Summary
이 프로토콜은 마우스 모델 시스템에서 그람 음성 단세균 패혈증의 유도를 기술한다. 상기 모델은 패혈증 동안 염증성 및 치명적인 숙주 반응을 조사하는데 유용하다.
Abstract
패혈증은 미생물 침윤 또는 조직 손상에 대한 조절이 어려운 숙주 면역 반응으로, 감염 또는 손상으로부터 멀리 떨어진 부위에서 장기 손상을 유발한다. 현재, 패혈증의 널리 사용되는 마우스 모델은 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 내독소혈증, 맹장 결찰 및 천자 (CLP), 및 단세균 감염 모델 시스템을 포함한다. 이 프로토콜은 마우스에서 살모넬라 티피뮤리움 감염-유도된 패혈성 복막염 동안 숙주 반응을 연구하는 방법을 기술한다. S. 그람 음성 세포 내 병원균 인 티피뮤리움은 생쥐에서 장티푸스와 같은 질병을 일으 킵니다.
이 프로토콜은 배양 준비, 복강 내 주사를 통한 마우스의 패혈성 복막염 유도 및 전신 숙주 반응을 연구하는 방법을 정교하게 설명합니다. 또한, 상이한 기관에서의 박테리아 부담의 평가 및 복막 세척에서 증가된 호중구 수의 유세포 분석이 제시된다. 살모넬라 균 마우스에서 티피뮤리움-유도된 패혈증은 전염증성 사이토카인의 증가와 복강 내의 호중구의 빠른 침윤을 유도하여, 생존율을 낮춘다.
이 프로토콜의 모든 단계가 최적화되어 패혈성 복막염의 발병기전을 재현 할 수 있습니다. 이 모델은 세균성 패혈증 동안 면역학적 반응, 질병 진행에서 상이한 유전자의 역할, 및 패혈증을 약화시키는 약물의 효과를 연구하는데 유용하다.
Introduction
패혈증은 미생물 침윤 또는 조직 손상에 대한 조절되지 않는 전신성 염증 및 면역 반응으로 정의되며, 감염 또는 손상 부위로부터 멀리 떨어진 장기 손상을 초래한다. 패혈성 쇼크는 부피 소생술 동안 지속되는 저혈압을 특징으로 하는 패혈증의 하위 집합으로, 사망 위험이 실질적으로 증가한다1. 일반 대중은 COVID-19 전염병 동안이 장애를 더 잘 알게되었습니다. 높은 관련 사망률에도 불구하고, 패혈증의 세계적 부담에 대한 포괄적 인 역학 데이터는 진단의 복잡성 때문에 부족합니다. 2017 년에는 전 세계적으로 48.9 백만 패혈증 발생률과 11 백만 명의 사망자가 있었으며 전 세계 사망자2의 19.7 %를 차지했습니다. 또한, 중환자실 환자에서 감염 및 관련 패혈증의 연장 유병률에 관한 연구에 따르면 환자로부터의 양성 격리물의 62%가 그람 음성 유기체3이었다.
처음에는 패혈증에 대한 조사가 미생물 병인을 묘사하는 데 중점을 두었습니다. 그러나 숙주가 자신과 비 자아를 구별하는 방법을 지시하는 "위험 가설"을 이해하면 침입하는 병원체에 대한 숙주 반응을 이해하는 방향으로 패혈증 연구의 균형이 기울어졌습니다. 패혈증의 널리 사용되는 마우스 모델은 리포폴리사카라이드(LPS)-유도된 내독소혈증 모델, 다미생물 패혈증 모델, 맹장 결찰 및 천자(CLP) 및 결장 상승 스텐트 복막염(CASP), 및 단세균 감염 모델4를 포함한다.
우리는 살모넬라 티피뮤리움을 사용하여 복막 패혈증을 유도하여 마우스 모델 시스템을 표준화했습니다. 이 모델은 살모넬라 티피뮤리움이 그람 음성 패혈증의 임상적으로 관련된 상태를 모방하는 세포 내 병원체이기 때문에 다른 모델보다 유리합니다. 이 모델에서 복막염 패혈증의 결과는 전신적이며, 감염 후 96 시간 이내에 100 % 사망률이 있습니다. 따라서이 모델은 염증 및 치명적인 숙주 반응을 연구하는 데 도움이됩니다. 이 모델에서, 패혈증은 살모넬라 티피뮤리움의 0.5백만 콜로니 형성 단위(CFU)를 8-10주령의 C57BL/6 마우스에 복강내 주입함으로써 유도된다. 전신 감염은 감염 후 ∼16 h 장기 박테리아 부담을 평가함으로써 확인할 수 있다. 이 기사는 마우스에서 살모넬라 티피뮤리움으로 인한 복막염 패혈증을 시연하고, 복막 세포 조성의 결과 변화를 특성화하고, 다른 장기에서 박테리아 부담을 정량화합니다.
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Protocol
살모넬라 티피뮤리움을 이용한 모든 실험은 바이오 안전 레벨 2(BSL-2) 시설에서 수행되었다. 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 사용하고 안전을 보장하며 표준 BSL-2 생물학적 위험 처리 방법을 따르기 위해주의를 기울여야합니다. 모든 마우스 실험은 IISc, Institutional Animal Ethics Committee에 의해 명시된 지침에 따라 수행되었다. 마우스는 인도 정부의 환경 및 산림부의 승인을 받은 IISc의 중앙 동물 시설(등록 번호: 48/1999/CPCSEA, 1999년 1월 3일자)에서 사육되고 유지되었다. 실험 프로토콜은 승인 된 허가 번호 CAF / Ethics / 797 / 2020으로 동물 실험의 목적 및 통제 및 감독위원회에 의해 승인되었습니다.
BSL2 정의 : BSL2 등급은 생물 유해 물질이 환경 및 실험실 직원에게 중간 정도의 위협을 제기한다는 것을 나타냅니다5.
1. 살모넬라 티피뮤리움의 문화 준비
- 살모넬라 티피뮤리움 NCTC 12023 글리세롤 스톡 100 μL를 루리아 베르타니(LB) 국물 3 mL에 첨가한다. 배양물을 37°C에서 160 rpm으로 밤새 인큐베이션한다.
- LB 배양액에서 밤새 성장한 배양물 50 μL를 살모넬라 시겔라(SS) 한천 플레이트 상에 줄무늬를 놓고 ∼12 h 동안 37°C에서 인큐베이션한다. 박테리아 콜로니와 함께 SS 한천 플레이트를 생체내 감염 실험 전에 며칠 동안 4°C에서 보관한다.
- 마이크로팁을 사용하여 줄무늬가 있는 SS 한천 플레이트에서 단일 콜로니를 선택하십시오. 마이크로팁을 LB 브로스 3 mL에 넣고 꺼내어 밤새 37°C에서 160 rpm으로 배양하였다.
- 박테리아 배양액 0.1 mL를 LB 배양액 50 mL에 첨가하고, 진탕기 배양기에서 37°C에서 3-4시간 동안 160 rpm으로 인큐베이션하여 대수 성장 단계에 도달한다. LB 국물을 사용하여 배양물을 2 배로 희석하십시오.
참고 : 대수 단계 동안, 박테리아 세포는 최상의 건강을 유지하고 적극적으로 분열하고 있습니다. - 분광광도계 또는 마이크로플레이트 판독기에서 600 nm 파장의 광에서 배양된 광의 광학 밀도(OD)를 측정한다. OD가 1.0에 도달하면, 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브에서 배양물 1 mL의 두 분취량을 만든다.
- 튜브를 7,750 × g 에서 15분 동안 원심분리한다. 상청액을 버리고 펠렛을 1 mL의 1x PBS 2x로 세척한다. 튜브를 7,750 × g 에서 15분 동안 원심분리한다.
- 펠렛을 0.5 mL의 1x PBS에 재현탁시켜 두 개의 상이한 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브에 재현탁시킨다. 두 튜브의 현탁액을 현재 ~2 ~ 2 × 10,8 콜로니 형성 단위 (CFU)/mL가 들어있는 하나의 1.5 mL 튜브에 결합하십시오.
- 이 원액을 희석하여 1 × 106 CFU/mL의 박테리아 세포 현탁액을 준비하십시오.
주의: 실험을 시작하기 전에 OD 1.0에 대한 CFU를 결정하기 위해 특정 실험실 조건에서 OD에 해당하는 CFU를 최적화하십시오.
2. 생쥐와 감염
- 8-10 주령의 수컷 C57BL / 6 마우스는 며칠 동안 동물 시설의 청정 공기 실에서 ~ 20g의 체중을 수용합니다.
- 감염 당일에는 한 손으로 마우스를 잡고 70 % 에탄올로 복부 피부를 닦은 다음 뒷다리를 펴서 복벽의 접근성을 향상시킵니다.
- 0.5 mL의 1 × 106 CFU/mL 박테리아 현탁액을 1 mL 주사기의 도움으로 복강내 주사하십시오. 따라서 각 마우스는 5 × 105 CFU를 수신합니다. 대조군, 감염되지 않은 마우스는 0.5 mL의 PBS 단독을 수용한다. 감염 후, 플레이트 배양물을 주입된 실제 CFU를 확인하기 위해, 이는 0.2-0.8 백만 CFU/0.5 mL에서 다양할 수 있다.
- 마우스를 배정 된대로 케이지에 다시 넣으십시오.
- 최상의 반응을 위해 감염 후 CO2 질식∼12-18 h를 사용하여 마우스를 희생시킨다. 일반적으로 감염된 모든 마우스는 96 시간 이내에 사망합니다. 일부 실험적 개입 하에서, 일부 마우스는 생존 할 수 있습니다. 96 시간 후에이 마우스를 안락사시킨다. 또한 체온이 33.2 °C 미만이고 96 h에서 급성 통증이있는 마우스를 인도적 인 종점으로 안락사시킵니다.
참고 :이 모델에서 일부 마우스는 살모넬라 균 주사 후 12 시간 후에 사망하기 시작할 수 있습니다. 따라서 여러 시점을 포함하는 실험을 적절하게 계획하십시오.
3. 장기의 CFU 평가
- CO2 질식에 의해 감염된 마우스를 희생시키고, 70% 에탄올에 담근 면화 조각으로 복부를 닦아낸다. 복부 피부를 엽니 다. 복막 세척액을 수집하는 방법에 대한 비디오 프로토콜에 대해서는 Ray and Dittel의 기사를 참조하십시오6. 복강을 자르고 미세 퍼지 튜브에 관심있는 기관을 수집하십시오. 또한, 패혈증이있는 마우스의 혈액이 빠르게 응고되고 양이 적기 때문에 희생 후 빨리 수집하십시오.
참고 :이 비디오는이 패혈증 모델에서 간이 광범위한 조직 병리학 적 손상을 겪을 때 간에서 장기 CFU의 열거를 보여줍니다. - 간장의 작은 조각을 자르고 미세 퍼지 튜브에 넣으십시오.
참고: 다음 단계로 진행하기 전에 최대 2-3시간 동안 얼음에 저장할 수 있습니다. - 무게를 측정하고 조각을 마이크로 원심분리 튜브로 옮깁니다. 바람직하게는, 적절한 균질화를 위해 ∼10-15 mg 무게의 조각을 절단한다. 장간막 림프절 (MLN) 또는 흉선과 같은 작은 장기의 경우 전체 장기를 사용하십시오.
- 0.5 mL의 1x PBS를 튜브에 첨가하고, 손 균질기를 사용하여 장기를 균질화한다. 장기가 완전히 균질화되어 있는지 확인하십시오. 0.5 mL의 1x PBS를 첨가하여 부피를 1 mL로 구성한다.
- 튜브를 200 × g 에서 4°C에서 5분 동안 원심분리한다.
- 상청액을 신선한 미세퍼지 튜브에 모으고 96웰 플레이트×서 10-1 및 10-2의 희석액을 준비합니다.
- 희석제 50 μL를 신선한 SS 한천 플레이트 상에 확산시키고, 플레이트를 37°C에서 12시간 동안 인큐베이션한다.
- 각 조건에 나타나는 콜로니의 수를 계산하고 방정식 (1)을 사용하여 장기 무게로 데이터를 정규화하십시오.
CFU/밀리그램 =
(1)
참고: 숫자 20은 플레이트당 콜로니를 CFU/mL로 변환하기 위해 수식에 사용됩니다. 이 숫자는 1 mL를 이 경우, 50 μL-플레이팅된 배양물의 주어진 부피의 양으로 나눔으로써 도달한다.
예를 들어, SS 한천 플레이트에서 100개의 콜로니가 발견되고, 여기서 10mg 무게의 균질화된 기관의 1× 10-1 희석액의 50 μL가 확산되는 경우,
CFU/mg =
(1)
4. 복막 삼출액의 다양한 면역 세포 집단의 유세포 분석
- Ray 및 Dittel6에 의해 이전에 기술된 바와 같이 복막 세포를 수집한다.
- 복막 세척액으로부터 세포 펠릿을 10% 소 태아 혈청(FBS)으로 보충된 RPMI 1 mL에 재현탁시킨다. 혈구세포계를 사용하여 복막 세척에서 총 세포 수를 열거한다. 모든 튜브가 0.2-0.5 백만 개의 셀을 받도록 셀 번호를 조정하십시오.
참고: 패혈증이 있는 마우스의 복막 세척에는 RBC가 포함될 수 있으며, 이는 출혈로 인해 나타날 수 있습니다. 복막 세포를 세는 동안 RBC를 제외하도록주의하십시오. 밝은 장 현미경에서 RBC는 면역 세포보다 훨씬 작게 나타납니다. 이들은 평평한 디스크 또는 도넛으로 나타나며 둥글고 중앙에 들여 쓰기가 있지만 비어 있지는 않습니다. RBC를 용해시키는 단계는7이 추가될 수 있다. - 세포를 200 × g 에서 4°C에서 10분 동안 스핀다운하고, 상청액을 버리고, 세포를 1x 차가운 PBS로 1x 세척한다. 세포를 200 × g 에서 4°C에서 10분 동안 원심분리한다.
- PBS 중의 5% FBS 및 0.02% 나트륨 아지드로 구성된 차단 완충액에서 제조된 FcR 차단제 (1:400 희석)를 사용하여 PECs 상의 Fc 수용체를 차단한다. 얼음 위에서 15 분 동안 배양하십시오.
- 세포를 200 × g 에서 4°C에서 10분 동안 원심분리한다. 상층액을 버리십시오. 블로킹 완충액에 관심있는 플루오로크롬-컨쥬게이션된 항체를 희석한다. 항-마우스 LY6G의 1:500 희석액을 사용하여 호중구를 염색한다.
참고: 다른 면역 세포 집단은 또한 예를 들어, B 세포에 대한 항-마우스 B220, T 세포에 대한 항-마우스 CD3, 및 대식세포에 대한 항-마우스 F4/80을 사용하여 검출될 수 있다. - 항체의 희석된 용액 200 μL에 ∼0.2백만 세포를 분리된 튜브에 인큐베이션한다. 음성 대조군으로서, 염색되지 않은 대조군을 위해 각각의 플루오로크롬 타입에 하나의 튜브를 따로 두어 항체없이 200 μL의 블로킹 완충액으로 세포를 인큐베이션한다.
- 샘플을 얼음 위에서 45분 동안 인큐베이션하고 15분마다 간헐적으로 두드리십시오.
- 세포를 4°C에서 10분 동안 200 × g 에서 원심분리한다. 상층액을 버리십시오. 며칠 동안 보관해야하는 경우 실온에서 ~ 15 분 동안 4 % 파라 포름 알데히드로 세포를 고정하십시오. 그러나 유세포 분석기에서 갓 염색 된 샘플로부터 데이터를 수집하는 것이 가장 좋습니다.
- 세포를 200 μL의 FACS 염색 완충액 (PBS 중 2% FBS)에 재현탁시켰다. 유세포 분석기에서 데이터를 수집합니다.
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Representative Results
이러한 특정 모델을 이용한 숙주 면역 반응의 상세한 특성화는 이전 간행물 8,9에 제시되어 있다. 설명된 프로토콜의 몇 가지 대표적인 결과가 이 섹션에 설명되어 있습니다. 이 모델은 S의 전신 감염을 유도하는 것을 목표로 한다. 티피뮤륨은 박테리아 배양물을 복강내 주사하여 패혈증을 유도한다. 감염을 확인하기 위해, 패혈성 마우스로부터의 간 및 비장의 용해물을 SS 한천 플레이트에 퍼뜨렸고, 콜로니의 수를 계수하였다. 도 1에서, SS 한천 플레이트의 이미지는 패혈성 마우스의 간 및 비장에서의 장기 CFU 부담을 나타낸다. 균질화된 기관 용해물을 1 × 10-1의 희석액으로 확산시키고, 37°C에서 인큐베이션하였다. 블랙 색소 S. 티피뮤리움 콜로니는 37°C에서 ∼12시간 배양 후에 나타났다. 더욱이, 마우스의 감염시, 혈액 및 복막 세척으로부터의 배양물은 박테리아 세포에 대해 양성인 것으로 보고된다8. 이러한 결과는 복강내 주사된 박테리아 세포가 전신적으로 전파되고 내부 장기를 콜로니화한다는 것을 나타내었다. 플레이트의 일부는 콜로니를 강조하기 위해 확대 된 인셋으로 표시됩니다. 병원체는 성공적으로 체계적으로 보급되고 내부 장기를 식민지화했습니다.
도 2는 건강한 패혈성 및 패혈성 마우스로부터 분리된 혈청을 나타낸다. 패혈성 마우스에서 심장 구멍을 통해 수집 가능한 혈액의 부피는 일반적으로 100-200 μL이며, 이는 ~ 500 μL의 혈액을 얻을 수있는 건강한 마우스의 양보다 낮습니다. 그 결과, 패혈성 마우스 혈액으로부터 분리된 혈청 부피는 낮다. 이 현상은 패혈성 마우스에서 혈액의 응고가 증가했기 때문에 발생합니다. 더욱이, 패혈성 마우스로부터의 혈청은 뚜렷한 적색 착색을 나타내며, 이는 광범위한 용혈 8,9의 발생을 나타낸다.
도 3에 나타난 바와 같이, 복막 삼출물 세포의 유세포 기반 면역표현형은 건강한 패혈성 마우스의 복강에서의 호중구의 침윤을 평가하기 위해 수행되었다. 호중구가 세포 표면에서 LY6G 단백질을 발현함에 따라, FITC-태깅된 항-LY6G 항체를 호중구 세포 집단을 염색하는데 사용하였다. 이 이미지는 한 마리의 건강한 마우스와 두 마리의 감염된 마우스의 데이터를 나타냅니다. 데이터 수집 후, 세포를 FSC-A 대 SSC-A 플롯에서 단일체만을 포함하도록 게이팅하였다. 그런 다음, 히스토그램 플롯과 점도표가 그려졌다. 여기서, 패혈성 마우스는 복강에서 호중구의 증가된 침윤을 나타냈다.
그림 1: 장기 CFU 감염 후 시각화. 장기는 프로토콜에 기재된 바와 같이 균질화되었다. 용해물을 스프레더를 사용하여 SS 한천 플레이트 상에 확산시켰다. (A) 간 및 (B) 비장의 균질화된 용해물의 1 × 10-1 희석으로 확산된 플레이트의 이미지. 플레이트의 일부는 콜로니를 강조하기 위해 확대 된 인셋으로 표시됩니다. 삽입 배율 = 13x(면적). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 패혈성 마우스의 용혈 강화. 혈액을 마이크로원심분리 튜브에 수집하고, 실온에서 30분 동안 방해받지 않고 방치하였다. 혈전은 튜브를 냉장 원심분리기에서 10분 동안 2,000 × g 에서 원심분리하여 제거하였다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 복막 세척액에서 호중구 집단의 유세포 프로파일링. 복막 세척액은 감염 후 16시간 후에 수집되었다. 복막 세포를 FITC-태깅된 항-LY6G 항체로 염색하였다. 패혈성 마우스는 복강에서 호중구의 증가된 침윤을 보였다. 약어: FITC = 플루오레세인 이소티오시아네이트; LY6G = 림프구 항원 6 복합체 유전자좌 G6D; SSC-A = 측면 산란 영역. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
이 글은 살모넬라 티피뮤리움의 복강내 주사에 의해 심각한 형태의 세균성 패혈증을 유도하는 방법을 설명한다. 이 모델은 살모넬라 티피뮤리움이 세포내 병원체이고, 따라서, 병원성이 높고, 그람 음성 패혈증의 임상적으로 관련된 상태를 모방하기 때문에 다른 모델보다 유리하다. 이 모델에서 복막염 패혈증의 결과는 전신적이며, 감염 후 96 시간 이내에 100 % 사망률이 있습니다. 따라서, 이 모델은 패혈증을 감쇠시키는 데 있어서 염증성 및 치명적인 숙주 반응8 및 치료적 개입의 효과를 연구하는데 중요한 역할을 한다.
이 모델 시스템에서, 복강의 세포 조성은 접종된 병원체와 싸우기 위해 극적으로 변화한다. 많은 수의 LY6G + 호중구가 복강에 침투하여 F4 / 80 + 대식세포가 동시에 감소하여 대식세포 소멸 반응 (MDR)8,10이 발생합니다. 따라서, 이 모델은 패혈증 동안 면역 세포 조성물 및 기능의 동역학적 변화를 연구하는데 유용하며, 이는 여전히 미개척 영역이다. 살모넬라 균 티피무륨은 생쥐의 장기에 전신적으로 감염되고, 거주하며, 증식합니다. TNF-α, IL-6 및 IFN-γ과 같은 혈청 전염증성 사이토카인도 또한8을 증가시킨다. 전염증성 반응의 캐스케이드는 또한 혈액의 용혈 및 응고로 이어지며, 이는 감염된 마우스(10,11)의 해부시에 보여진다. 이러한 박테리아 부담에 대한 숙주 반응과 박테리아의 손상 효과 사이의 상호 작용은 특히 간에서 조직 구조의 변형, 기능 상실 및 조직 괴사로 이어진다.
더욱이, 실험실로부터의 이전 보고들은 이러한 효과가 산화질소 합성효소 2(NOS2)의 상향조절된 발현에 의해 조절되며, 이는 반응성 산소 종(ROS)의 증가와 전염증성 사이토카인의 더 높은 수준을 유도하여, 향상된 염증 반응으로 이어진다는 것을 보여주었다8. 이러한 마우스 패혈증 모델은 패혈증의 유도가 더 치명적인 효과와 함께 더 빠르기 때문에 다른 것보다 유리하다. 현재의 금-표준 CLP-패혈증 마우스 모델의 경우와 마찬가지로 마취된 마우스에서 수술을 수행하기 위해 기술적 전문 지식이 필요하지 않습니다. CLP-패혈증 모델에서, 마우스의 서브세트만이 패혈증을 일으키는 반면, 모든 마우스는 여기에 설명된 모델에서 패혈증을 일으킨다.
더욱이, LPS 유도된 내독소혈증 패혈증 모델과 비교하여, 이 모델은 그람 음성 단세균 패혈증에 대해 임상적으로 더 관련된다. 상기 모델은 또한 세포내 ROS, 전염증성 사이토카인 수준, 용혈 및 혈액 응고의 증가를 이해하는데 유용하며, 이들 모두는 패혈증 동안 일어난다. 산화질소 공여체 약물 DETA-NONOate의 사용은 이 모델8을 사용하는 패혈증을 가진 Nos2 녹아웃 마우스에서 생존 이점을 제공한다는 것이 보고되었다. 이것은이 모델이 패혈증을 치료하기위한 새로운 약물을 확인하는 데 사용될 수 있음을 시사합니다. 또한이 모델은 BSL-2 시설을 갖춘 모든 실험실에서 신속하게 채택 될 수 있습니다.
이 모델을 사용하는 동안 최적의 결과를 얻기 위해 박테리아 세포 건강 및 CFU 번호 수준에서 예방 조치를 취해야합니다. SS 한천 플레이트에서 갓 줄무늬가있는 살모넬라 균 식민지를 항상 사용해야합니다. 또한 언급된 CFU에 대응하는 분광광도계에서 OD 값을 발견함으로써 배양 준비 과정을 최적화하는 것이 좋다.
이 모델을 사용하는 단점은 마우스에서 패혈증의 효과가 감염 후 96 시간 이내에 치명적이라는 것입니다. 이것은 늦은 시점에서 숙주 면역 반응의 연구를 제한합니다. 그것은 살모넬라 티피뮤리움의보다 약독화 된 박테리아 균주를 사용하여 극복 할 수 있습니다.
패혈증을 앓고 있는 인간 환자와 인간 패혈증을 모방하려는 마우스 모델 사이에는 차이가 있다. 예를 들어, 환자는 패혈증을 개발하는 데 더 오래 걸리고 지원 중재 및 치료제를 사용합니다. 그러나 마우스 모델의 패혈증은 훨씬 빨리 진행되며지지 개입은 수행되지 않습니다4. 그러나 인간과 생쥐의 패혈증 사이에는 몇 가지 유사점이 있으며, 패혈증 환자는 임상 환경에서 전염증성 사이토 카인, 혈액 응고 및 용혈의 높은 수준을 보여줍니다. 이들 모두는 패혈증의 마우스 모델에서 모방된다. 따라서이 모델의 일부 판독은 임상 시나리오와 관련이 있지만 직접적인 상관 관계가 바람직하지 않을 수 있습니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.
Acknowledgments
우리는 연구를 위해 생쥐를 공급해 주신 중앙 동물 시설, IISc에 감사드립니다. 이 연구는 인도 정부의 생명 공학 및 과학 및 공학 연구위원회에서 DpN에 대한 보조금으로 자금을 지원했습니다. DBT-IISc 프로그램 및 DST-FIST 보조금의 인프라 지원은 크게 인정됩니다. DpN 연구소의 이전 및 현재 구성원 모두에게 도움을 주셔서 감사합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Consumables | |||
| 1 mL Sterile Syringe with 26 G needle | Beckton Dickinson, Singapore | 303060 | |
| 1.5 mL Microcentrifuge Tube | Tarsons, USA | 500010 | |
| 10 mL Sterile Syringe with 21 G needle | Beckton Dickinson, Spain | 307758 | |
| 50 mL Conical Flask | Tarsons, USA | 441150 | |
| 50 mL Graduated Centrifuge Tube | Tarsons, USA | 546041 | |
| 50 mL Graduated Centrifuge Tube | Tarsons, USA | 546021 | |
| Cell spreader | VWR, USA | VWRU60828-680 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | HiMedia, Mumbai, India | TS1006 | |
| Ethanol | Merck | 100983 | |
| FcR blocker | BD Biosciences | 553142 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10270-106 | |
| FITC Rat anti-mouse Ly6G (Clone 1A8) | BD Pharmingen | 551460 | |
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G9012 | |
| Hand based Homogenizer | - | - | |
| Hemocytometer (Neubauer counting chamber) | Rohem, India | I.S. 10269 | |
| Luria Bertani Broth | HiMedia, Mumbai, India | M1245 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Petriplates | Tarsons, USA | 460091 | |
| RPMI | Himedia, Mumbai, India | AT060-10X1L | |
| Salmonella-Shigella Agar | HiMedia, Mumbai, India | M108 | |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S2002 | |
| Equipments | |||
| Centrifuge | Kubota | ||
| Flow cytometer | BD FACSverse | ||
| Incubator | N-biotek | ||
| Spectrophotometer | Shimadzu | ||
| Weighing machine | Sartorius |
References
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- Rudd, K. E., et al. regional, and national sepsis incidence and mortality, 1990-2017: Analysis for the Global Burden of Disease Study. The Lancet. 395 (10219), 200-211 (2020).
- Vincent, J. L., et al. International study of the prevalence and outcomes of infection in intensive care units. JAMA. 302 (21), 2323-2329 (2009).
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