Charakterisierung der Salmonella Typhimurium-induzierten septischen Peritonitis bei Mäusen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt die Induktion einer gramnegativen monobakteriellen Sepsis in einem Mausmodellsystem. Das Modell ist nützlich bei der Untersuchung der entzündlichen und tödlichen Wirtsreaktionen während der Sepsis.

Zusammenfassung

Sepsis ist eine fehlregulierte Immunantwort des Wirts auf mikrobielle Invasion oder Gewebeschäden, die zu Organverletzungen an einer Stelle führt, die von der der Infektion oder des Schadens entfernt ist. Derzeit umfassen die weit verbreiteten Mäusemodelle der Sepsis Lipopolysaccharid (LPS)-induzierte Endotoxämie, cecal ligation and puncture (CLP) und monobakterielle Infektionsmodellsysteme. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Untersuchung der Wirtsreaktionen während der durch Salmonella Typhimurium-Infektion induzierten septischen Peritonitis bei Mäusen. S. Typhimurium, ein gramnegativer intrazellulärer Erreger, verursacht bei Mäusen eine typhusähnliche Erkrankung.

Dieses Protokoll entwickelt die Kulturvorbereitung, die Induktion einer septischen Peritonitis bei Mäusen durch intraperitoneale Injektion und Methoden zur Untersuchung systemischer Wirtsreaktionen. Weiterhin wird die Beurteilung der Keimbelastung in verschiedenen Organen und die durchflusszytometrische Analyse erhöhter Neutrophilenzahlen in der Peritonealspülung vorgestellt. Salmonelle Typhimurium-induzierte Sepsis bei Mäusen führt zu einem Anstieg der proinflammatorischen Zytokine und einer schnellen Infiltration von Neutrophilen in der Peritonealhöhle, was zu einem geringeren Überleben führt.

Jeder Schritt in diesem Protokoll wurde optimiert, was zu einer hohen Reproduzierbarkeit der Pathogenese der septischen Peritonitis führt. Dieses Modell ist nützlich für die Untersuchung immunologischer Reaktionen während bakterieller Sepsis, der Rolle verschiedener Gene im Krankheitsverlauf und der Auswirkungen von Medikamenten zur Abschwächung der Sepsis.

Einleitung

Sepsis ist definiert als eine fehlregulierte systemische Entzündungs- und Immunantwort auf mikrobielle Invasion oder Gewebeschäden, die zu Organverletzungen führen, die weit vom Ort der Infektion oder Schädigung entfernt sind. Der septische Schock ist eine Untergruppe der Sepsis, die durch eine Hypotonie gekennzeichnet ist, die während der Volumenreanimation anhält, mit einem wesentlich erhöhten Mortalitätsrisiko¹. Die breite Öffentlichkeit ist sich dieser Störung während der COVID-19-Pandemie bewusster geworden. Trotz der hohen assoziierten Mortalität fehlen aufgrund der Komplexität der Diagnose umfassende epidemiologische Daten zur globalen B....

Protokoll

Alle Experimente mit Salmonella Typhimurium wurden in Einrichtungen der Biosicherheitsstufe 2 (BSL-2) durchgeführt. Es muss darauf geachtet werden, dass eine geeignete persönliche Schutzausrüstung (PSA) verwendet, die Sicherheit gewährleistet und die Standardmethoden zur Entsorgung von BSL-2-Biogefahren befolgt werden. Alle Mäuseexperimente wurden nach den Richtlinien des Institutional Animal Ethics Committee, IISc, durchgeführt. Mäuse wurden in der Central Animal Facility von IISc (Registrierungsnummer: 48/1999/CPCSEA, vom 1.3.1999) gezüchtet und gepflegt, die vom Ministerium für Umwelt und Wald der indischen Regierung genehmigt wurde. Die Versuchsprotokolle....

Ergebnisse

Eine detaillierte Charakterisierung der Immunantwort des Wirts mit diesem speziellen Modell ist in früheren Publikationen^{gezeigt 8,9}. Einige repräsentative Ergebnisse des beschriebenen Protokolls werden in diesem Abschnitt dargestellt. Dieses Modell zielt darauf ab, eine systemische Infektion von S zu induzieren. Typhimurium durch intraperitoneale Injektion der Bakterienkultur zur Induktion einer Sepsis. Um die Infektion zu bestätigen, wurden die Lysate .......

Diskussion

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Induktion einer schweren Form der bakteriellen Sepsis durch intraperitoneale Injektion von Salmonella Typhimurium. Dieses Modell ist vorteilhaft gegenüber anderen, da Salmonella Typhimurium ein intrazellulärer Erreger und daher hoch pathogen ist und den klinisch relevanten Zustand der gramnegativen Sepsis nachahmt. Das Ergebnis der Peritonitis-Sepsis in diesem Modell ist systemisch, mit 100% Mortalität innerhalb von 96 h nach der Infektion. Daher ist dieses Mod.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Verbrauchsmaterialien
1 mL Sterile Spritze mit 26 g	Nadel Beckton Dickinson, Singapur	303060
1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen	Tarsons, USA	500010
10 mL Sterile Spritze mit 21 g Nadel	Beckton Dickinson, Spanien	307758
50 mL Konuskolben	Tarsons, USA	441150
50 mL Messschieber-Zentrifugenröhrchen	Tarsons, USA	546041
50 mL Mess-Zentrifugenröhrchen	Tarsons, USA	546021
Zellspreizer	VWR, USA	VWRU60828-680
Dulbecco' s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung	HiMedia, Mumbai, Indien	TS1006
Ethanol	Merck	100983 FcR-Blocker
	BD Biosciences	553142
Fötales Rinderserum	Gibco	10270-106
FITC Ratte Anti-Maus Ly6G (Klon 1A8)	BD Pharmingen	551460
Glycerin	Sigma-Aldrich	G9012
Handbasierter Homogenisator	-
Hämozytometer (Neubauer-Zählkammer)	Rohem, Indien	I.S. 10269
Luria Bertani Bouillon	HiMedia, Mumbai, Indien	M1245
Paraformaldehyd	Sigma-Aldrich	158127
Petriplatten	Tarsons, USA	460091
RPMI	Himedia, Mumbai, Indien	AT060-10X1L
Salmonellen-Shigella-Agar	HiMedia, Mumbai, Indien	M108
Natriumazid	Sigma-Aldrich	S2002
Ausrüstungen
Zentrifuge	Kubota
Durchflusszytometer	BD FACSverse
Inkubator	N-biotek
Spektralphotometer	Shimadzu
Waage	Sartorius