette, meget velsmagende godbidder (se materialetabel) efter L-DOPA-injektioner. - Beregn den mængde L-DOPA og benserazid, der kræves for hver ugentlig koncentration, afvejning af lyofiliserede alikvoter for hver injektionsdag og opbevaring i kombination i 1-2 uger ved -20 °C i gule hætteglas af glas indtil behandlingsdagen.
BEMÆRK: Måldosis er 12 mg/kg eller 12 mg L-DOPA/1000 g legemsvægt. Eksempler på beregninger til bestemmelse af den mængde L-DOPA og saltvand, der er nødvendig for hver ugedag ved anvendelse af 12 mg L-DOPA/kg legemsvægt ved et injektionsvolumen på 1 cc/kg rottevægt, er angivet i supplerende fil 1.
3. Værelse og bur oprettet
- På den første dag af L-DOPA behandling 3-4 uger efter 6-OHDA læsion kirurgi, overføre rotter til enkelthus, herunder IACUC-godkendt berigelse.
- Oprethold i enkeltboliger gennem hele undersøgelsen for at undgå peer-interferens med adfærdsmæssige vurderinger.
- På LID-klassificeringsdage skal du placere hjemmeburene på en ståltrådsholder, drejet i en ca. 45 ° vinkel for optimal visning af rotten (figur 2A). Vend identifikationsmærkerne (figur 2B) opad, og fjern vandflasker, madstativer og alle former for berigelse i buret (figur 2C) for at undgå interferens med adfærdsmæssige vurderinger.
Figur 2: Eksempel på buret, der er oprettet til LID-klassificering af store rotteforsøg. (A) Der kan opstilles flere bure til LID-klassificering ved hjælp af store metalstativer, der giver mulighed for optimal visning af hvert dyr. Bure skal spredes fra hinanden i en 45 ° vinkel med ID-kort vendt opad (B), mad, vandflasker, redematerialer og anden berigelse fjernet for at begrænse rottens visuelle uklarhed og distraktioner til rotten, mens man undersøger dyskinetisk adfærd (C). Metalstativerne skal være et par meter væk fra enhver væg for at give rateren mulighed for at undersøge rotten foran eller bag på buret efter behov. Det er vigtigt at mærke berigelsesapparater (f.eks. C-røde rottehuse) med individuelle dyre-id'er for at erstatte dem i det samme bur, hvorfra de kom. Dette er især vigtigt, når man bruger dyr af forskellige køn for ikke at øge stress for forsøgspersonerne. Klik her for at se en større version af denne figur.
4. Levodopa injektioner og dyskinesi rating
- Subkutane injektioner af L-DOPA 21,22
- Umiddelbart før den daglige injektion af L-DOPA tilsættes den passende mængde sterilt saltvand til den forvejede lyofiliserede L-DOPA- og benserazidblanding i ravhætteglasset og rystes godt i 10 s (trin 2.3).
BEMÆRK: Målinjektionsvolumen er 1 ml/1000 g kropsvægt (med 12 mg L-DOPA pr. ml). Volumenet af det sterile saltvand afhænger af antallet af dyr pr. Undersøgelse. - Fyld de enkelte sprøjter (f.eks. 1,0 eller 0,5 ml med 26 G nål) med det krævede volumen for hvert dyr (1 ml/kg rottevægt) og mærk hver sprøjte med individuel dyreidentifikation.
BEMÆRK: Opbevar de fyldte sprøjter beskyttet mod lys i sterile poser indtil injektionstidspunktet. L-DOPA oxiderer hurtigt i nærvær af ilt og lys i et vandigt miljø 23,24,25,26. - Bring det første bur til injektionsbænken.
- Fjern rotten fra buret og læg den på injektionsoverfladen.
- Hold forsigtigt hovedet og skuldrene mod overfladen, hvor rotten hviler med håndfladen på den ikke-dominerende hånd.
- Skræb forsigtigt huden på ryggen over skulderscapulae med tommelfingeren og pegefingeren på den ikke-dominerende hånd, injicer L-DOPA-volumen med den dominerende hånd i det subkutane rum mellem / under fingrene, og hold nålen så parallel med kroppen som muligt for at undgå intramuskulær injektion.
BEMÆRK: Rotterne bliver ikke anæstesi før injektion. - Bortskaf hver brugt individuel sprøjte i en skarp beholder.
- Udskift rotten i dens individuelle bur, og tilføj ernæringsmæssigt komplette godbidder undtagen på LID-vurderingsdage for at undgå interferens med adfærdsmæssige vurderinger, indtil efter at klassificeringerne er afsluttet.
- Indstil timeren i 1-2 min afhængigt af den ønskede bedømmelsestid og antallet af rotter i undersøgelsen på ratingdage. Hent det næste bur og injicer den næste rotte, når timeren angiver.
- Gentag dette, sprøjt en rotte hvert 1-2 minut, indtil alle rotterne er injiceret.
- Umiddelbart før den daglige injektion af L-DOPA tilsættes den passende mængde sterilt saltvand til den forvejede lyofiliserede L-DOPA- og benserazidblanding i ravhætteglasset og rystes godt i 10 s (trin 2.3).
- Levodopa-induceret dyskinesi rating efter injektion
- Bedøm intensiteten (tabel 1) og frekvensen (tabel 2) af dystoniske og hyperkinetiske dyskinesibevægelser på det ønskede antal tidspunkter, som skal omfatte den indledende begyndelse af LID-adfærd, topadfærd og nedgangsfasen (se Supplerende fil 2 for et eksempel på LID-klassificeringslogark).
- For mandlige og kvindelige voksne Sprague Dawley eller Fisher 344 rotter og en prøvestørrelse på N = 40 rotter begynder dyskinesi ratings 20 minutter efter den første L-DOPA injektion og derefter med 50 minutters intervaller indtil 220 eller 270 min efter injektion, afhængigt af hvornår LID adfærd er ophørt i 90% -100% af rotterne.
- Hvis du bruger 1 minuts klassificeringsintervaller, skal du indstille en timer i 1 min. Bedøm den første rotte i et minut. Gå til den næste rotte og bedøm den i 1 min. Fortsæt gennem alle rotterne, bedømmelse i 1 minuts intervaller.
- Hav en timer placeret synligt ved siden af buret, så LID-adfærdsintensiteten (tabel 1) kan observeres, mens du estimerer hyppigheden af en given adfærd (tabel 2) i løbet af ratingperioden.
- Når bedømmelserne for første gang er afsluttet, skal du starte igen med den første rotte på det næste tidspunkt (f.eks. 70 min efter injektionen) og fortsætte med det ønskede interval (f.eks. hvert 50. minut), indtil alle tidspunkter er afsluttet.
BEMÆRK: På grund af overlapningen mellem L-DOPA-injektions- og LID-klassificeringsopgaver er der brug for to personer på ratingdagene, en til injektion og en til adfærdsmæssige vurderinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
HED'er hos parkinsoniske rotter kan manifestere sig som en række unormale ufrivillige bevægelser (AIM'er), herunder dystonisk, hyperkinetisk og stereotyp adfærd. LID-klassificeringskriterier for sådan adfærd præsenteres her for at inkludere både intensitet (tabel 1) og frekvens (tabel 2). Dette giver en samlet LID-sværhedsgradsscore for hver rotte, der afspejler både kvaliteten (intensiteten) og mængden af den tid, der bruges på at engagere sig (frekvens) i disse adfærd på hvert vurderingstidspunkt. Den endelige LID-sværhedsgradsscore beregnes ved at gange intensitetsscoren med frekvensscoren for hver adfærdskomponent. Scoringskriterier for individuelle attributter for LID-adfærd angives her som skriftlige beskrivelser (tabel 1-2), og eksempler vises som stillbilleder med detaljerede rapporter (figur 3) og som videoer (animerede videoer 1-4). Yderligere beskrivende oplysninger om individuelle bevægelser og scoring findes i figurlegenderne.
En omfattende vurdering af virkningen af enhver behandling på forbedring af LID-adfærd over tid kan observeres ved hjælp af en L-DOPA dosiseskaleringsmetode, 12 uger i total længde, med 8 ugers L-DOPA-injektioner efter 6-OHDA-læsion (figur 1). I dette scenario gives L-DOPA 5x om ugen (mandag-fredag) i 2 uger ved hver ordineret L-DOPA-dosis. Adfærdsmæssige vurderinger, der finder sted på dag 1, 6 og 10 i hver L-DOPA-dosis, giver en robust tilgang til vurdering af behandlingseffektivitet (figur 1). Forskere kan dog opleve, at ændrede tidslinjer og doseringsordninger bedre besvarer deres eksperimentelle spørgsmål. Dosis af L-DOPA og benserazid, den perifere decarboxylasehæmmer, kan variere afhængigt af investigators erfaring med doser og/eller de hypoteser, der skal testes. Det bemærkes, at de mest almindelige doser af benserazid er mellem 10-15 mg / kg, hvilket understøttes af rapporten fra Tayarani-Binazir et al. (2012) 20 , der viser, at optimale adfærdsmæssige virkninger af L-DOPA findes med 10 mg / kg benserazid uden yderligere fordel ved 15 mg / kg.
Der er flere måder at præsentere og analysere LID-data på, når det skal afgøres, om en given behandling har en meningsfuld indvirkning på at forbedre denne afvigende adfærd. Figur 4A giver et eksempel på data præsenteret som PEAK DOSE LID over hele den eksperimentelle tidslinje. Peak dose LID kan defineres som det tidspunkt, hvor gruppens gennemsnitlige LID-score er størst. Alternativt kan man rapportere 'absolut peak', som er den maksimale peak LID-score for et dyr, uanset hvornår det sker i løbet af en ratingperiode. Derudover kan LID-ratingdata undersøges over hvert dagligt ratingtidsforløb og præsenteres enten som eksperimentelle gruppedata og/eller plotes for at vise det enkelte LID-sværhedsgrad på hvert tidspunkt (figur 4B)19. Denne sidstnævnte tilgang gør det muligt at vurdere, om nogle behandlinger kan reducere f.eks. den samlede tid, et emne viser LID, men ikke nødvendigvis påvirke sværhedsgraden af spidsdosis. Endelig kan man kvantificere den samlede LID-sværhedsgrad over hele ratingsessionen. For et givet emne summeres LID-sværhedsgradsscoren for hvert tidspunkt for at producere en samlet score for den pågældende bedømmelsesperiode. Denne fremgangsmåde efterligner arealet under kurveestimaterne, som også kan beregnes.
Det er vigtigt at forstå, at LID/AIMs scoringsdata, der er oprettet ved hjælp af ratingskalaer til tildeling af værdier til dyskinesiens sværhedsgrad og/eller varighed (tabel 1 og 2), er ordinære data. De mest hensigtsmæssige statistiske test er således ikke-parametriske. Mens der ikke er nogen direkte ækvivalent ikke-parametrisk test til tovejsanalyse af varians, kan LID-data analyseres med ikke-parametriske alternativer til envejs ANOVA. Specifikt bruges Kruskal-Wallis-testen til sammenligninger mellem emner af to eller flere uafhængige grupper. Friedman-testen er et ikke-parametrisk alternativ til en envejs ANOVA med gentagne målinger, der anvendes til sammenligninger inden for forsøgspersoner. Begge bruges med post-hoc tests (dvs. Dunn eller Dunn-Bonferroni) efter en betydelig Kruskal-Wallis eller Friedmans test. For at undersøge, om der er meningsfulde forskelle mellem to uafhængige grupper, betragtes Mann-Whitney U-testen som den ikke-parametriske ækvivalent til den uafhængige t-test 28,29.
Figur 3: Freeze-frame billeder, der viser eksempler på LID intensitet scoring i parkinsoniske rotter. (A) Repræsentativt billede af en ikke-dyskinetisk parkinsonisk rotte, der viser den ofte typiske bøjede parkinsoniske kropsholdning i fravær af dystoni eller hyperkinesi. (B) Parkinsonsk rotte med generel mild LID-sværhedsgrad, hvilket indikerer mild til moderat højre forbensdystoni og mangel på nakke-, bagagerums- eller bagbensdystoni; i den ledsagende video (animeret video 1) kan man se små amplitude højre forpot dyskinesi (RFPD) og orolinguelle bevægelser. (C) Parkinsonsk rotte med moderat hals- og stammedystoni (fed tekst svarer til retningspile, der angiver bagagerum snoet i 90 ° vinkel). (D) Dyskinetisk parkinsonisk rotte med mild hals og moderat trunk dystoni, moderat til svær højre forben dystoni; i den ledsagende video (animeret video 3) kan blandet amplitude RFPD observeres. (E) Parkinsonsk rotte med moderat til svær nakke og svær trunk dystoni, svær højre bagben og moderat højre forben dystoni (fed tekst svarer til retningspile, der angiver, at bagagerummet er snoet ~ 180 °; dette er især bemærkelsesværdigt i eksempel nr. 2). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Eksempel på LID-data overholdt over 8 ugers LID-klassificeringer med eskalerende L-DOPA-dosering. (A) Maksimal dosis LID sværhedsgrad (80 min post-L-DOPA) på tværs af tid og doser. (B) Dagligt tidsforløb (20-170 min efter L-DOPA). For hver dosis og dag afspejler de øverste grafer gennemsnitlige ± SEM; de nederste grafer viser individuelle emnesvar over tid. Statistikker blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis med Dunns flere sammenligningstest (for test mellem forsøgspersoner) og Friedman-test med Dunns flere sammenligningstest (for test inden for forsøgspersoner). Forkortelser: Kontrol (Ctr) (n = 7); Behandling (Tx) (n = 10). Denne figur er genoptrykt og tilpasset med tilladelse fra reference19. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Score | Beskrivelse | |
| Hals dystoni | 0 | ingen |
| 1 | mild forskydning af hovedet, holdt i betydelig tid (>10-20 s); kan være ekstrem af normal | |
| 1.5 | blanding af mild og moderat dystoni | |
| 2 | hoved med mere bemærkelsesværdig forskydning (ca. 90 ° vinkel på kroppen); hovedet forbliver trukket i retning af den dystoniske bevægelse | |
| 2.5 | blanding af moderat og svær dystoni | |
| 3 | konstant alvorlig vrsion af nakkemuskulaturen (>100° vinkel mellem hoved og skuldre) | |
| Trunk dystoni | 0 | ingen |
| 1 | mild dystoni / vridning af bagagerummet; 45° forskel mellem øvre og nedre torso; holdes i betydelig tid (≥10-20 s) og ikke forudsiger rotationer | |
| 1.5 | blanding af mild og moderat dystoni | |
| 2 | moderat dystoni/vridning af bagagerummet; 90° forskel mellem over- og underkrop | |
| 2.5 | blanding af moderat og svær dystoni | |
| 3 | konstant svær dystoni/vridning, "proptrækker"-lignende stillingtagen (nærmer sig 180°; hoved og fødder i modsatte retninger), ude af stand til at ambulere og kan gå i tønderullerotation | |
| Forben dystoni | 0 | ingen |
| 1 | mild; unormal stillinggang af håndled eller cifre; enten knyttet næve eller stiv underarm, men normalt ikke begge samtidigt | |
| 1.5 | blanding af mild og moderat dystoni | |
| 2 | Moderat; knyttet næve og stift forben uden nedadgående fastholdelse i hyperstrækket position | |
| 2.5 | blanding af moderat og svær dystoni | |
| 3 | Alvorlig; knyttet næve og stiv underarm med nedadgående hyperextension | |
| Hindlimb dystoni | 0 | ingen |
| 1 | bagbenet mildt holdt i unormal kropsholdning; bøjning eller forlængelse. | |
| 1.5 | blanding af mild og moderat dystoni | |
| 2 | moderat stiv forlængelse eller bøjning af bagbenet; m/o cifrenes spedning | |
| 2.5 | blanding af moderat og svær dystoni | |
| 3 | alvorlig stiv kropsstilling af lem med unormal hyperextension +/- splaying af cifre | |
| Højre forpote dyskinesi (RFPD) | 0 | fraværende |
| 1 | små amplitudebevægelser, simpel gentagen side om side eller op og ned aftørring i ansigtets eller mundens område; eller banke på burvæggen eller affaldet | |
| 1.5 | blanding af små og store amplitudebevægelser; mest almindelige | |
| 2 | stor amplitude gentagne op og ned bevægelser, der involverer alvorlig forlængelse af højre forben, trækker nedad og modsat af nakken | |
| Orolingual | 0 | ingen |
| 1 | hovedsagelig lukket mund tom (formålsløs) tygning, tænder slibning | |
| 1.5 | vakuum tygning, der kan være noget tungefremspring, gentagen bidning på kuldet | |
| 2 | fremtrædende gentaget tungefremspring med fremtrædende åben mund tygge | |
| Hoved bobbing / tremor | 0 | ingen |
| 1 | til stede (gentagen og rytmisk bobbing af hovedet (ca. 4hz)) | |
| Konstant tygning af affald (CCL) | 0 | ingen |
| 1 | til stede (konstant tygning af affald; målrettet obsessiv bidning eller tygning af affald, gentagne gange opsamling, tygge, tabe, samle op, tygge, tabe affald) |
Tabel 1: LID-vurderingskriterier for intensitet af dystonisk eller hyperkinetisk adfærd hos parkinsoniske rotter. Disse klassificeringskriterier giver en række intensitetsmål relateret til kvaliteten/sværhedsgraden af rottens unormale ufrivillige arbejdsstillinger og/eller bevægelser. Specifikke attributter beskrevet for stillinger og adfærd klassificeres generelt som milde, moderate eller svære, med specifikke deskriptorer angivet her. En endelig sværhedsgradsscore bestemmes som produktet af intensitet x frekvens (tabel 2).
| Score | Beskrivelse |
| 0 | Fraværende |
| 1 | Intermitterende, < 50% af observationsperioden |
| 2 | Intermitterende, ≥ 50% af observationsperioden |
| 3 | Vedvarende i hele observationsperioden og ikke afbrudt af at banke på buret |
Tabel 2: LID-vurderingskriterier for hyppighed af dystonisk eller hyperkinetisk adfærd. Disse kriterier giver et kvantificeringsmål for den hastighed, hvormed en given adfærd forekommer eller gentages i observationsperioden. Dette er vigtigt for at vurdere den samlede sværhedsgrad, da sjælden adfærd berettiger en mindre alvorlig score end en vedvarende. En endelig sværhedsgradsscore bestemmes som produktet af intensitet (tabel 1) x frekvens.
Animeret video 1: Mild LID med lille amplitude RFPD og tygning af venstre forpote. Dyskinetisk parkinsonisk rotte uden mærkbar nakke eller trunk dystoni, men moderat højre forpot dystoni, lille amplitude RFPD bemærket som hurtig gentagen flimrende bevægelse af højre forpote. Denne rotte viser også orolingual adfærd, der involverer tom tygning rettet mod venstre forpote. L-DOPA dosis: 12 mg/kg; video optaget ~ 70 min efter injektion. Klik her for at downloade denne video.
Animeret video 2: Moderat bagagerum og halsdystoni. Dyskinetisk parkinsonrotte med moderat stamme- og halsdystoni eksemplificeret ved 90° forskellen i forbenets og bagbenenes position (se diagrammet i figur 2C). Denne rotte viser også fremtrædende stereotyp sniffing og lejlighedsvis tom bid på kuldet. L-DOPA dosis: 12 mg/kg; video optaget ~ 70 min efter injektion. Klik her for at downloade denne video.
Animeret video 3: Moderat til svær højre forpotedystoni med blandet amplitude RFPD. Dyskinetisk parkinsonisk rotte med mild hals og moderat trunk dystoni, moderat til svær højre forpotedystoni, blandet amplitude RFPD set som mindre aftørringsbevægelser nær munden blandet med større amplitude nedadgående træk af højre forpote. Denne rotte har også hyppig rotationsadfærd, der kan kvantificeres ud over LID-profiler. L-DOPA dosis: 12 mg/kg; video optaget ~ 70 min efter injektion. Klik her for at downloade denne video.
Animeret video 4: Hovedbob og orolingualbevægelser med tungefremspring. Dyskinetisk parkinsonisk rotte med svær bagagerum og forpot dystoni (bagben dystoni ikke synlig), moderat til svær nakke dystoni og en konstant hovedbob med igangværende tungefremspring. Hovedboben ligner den 4 Hz tremor, der ses i PD; hos rotter bemærkes det dog kun hos dyskinetiske parkinsoniske rotter efter L-DOPA-administration. Denne rotte har også blandet amplitude RFPD, set som mere signifikante amplitudebevægelser tidligt i videoen og små aftørringslignende bevægelser nær ansigtet, der er karakteristiske for RFPD med lille amplitude set senere. Der blev observeret let bevægelse på det stærkt dystoniske/forlængede forben tidligt i videoen; Dette er dog relateret til hoved- og nakkerystelseaktiviteten og vil ikke blive klassificeret som RFPD med lille amplitude. Når observatøren tapper kraftigt på buret, er disse LID-adfærd ikke afbrydelige, hvilket tyder på, at dette er en alvorlig LID, der ikke kan overvindes med en forskrækkelse. Klik her for at downloade denne video.
Supplerende fil 1: Eksempel til beregning af mængden af L-DOPA. Eksempel på beregninger til bestemmelse af den mængde L-DOPA og saltvand, der er nødvendig for hver ugedag, ved anvendelse af 12 mg L-DOPA/kg legemsvægt ved et injektionsvolumen på 1 cc/kg rottevægt. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende fil 2: Eksempel på LID-klassificeringslogark. Dette ark kan bruges eller tilpasses til at logge LID-intensitet og frekvensscorer under ratingsessioner. Den endelige sværhedsgradsscore bestemmes som produktet af intensitet (tabel 1) x frekvens (tabel 2). Disse ratingskalaer kan også bruges til at kvantificere LID i mus30. Klik her for at downloade denne fil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Præsenteret her er detaljer for reproducerbar induktion og klassificering af HED'er i en parkinsonisk rottemodel efter ensidig 6-OHDA-læsion af det nigrostriatale DA-system. Mens det engang blev antaget, at gnavere ikke udviklede LID, og at rotationsasymmetri kan være analogen til LID hos rotter31, er rotte- og musemodeller blevet karakteriseret i løbet af de sidste to årtier og er et godt accepteret værktøj til LID-forskning 15,32,33,34. Protokollen, der præsenteres her, er specifikt nyttig til eksperimentelle design i større skala18,19. Det giver detaljer til vurdering af intensiteten og hyppigheden af en række dyskinetiske adfærd, både dystoniske og hyperkinetiske. Især billeder og videoer med tilsvarende detaljerede noter og scoring af dystonisk og hyperkinetisk LID-adfærd vil hjælpe eksperimentatorens vurdering efter L-DOPA-administration. Mens et eksempel på enhver mulig AIM ikke gives, tilbydes en række adfærd, der varierer fra mild til moderat til svær, som en ramme for LID-vurdering. Denne protokol er blevet dokumenteret for at hjælpe med at evaluere forskellige terapier hos parkinsoniske rotter 19,35,36,37. Det øger andre offentliggjorte gnaverklassificeringsskalaer, der primært fokuserer på varigheden af foreskrevne LID-adfærd 33,38,39. Endvidere søger den skitserede procedure at tilpasse scoringsmetoder i en rotte PD-model til den nuværende praksis, der vurderer ED'er hos ikke-menneskelige primater (NHP'er), benchmark PD-modellen40,41.
Almindeligt forekommende i parkinsonian gnaverlitteraturen er LID eller AIM-ratingskalaer, der udelukkende involverer undersøgelse af forekomsten eller hyppigheden af (1) lemmeryskinesier (f.eks. Rytmiske ryk i forbenet kontralateralt til læsionen33 eller hurtig, formålsløs bevægelse af forbenet kontrolleret af den læsionerede halvkugle39); (2) aksiale dyskinesier (f.eks. vridning af aksiale muskler, der påvirker nakke, bagagerum og hale33, eller dystonisk vridning af nakke og torso kontralateral til den læsionerede halvkugle39); og (3) orolinguelle dyskinesier (f.eks. tyggebevægelser af den tomme mund med tungefremspring33 eller gentagen mastication eller tungefremspring, når rottens mund var tom og ikke i kontakt med noget objekt39). Disse tre adfærdsmæssige kategorier får en sværhedsgrad score baseret på deres hyppighed i observationsperioden. Sværhedsgradsscoren, der repræsenterer den tid, et dyr brugte på at udvise denne adfærd, ofte uden karakterisering af adfærdskvaliteten, kombineres derefter til den endelige ALO (aksial, lem og orolingual) score.
I modsætning hertil giver den nuværende protokol en mere detaljeret skala, der ikke kun tillader evaluering af globale AIM'er, men også muliggør undersøgelse af AIM'er i uafhængige kropsdele (dvs. nakke, bagagerum, forben, bagben og mund), intensiteten / kvaliteten af aim'et, der vurderes, differentiering af dystoni fra hyperkinetisk adfærd og, som med andre skalaer, inkorporerer hyppigheden af en given AIM's forekomst. Det overordnede mål er at muliggøre en omfattende vurdering af LID-adfærden udtrykt i hvert emne. For eksempel for den enkelte adfærdsmæssige aflæsning af trunk dystoni er en rotte, der udviser mild stammedystoni (dvs. 45 ° forskel mellem øvre og nedre torso, ikke forudsigende for drejeadfærd) i en hel observationsperiode meget forskellig fra en rotte, der udviser alvorlig stammedystoni (dvs. konstant alvorlig dystoni / vridning, proptrækkerlignende stilling, nærmer sig 180 °; hoved og fødder i modsatte retninger, ude af stand til at ambulere) for hele observationen. I betragtning af den topografiske repræsentation af rottens krop i striatum kan differentiering af individuelle egenskaber ved ED'er desuden være informativ36.
En anden komponent i denne protokol, der skal overvejes nøje, er det eksperimentelle design af eskalerende L-DOPA-dosering over et udvidet (f.eks. 8-ugers) behandlingstidsforløb (figur 1). En undersøgelse, der kun anvender lave doser L-DOPA (f.eks. 3-6 mg/kg) og/eller administrerer den valgte dosis i en kort periode (f.eks. 2-4 uger), kan vise tegn på LID-forbedring med terapeutisk intervention hos parkinsoniske rotter; Disse undersøgelsers relevans for personer med PD, hvor kronisk administration og dosiseskalering ofte er nødvendig, er imidlertid tvivlsom. Sådanne divergerende behandlingsprotokoller mellem prækliniske og kliniske afprøvninger kan foreslås at ligge til grund for den manglende effekt, der ses i kliniske forsøg med lægemidler, der viste lovende resultater i prækliniske gnaverundersøgelser.
Mens protokollen, der præsenteres her, indeholder instruktioner om en omfattende tilgang til klassificering af LID hos parkinsoniske rotter, og rottemodellen for LID er blevet etableret som en pålidelig model af klinisk LID 3,15,38,42,43, er der iboende begrænsninger for enhver model. Dyremodeller er værktøjer, der er nyttige til at efterligne bestemte egenskaber ved sygdomme hos mennesker og forudsige for eksempel den indvirkning, som terapeutisk intervention kan have på et sæt sygdomsfunktioner. Et træk ved prækliniske LID-modeller, der ofte diskuteres som en potentiel begrænsning, er, at rotter kræver betydelig DA-udtømning for at udtrykke LID. Derudover nævnes det ofte, at LID udvikler sig hurtigere i gnaver- og NHP-modeller end hos patienter, og derfor afspejler disse modelegenskaber ikke klinisk LID. Det er dog ofte undervurderet, at uanset art (dvs. menneskelig, ikke-menneskelig primat eller gnaver), er næsten fuldstændigt tab af striatal DA-innervering generelt påkrævet for at LID kan manifestere sig. Når L-DOPA er administreret til personer med svær striatal DA-udtømning, induceres LID 1,19,38,44,45,46. Et andet træk, der har skabt skepsis over for gnavermodeller af LID, kommer fra forventningen om, at de neurologiske tegn på LID skal ligne de fysiske manifestationer af LID, der ses hos primater (dvs. mennesker og ikke-mennesker). Faktisk varierer udseendet af de unormale bevægelser, der er klassificeret som LIAN'er hos rotter, i træk fra det, der ses hos primater (f.eks. Choreoathetosis hos primater vs. stereotypi / hyperkinesi hos gnavere). Selvom det er uden for denne artikel at behandle dette emne udførligt, er sådanne forskelle i tegn mellem arter kort baseret på det faktum, at mennesker er sædvanlige tobenede, ikke-primater hyppige tobenede og gnavere quadrupedal 43,46. Således har forskellige arter specifikke repertoirer af adfærd manifesteret af specifikke osteoartikulære og muskulære strukturer og moduleret af artsspecifikke neurale systemer43. Derfor bør dyremodellering af menneskelignende symptomer primært baseres på en forventning om funktionel lighed snarere end på fysisk identitet43. Fortolkning af resultater fra dyremodeller med behørig forsigtighed har og vil fortsat give værdifulde forudsigelser for sygdomsbehandling.
Mens der i øjeblikket er et FDA-godkendt lægemiddel til behandling af LID i PD, amantadin, og det kirurgiske indgreb af DBS kan forbedre LID, er effekten og tolerabiliteten ikke optimal, og ikke alle patienter vil kvalificere sig til DBS-kirurgi. Som veltalende gennemgået af Cenci og kolleger47 er der en forestilling udtrykt af nogle, at personer, der er ramt af PD, hellere vil være ON (dvs. opleve den motoriske fordel ved L-DOPA) med dyskinesier end OFF. Som disse forfattere gribende siger: "Den dybere sandhed er, at patienter meget hellere vil være ON uden dyskinesi. Som forskere og klinikere bør vi stræbe efter at gøre dette mål til virkelighed. Med henblik herpå skal translationel forskning om LID opmuntres og vedvarende forfølges." I forfølgelsen af dette mål præsenterer vi vores metode til induktion og klassificering af LID. Vores ratingskala er designet til at kombinere en række intensitetsmål relateret til kvaliteten/sværhedsgraden af AIM'erne og angiver, hvor lang tid en række attributter af dyskinesi vises. Hensigten med denne model er at gøre det muligt at bestemme en numerisk værdi, der nøjagtigt afspejler LID-sværhedsgraden, samtidig med at der redegøres for både intensitet og frekvens. Desuden angiver denne værdi LID's sværhedsgrad ikke kun systemisk, men også i forhold til specifikke kropsdele. Med denne model sigter vi mod at sikre, at eksperimentelle terapier kan testes grundigt for deres evne til at ændre levodopa-inducerede dyskinesier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Der blev ikke erklæret nogen interessekonflikter.
Acknowledgments
Vi ønsker at anerkende kampene for alle dem med Parkinsons sygdom og den styrke og modstandsdygtighed, de viser hver dag, især den elskede far til KSC, Mark Steece. Arbejdet repræsenteret her blev støttet af National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NS090107, NS110398) og Parkinson Disease Foundation International Research Grant Program, nu Parkinson Foundation. Vi vil også gerne anerkende Molly VanderWerp for hendes fremragende redaktionelle assistance.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 Minutes Digital Timer | Staples | 1111764 | |
| Compass CX Compact Scale | Ohaus | 30428202 | |
| 5-(2-aminoethyl)-1,2,4-benzenetriol, monohydrobromide | Cayman Chemicals | 25330 | 6-OHDA is a catecholaminergic neurotoxin that is used to induce dopaminergic lesions and parkinsonian symptoms in rodents. |
| Allentown cages | Allentown, LLC | Rat900 | Allentown cages provide the ability to view the rats from all sides. |
| BD Allergist Trays with Permanently Attached Needle | BD | BD 305540 | For subcutaneous L-DOPA injections |
| Benserazide hydrochloride | Sigma-Aldrich | B7283 | Benserazide is a peripheral decarboxylase inhibitor used with L-DOPA to to induce dyskinesia in rodent models of PD. |
| Glass amber scintillation vials | Thermo Scientific | B7921 | Used for storage of L-DOPA/benserazide at -20 °C until mixed with sterile saline. |
| L-3,4-Dihydroxyphenylalanine methyl ester hydrochloride | Sigma-Aldrich | D1507 | L-3,4-Dihydroxyphenylalanine methyl ester is a precursor to L-DOPA that crosses the blood-brain barrierand use to treat parkinsonian symptoms in rodents. |
| Paper Mate Sharpwriter Mechanical Pencils | Staples | 107250 | |
| Rodent nutritionally complete enrichment treats | Bio-Serv | F05478 | |
| Round Ice Bucket with Lid, 2.5 L | Corning | 432129 | |
| Standard Plastic Clipboard | Staples | 1227770 | |
| Steel wired 6' long movable shelving units | Uline | H9488 | Width/Height can be adjusted to need/number of rats per experiment |
| Sterile Saline 0.9% | Covidien/Argyle | 1020 | For mixing with L-DOPA/benserazide prior to subcutaneous injections. |
References
- Cotzias, G. C., Papavasiliou, P. S., Gellene, R.
- Yahr, M. D., Duvoisin, R. C., Schear, M. J., Barrett, R. E., Hoehn, M. M.
- Bastide, M. F., et al. Pathophysiology of L-dopa-induced motor and non-motor complications in Parkinson's disease. Progress in Neurobiology. 132, 96-168 (2015).
- Sellnow, R. C., et al. Regulation of dopamine neurotransmission from serotonergic neurons by ectopic expression of the dopamine D2 autoreceptor blocks levodopa-induced dyskinesia. Acta Neuropathologica Communications. 7 (1), 8 (2019).
- Bastide, M. F., Bezard, E. L-dopa induced dyskinesia in Parkinson's disease]. Bulletin de l'Académie Nationale de Médecine. 199 (2-3), 201-212 (2015).
- Hauser, R. A., et al. ADS-5102 (Amantadine) extended-release capsules for levodopa-induced dyskinesia in Parkinson's Disease (EASE LID 2 study): Interim results of an open-label safety study. Journal of Parkinson's Disease. 7 (3), 511-522 (2017).
- Huot, P., Johnston, T. H., Koprich, J. B., Fox, S. H., Brotchie, J. M. The pharmacology of L-DOPA-induced dyskinesia in Parkinson's disease. Pharmacological Reviews. 65 (1), 171-222 (2013).
- Steece-Collier, K., et al. Embryonic mesencephalic grafts increase levodopa-induced forelimb hyperkinesia in parkinsonian rats. Movement Disorders. 18 (12), 1442-1454 (2003).
- Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a unilaterally-lesioned 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease. Journal of Visualized Experiments. (60), e3234 (2012).
- Simola, N., Morelli, M., Carta, A. R. The 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease. Neurotoxicity Research. 11 (3-4), 151-167 (2007).
- Borlongan, C. V., Hida, H., Nishino, H. Early assessment of motor dysfunctions aids in successful occlusion of the middle cerebral artery. Neuroreport. 9 (16), 3615-3621 (1998).
- Fleming, S. M. Behavioral outcome measures for the assessment of sensorimotor function in animal models of movement disorders. International Review of Neurobiology. 89, 57-65 (2009).
- Borlongan, C. V., Sanberg, P. R. Elevated body swing test: a new behavioral parameter for rats with 6-hydroxydopamine-induced hemiparkinsonism. Journal of Neuroscience. 15 (7), Pt 2 5372-5378 (1995).
- Chang, J. W., Wachtel, S. R., Young, D., Kang, U. J. Biochemical and anatomical characterization of forepaw adjusting steps in rat models of Parkinson's disease: studies on medial forebrain bundle and striatal lesions. Neuroscience. 88 (2), 617-628 (1999).
- Lundblad, M., et al. Pharmacological validation of behavioural measures of akinesia and dyskinesia in a rat model of Parkinson's disease. European Journal of Neuroscience. 15 (1), 120-132 (2002).
- Olsson, M., Nikkhah, G., Bentlage, C., Bjorklund, A. Forelimb akinesia in the rat Parkinson model: differential effects of dopamine agonists and nigral transplants as assessed by a new stepping test. Journal of Neuroscience. 15 (5), Pt 2 3863-3875 (1995).
- Monville, C., Torres, E. M., Dunnett, S. B. Comparison of incremental and accelerating protocols of the rotarod test for the assessment of motor deficits in the 6-OHDA model. Journal of Neuroscience Methods. 158 (2), 219-223 (2006).
- Steece-Collier, K., et al. Striatal Nurr1, but not FosB expression links a levodopa-induced dyskinesia phenotype to genotype in Fisher 344 vs. Lewis hemiparkinsonian rats. Experimental Neurology. 330, 113327 (2020).
- Steece-Collier, K., et al. Genetic silencing of striatal CaV1.3 prevents and ameliorates levodopa dyskinesia. Movement Disorders. 34 (5), 697-707 (2019).
- Tayarani-Binazir, K. A., Jackson, M. J., Strang, I., Jairaj, M., Rose, S., Jenner, P. Benserazide dosing regimen affects the response to L-3,4-dihydroxyphenylalanine in the 6-hydroxydopamine-lesioned rat. Behavioral Pharmacology. 23 (2), 126-133 (2012).
- Lindgren, H. S., Rylander, D., Ohlin, K. E., Lundblad, M., Cenci, M. A. The "motor complication syndrome" in rats with 6-OHDA lesions treated chronically with L-DOPA: relation to dose and route of administration. Behavioural Brain Research. 177 (1), 150-159 (2007).
- Suckow, M. A., Stevens, K. A., Wilson, R. P. American College of Laboratory Animal Medicine series xvii. , Academic Press/Elsevier. London; Waltham, MA. 1268 (2012).
- Zhou, Y. Z., Alany, R. G., Chuang, V., Wen, J. Studies of the Rate Constant of l-DOPA Oxidation and Decarboxylation by HPLC. Chromatographia. 75, 597-606 (2012).
- Stroomer, A. E., Overmars, H., Abeling, N. G., van Gennip, A. H. Simultaneous determination of acidic 3,4-dihydroxyphenylalanine metabolites and 5-hydroxyindole-3-acetic acid in urine by high-performance liquid chromatography. Clinical Chemistry. 36 (10), 1834-1837 (1990).
- PubChem Compound Summary for CID 6047, Levodopa. , Available from: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Levodopa (2021).
- Merck. The Merck Index 13th edn. , Entry# 5485 (2021).
- Ortner, N. J., et al. Lower affinity of isradipine for L-Type Ca(2+) channels during substantia nigra dopamine neuron-like activity: Implications for neuroprotection in Parkinson's Disease. Journal of Neuroscience. 37 (228), 6761-6777 (2017).
- Hazra, A., Gogtay, N. Biostatistics series module 3: Comparing groups: Numerical variables. Indian Journal of Dermatology. 61 (3), 251-260 (2016).
- Mishra, P., Pandey, C. M., Singh, U., Keshri, A., Sabaretnam, M. Selection of appropriate statistical methods for data analysis. Annals of Cardiac Anaesthesia. 22 (3), 297-301 (2019).
- Divito, C. B., et al. Loss of VGLUT3 produces circadian-dependent hyperdopaminergia and ameliorates motor dysfunction and l-Dopa-Mediated dyskinesias in a model of Parkinson's Disease. Journal of Neuroscience. 35 (45), 14983-14999 (2015).
- Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. Characterization of enhanced behavioral responses to L-DOPA following repeated administration in the 6-hydroxydopamine-lesioned rat model of Parkinson's disease. Experimental Neurology. 151 (2), 334-342 (1998).
- Andersson, M., Hilbertson, A., Cenci, M. A. Striatal fosB expression is causally linked with l-DOPA-induced abnormal involuntary movements and the associated upregulation of striatal prodynorphin mRNA in a rat model of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 6 (6), 461-474 (1999).
- Cenci, M. A., Lee, C. S., Bjorklund, A. L-DOPA-induced dyskinesia in the rat is associated with striatal overexpression of prodynorphin- and glutamic acid decarboxylase mRNA. European Journal of Neuroscience. 10 (8), 2694-2706 (1998).
- Dekundy, A., Lundblad, M., Danysz, W., Cenci, M. A. Modulation of L-DOPA-induced abnormal involuntary movements by clinically tested compounds: further validation of the rat dyskinesia model. Behavioural Brain Research. 179 (1), 76-89 (2007).
- Collier, T. J., et al. Interrogating the aged striatum: robust survival of grafted dopamine neurons in aging rats produces inferior behavioral recovery and evidence of impaired integration. Neurobiology of Disease. 77, 191-203 (2015).
- Maries, E., et al. Focal not widespread grafts induce novel dyskinetic behavior in parkinsonian rats. Neurobiology of Disease. 21 (1), 165-180 (2006).
- Mercado, N. M., et al. The BDNF Val66Met polymorphism (rs6265) enhances dopamine neuron graft efficacy and side-effect liability in rs6265 knock-in rats. Neurobiology of Disease. 148, 105175 (2021).
- Cenci, M. A., Crossman, A. R. Animal models of l-dopa-induced dyskinesia in Parkinson's disease. Movement Disorders. 33 (6), 889-899 (2018).
- Lindenbach, D. Behavioral and cellular modulation of L-DOPA-induced dyskinesia by beta-adrenoceptor blockade in the 6-hydroxydopamine-lesioned rat. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 337 (3), 755-765 (2011).
- Petzinger, G. M. Reliability and validity of a new global dyskinesia rating scale in the MPTP-lesioned non-human primate. Movement Disorders. 16 (2), 202-207 (2001).
- Fox, S. H., Johnston, T. H., Li, Q., Brotchie, J., Bezard, E. A critique of available scales and presentation of the Non-Human Primate Dyskinesia Rating Scale. Movement Disorders. 27 (11), 1373-1378 (2012).
- Cenci, M. A., Ohlin, K. E. Rodent models of treatment-induced motor complications in Parkinson's disease. Parkinsonism & Related Disorders. 15, Suppl 4 13-17 (2009).
- Cenci, M. A., Whishaw, I. Q., Schallert, T. Animal models of neurological deficits: how relevant is the rat. Nature Reviews: Neuroscience. 3 (7), 574-579 (2002).
- Zhang, Y., et al. Aberrant restoration of spines and their synapses in L-DOPA-induced dyskinesia: involvement of corticostriatal but not thalamostriatal synapses. Journal of Neuroscience. 33 (28), 11655-11667 (2013).
- Konradi, C., et al. Transcriptome analysis in a rat model of L-DOPA-induced dyskinesia. Neurobiology of Disease. 17 (2), 219-236 (2004).
- Morin, N., Jourdain, V. A., Di Paolo, T. Modeling dyskinesia in animal models of Parkinson disease. Experimental Neurology. 256, 105-116 (2014).
- Cenci, M. A., Riggare, S., Pahwa, R., Eidelberg, D., Hauser, R. A.
