Summary
Un modello animale di ipoparatiroidismo acquisito (HypoPT) è fondamentale per comprendere come l'HypoPT influisce sull'omeostasi degli ioni minerali e per verificare l'efficacia di nuovi trattamenti. Qui, viene presentata una tecnica per generare un modello di ratto di ipoparatiroidismo acquisito (AHypoPT) mediante paratiroidectomia (PTX) utilizzando nanoparticelle di carbonio.
Abstract
L'ipoparatiroidismo (HypoPT) è una malattia rara che coinvolge le ghiandole paratiroidi ed è caratterizzata da una ridotta secrezione o potenza dell'ormone paratiroideo (PTH), che porta ad alti livelli sierici di fosforo e bassi livelli sierici di calcio. HypoPT più comunemente deriva da danni accidentali alle ghiandole o la loro rimozione durante la tiroide o altri interventi chirurgici del collo anteriore. La chirurgia paratiroidea/tiroidea è diventata più comune negli ultimi anni, con un corrispondente aumento dell'insorgenza di HypoPT come complicanza postoperatoria. C'è una necessità critica di un modello animale HypoPT per comprendere meglio i meccanismi alla base degli effetti di HypoPT sull'omeostasi degli ioni minerali e per verificare l'efficacia terapeutica di nuovi trattamenti. Qui, viene riportata una tecnica per creare HypoPT acquisita nei ratti maschi eseguendo la paratiroidectomia (PTX) utilizzando nanoparticelle di carbonio. Il modello di ratto mostra grandi promesse rispetto ai modelli murini di ipoparatiroidismo. È importante sottolineare che la regione di legame del recettore PTH umano ha una somiglianza di sequenza dell'84,2% con quella del ratto, che è superiore alla somiglianza del 73,7% condivisa con i topi. Inoltre, gli effetti degli estrogeni, che possono influenzare la via di segnalazione del recettore PTH/PTHrP, non sono stati completamente studiati nei ratti maschi. Le nanoparticelle di carbonio sono traccianti linfatici che colorano i linfonodi tiroidei neri senza influire sulla loro funzione, ma non macchiano le ghiandole paratiroidi, il che le rende facili da identificare e rimuovere. In questo studio, i livelli sierici di PTH non erano rilevabili dopo PTX e ciò ha provocato ipocalcemia e iperfosfatemia significative. Pertanto, lo stato clinico dell'HypoPT postoperatorio può essere notevolmente rappresentato nel modello di ratto. Il PTX assistito da nanoparticelle di carbonio può quindi servire come modello straordinariamente efficace e facilmente implementabile per studiare la patogenesi, il trattamento e la prognosi dell'HypoPT.
Introduction
L'ormone paratiroideo (PTH) è secreto dalle ghiandole paratiroidi. È un importante modulatore dell'equilibrio del calcio, mantiene il metabolismo del fosfato e partecipa al turnover osseo 1,2. L'ipoparatiroidismo (HypoPT) si manifesta come una diminuzione della secrezione o perdita funzionale di PTH. È una malattia endocrina rara, con una prevalenza di circa 9-37 per 100.000 anni-persona 3,4,5. L'ipoPT è caratterizzata da una diminuzione dei livelli sierici di PTH e calcio accompagnata da un aumento del fosforo sierico 6,7. L'ipoPT è classificata in base alla sua causa: ipoparatiroidismo acquisito (AHypoPT) o ipoparatiroidismo idiopatico (IHypoPT)8. AHypoPT si riscontra più comunemente nella pratica clinica; circa il 75% dei casi di AHypoPT sono causati da resezione o lesioni accidentali delle ghiandole paratiroidi durante la chirurgia della tiroide o altri interventi chirurgici alla testa e al collo. Altre cause includono la radioterapia e la chemioterapia per i tumori della testa e del collo e la tossicità dei farmaci 1,8. I metodi diagnostici aggiornati e un aumento dello screening per le malattie associate alla ghiandola tiroidea hanno aumentato il numero di operazioni chirurgiche della ghiandola tiroidea. Ciò ha portato ad un corrispondente aumento delle complicanze della ghiandola paratiroidea correlate 9,10.
Sono necessari modelli animali facilmente stabiliti con caratteristiche stabili per studiare meglio AHypoPT e verificare l'efficacia terapeutica di nuovi trattamenti. La paratiroidectomia (PTX) eseguita su ratti e topi è stata riportata in studi precedenti 6,11; Tuttavia, a causa delle dimensioni estremamente ridotte delle ghiandole paratiroidi e della variabilità nella loro distribuzione anatomica, il tasso di successo è relativamente basso nella pratica. Pertanto, la tiro-paratiroidectomia (TPTX) (cioè la rimozione totale della tiroide e delle ghiandole paratiroidi) viene solitamente eseguita per garantire la resezione delle ghiandole paratiroidi12. Tuttavia, i bassi livelli di tiroxina risultanti possono complicare gli studi con questo modello animale13. I modelli HypoPT stabiliti con altri metodi, come la stimolazione dei farmaci e l'editing genico, non possono rappresentare correttamente la patogenesi AHypoPT più comune. Il nostro gruppo ha precedentemente utilizzato modelli murini knockout per etichettare le ghiandole paratiroidi e consentire la rimozione delle ghiandole paratiroidi senza danneggiare le ghiandole tiroidee e le strutture anatomiche circostanti14,15. Tuttavia, questo metodo utilizza modelli murini transgenici, che richiedono un tempo di sviluppo più lungo a causa dei requisiti di accoppiamento e riproduzione.
Pertanto, abbiamo mirato a stabilire un modello facilmente generabile di AHypoPT. Questo studio descrive un modello di ratto per PTX utilizzando l'etichettatura delle nanoparticelle di carbonio. Una sospensione di nanoparticelle di carbonio di 50 mg / ml, che è comunemente usata nella chirurgia della tiroide, si distribuisce uniformemente nelle ghiandole tiroidee dopo l'iniezione locale16. Le ghiandole tiroidee diventano nere, ma le ghiandole paratiroidi sono lasciate senza macchia17, distinguendo così chiaramente le ghiandole paratiroidi dalle ghiandole tiroidee e consentendo l'esecuzione del PTX senza influenzare le ghiandole tiroidee. Questo metodo è adatto a ratti di diverse età. L'iniezione della sospensione di nanoparticelle di carbonio è sicura e ha un effetto trascurabile sulla funzione tiroidea18. Il modello di ratto PTX marcato con nanoparticelle di carbonio generato in questo studio ha mostrato fenotipi significativi di ipocalcemia e iperfosfatemia durante il periodo di osservazione di 4 settimane. Pertanto, questo modello AHypoPT è facile da stabilire e ha un fenotipo riproducibile.
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Protocol
Questo studio è stato approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso lo State Key Laboratory of Oral Diseases, Sichuan University. Il permesso è stato ottenuto dalle agenzie locali competenti prima dell'esperimento. Per il presente studio sono stati utilizzati otto ratti maschi di Sprague-Dawley (SD) di 8-10 settimane, con un peso medio di 200-250 g. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Cibo e acqua sono stati forniti ad libitum durante tutto il periodo sperimentale.
1. Preparazione preoperatoria per la generazione di ratti PTX assistiti da nanoparticelle di carbonio
- Anestetizzare i ratti di 8-10 settimane usando un'inalazione di isoflurano al 2,0%-2,5%, seguita da un'iniezione intraperitoneale (i.p.) di tribromoetanolo a 10 ml/kg di peso corporeo. Garantire una sufficiente profondità dell'anestesia testando l'assenza del riflesso luminoso pupillare. Utilizzare unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia.
NOTA: I ratti che hanno 8-10 settimane sono riconosciuti come ratti adulti. Tuttavia, questo metodo di modellazione può essere utilizzato su ratti di 7 giorni. - Preparare i ratti SD anestetizzati per un intervento chirurgico radendo la pelliccia della regione ventrale del collo in posizione supina. Disinfettare l'area operatoria con batuffoli di cotone povidone-iodio (vedi Tabella dei materiali).
- Coprire l'animale con teli chirurgici (vedi Tabella dei materiali) ed esporre la regione chirurgica, con l'obiettivo di ridurre al minimo la contaminazione microbica.
2. Paratiroidectomia (PTX)
- Inizia dal punto medio tra le due orecchie e taglia un'incisione di 2 cm longitudinalmente verso la coda usando un bisturi chirurgico. Sezionare successivamente la fascia e lo strato di grasso con una pinza affilata, curva e seghettata.
- Separare i muscoli paratracheali ed esporre la trachea usando una pinza relativamente smussata al microscopio stereo con un ingrandimento 4x-5x.
- Individuare i lobi sinistro e destro delle ghiandole tiroidee a forma di farfalla sul lato della trachea.
- Iniettare 1 μL della sospensione di nanoparticelle di carbonio (vedere Tabella dei materiali) sotto la membrana delle ghiandole tiroidee usando una siringa da 10 μL con un ago smussato da 30 G. Dopo 5 minuti, irrigare la regione operativa con soluzione salina per pulire la sospensione di nanoparticelle di carbonio extra che copre la membrana della ghiandola tiroidea.
NOTA: Il punto di iniezione raccomandato è la porzione mesiale del lobo della ghiandola tiroidea, che ha meno vasi sanguigni. Una sospensione di nanoparticelle di carbonio è comunemente usata nella chirurgia della tiroide grazie alla sua capacità di rilevare i linfonodi. Colorare le ghiandole tiroidee e lasciare le ghiandole paratiroidi non colorate facilita l'identificazione di quest'ultimo. - Controllare per assicurarsi che le ghiandole tiroidee diventino nere mentre le ghiandole paratiroidi rimangono non colorate in ~ 5 min. Osservare le ghiandole paratiroidi evidenziate sotto la luce ordinaria usando la luce di un microscopio stereo o una lampada da tavolo.
NOTA: Tipicamente, i roditori hanno due ghiandole paratiroidi a forma di goccia situate sulle superfici sinistra e destra delle ghiandole tiroidee. Occasionalmente, ulteriori ghiandole paratiroidi possono essere situate più lontano. - Tagliare con precisione le ghiandole paratiroidi non macchiate con pinze e forbici da microchirurgia. Utilizzare batuffoli di cotone sterili per l'emostasi o una spugna di gelatina se c'è più sanguinamento.
- Chiudere i muscoli, gli strati di grasso e la pelle, strato per strato, con una sutura orizzontale del materasso interrotta utilizzando 6-0 punti di sutura poliglactina 910 (vedi Tabella dei materiali).
- Per il gruppo fittizio, eseguire tutte le fasi della preparazione preoperatoria e PTX tranne il passaggio 2.6. Anestetizzare i ratti e separare i tessuti sopra la trachea. Individuare le ghiandole paratiroidi ma non rimuoverle. Condurre il recupero postoperatorio e l'osservazione insieme ai ratti del gruppo PTX.
3. Recupero postoperatorio e osservazione
- Dopo l'intervento chirurgico, posizionare i ratti su una coperta elettrica termostatica (37 ° C) per mantenere la temperatura corporea. Iniettare buprenorfina cloridrato 0,01 mg/kg per via sottocutanea (s.c) ogni 12 ore come analgesia postoperatoria. Trasferisci i ratti in una gabbia sterile quando iniziano a muoversi e cercano di gattonare.
- Osservare attentamente i ratti postoperatoriamente per 2 ore. Riportare i ratti nella stanza di allevamento, osservarli regolarmente e registrare il loro stato.
- Prelevare 10 μL di sangue dalla vena della coda 7 giorni dopo l'intervento. Misurare il siero Ca2+, il Pi sierico e il PTH sierico utilizzando kit commerciali appropriati (vedere la tabella dei materiali). Una paratiroidectomia riuscita produce una riduzione della SD sierica ionizzata Ca2+ livello 2 inferiore a quella dei ratti operati (9,00 mmol/L, n = 16).
NOTA: Per l'analisi statistica è stato utilizzato un software di statistica e grafici (vedi Tabella dei materiali). Il t-test di uno studente è stato utilizzato per confrontare i parametri sierici e urinari tra i gruppi sham e PTX. p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Il siero e urinario Ca2+ e Pi e l'urea sierica e la creatinina sono stati misurati con kit commerciali secondo le istruzioni dei produttori (vedi Tabella dei materiali). Il C-telopeptide sierico di collagene di tipo I e osteocalcina è stato misurato con kit ELISA disponibili in commercio (vedi Tabella dei materiali).
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Representative Results
Le posizioni e il numero di ghiandole paratiroidi sono stati inizialmente osservati nei ratti al microscopio a dissezione. Prima dell'iniezione di nanoparticelle di carbonio, le ghiandole tiroidee erano di un colore rosso traslucido e le ghiandole paratiroidi erano difficilmente distinguibili al microscopio (Figura 1A). Dopo l'iniezione di nanoparticelle, le ghiandole tiroidee sono state colorate di nero, mentre le ghiandole paratiroidi sono rimaste non colorate (Figura 1B). L'attenta dissezione delle ghiandole paratiroidi di colore chiaro ha lasciato intatte le ghiandole tiroidee (Figura 1C). Generalmente, le ghiandole paratiroidi erano distribuite sui bordi laterali o posteriori delle ghiandole tiroidee.
Figura 1: L'aspetto della tiroide e delle ghiandole paratiroidi durante le procedure chirurgiche. (A) Le ghiandole tiroidee (linea tratteggiata bianca) si trovano lateralmente alla trachea. (B,C) Le ghiandole tiroidee hanno mostrato una colorazione nera (linea tratteggiata bianca) dopo l'iniezione delle nanoparticelle di carbonio, mentre le ghiandole paratiroidi (linea tratteggiata gialla) hanno mostrato un colore chiaro. Barre della scala = 2 mm. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Il tempo di funzionamento dalla preparazione preoperatoria al completamento del PTX è stato di circa 20 minuti. Il tasso di sopravvivenza a 4 settimane dei ratti postoperatori è stato del 90,9% (60/66). I ratti PTX sono stati osservati per essere gobbo 1 settimana dopo l'intervento chirurgico. Un gruppo di controllo fittizio è stato istituito simultaneamente eseguendo tutti i passaggi del protocollo ad eccezione del passaggio 2.6. Tutti i ratti PTX marcati con nanoparticelle di carbonio sopravvissuti avevano un livello medio medio di Ca2+ ionizzato, che era inferiore di 2 SD rispetto a quello del gruppo finto. Il fenotipo dell'ipoparatiroidismo nei ratti PTX marcati con nanoparticelle di carbonio, evidenziato da riduzione del calcio sierico, fosfato sierico elevato e PTH non rilevato, è rimasto stabile durante il periodo di monitoraggio di 4 settimane.
A 7 giorni dopo l'intervento, i livelli sierici di Ca 2+ e PTH erano significativamente ridotti nei ratti PTX rispetto al gruppo sham (Ca2+ = 4,97 mmol / L ± 0,99 mmol / L vs 8,98 mmol / L ± 0,58 mmol / L, p < 0,05; PTH = 13,13 pg/mL ± 6,58 v pg/mL s. 313,06 pg/mL ± 75,24 pg/mL, p < 0,05). Il Pi sierico è aumentato significativamente dopo l'intervento chirurgico PTX (Pi = 13,90 mmol / L ± 1,77 mmol / L vs 7,46 mmol / L ± 1,28 mmol / L). I livelli sierici di urea e creatinina erano comparabili tra i gruppi sham e PTX 7 giorni dopo l'intervento chirurgico PTX (urea = 8,71 mmol / L ± 0,81 mmol / L vs 8,84 mmol / L ± 0,89 mmol / L, p > 0,05; creatinina = 49,03 μmol / L ± 13,14 μmol / L vs 53,15 μmol / L ± 18,28 μmol / L, p > 0,05). A 14 giorni dopo l'intervento PTX, i livelli urinari di Ca 2+ e Pi erano significativamente ridotti (Ca 2+ = 2,33 mmol / L ± 0,53 mmol / L vs 7,18 mmol / L ±4,27 mmol / L, p < 0,05; Pi = 2,40 mmol/L ± 1,90 mmol/L vs. 5,29 mmol/L ± 1,52 mmol/L, p < 0,05) (Figura 2).
Figura 2: Livelli sierici di Ca 2+, Pi, PTH, urea e creatinina e livelli urinari di Ca2+ e Pi dopo paratiroidectomia assistita da nanoparticelle di carbonio. (A) I ratti PTX hanno mostrato ipocalcemia e iperfosfatemia stabili durante il periodo di osservazione di 4 settimane (N = 4). (B) Il PTH sierico non era rilevabile nei ratti PTX 7 giorni dopo l'operazione (N = 8). (C,D) I livelli sierici di urea e creatinina erano comparabili tra i gruppi sham e PTX 7 giorni dopo l'intervento chirurgico (N = 5). (E,F) I livelli urinari di Ca2+ e Pi sono stati significativamente ridotti 14 giorni dopo l'intervento chirurgico PTX (N = 8). Le barre di errore indicano la deviazione standard. Abbreviazioni: PTX = paratiroidectomia; Ca++ = calcio ionizzato nel siero; PTH = ormone paratiroideo; Pi = fosforo ionizzato nel siero. Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
Non ci sono state differenze significative nel peso corporeo tra i gruppi PTX e sham nei gruppi postoperatorio giorno 7 (POD7), POD14 e POD28 (peso corporeo su POD0 = 256,40 g ± 4,76 g vs 252,56 g ± 6,69 g, p > 0,05; peso corporeo su POD7 = 266,00 g ± 6,93 g vs 257,44 g ± 30,56 g, p > 0,05; peso corporeo su POD14 = 294,80 g ± 25,90 g contro 288,22 g ± 37,35 g, p > 0,05; peso corporeo su POD28 = 327,75 g ± 24,82 g vs 324,17 g ± 57,97 g, p > 0,05). Inoltre, il C-telopeptide sierico del collagene di tipo I (CTX-1) è stato statisticamente diminuito su POD28 (CTX-1 = 82,03 pg/mL ± 8,98 pg/mL vs. 100,33 pg/mL ± 6,36 pg/mL, p < 0,05). L'osteocalcina sierica non ha mostrato differenze significative con POD28 (osteocalcina = 913,66 pg/mL ± 378,03 pg/mL vs. 1066,17 pg/mL ± 549,80 pg/mL, p > 0,05) (Figura 3).
Figura 3: Peso corporeo, C-telopeptide ematico del collagene di tipo I e livelli di osteocalcina dopo paratiroidectomia assistita da nanoparticelle di carbonio. (A) Non ci sono state differenze significative nel peso corporeo tra i gruppi PTX e sham su POD7, POD14 e POD28 (N = 14). (B) I ratti PTX hanno mostrato una diminuzione statistica del C-telopeptide sierico del collagene di tipo I (N = 4). (C) Non ci sono state differenze significative nei livelli sierici di osteocalcina (N = 5). Le barre di errore indicano la deviazione standard. Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
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Discussion
I rapporti epidemiologici indicano che l'individuazione di malattie della tiroide è aumentata in modo significativo e il numero di interventi chirurgici correlati eseguiti è aumentato di conseguenza19,20. Il tasso di incidenza dell'ipoparatiroidismo postchirurgico è di circa il 7,6%8,21, mentre l'aumentata morbilità dell'ipoparatiroidismo acquisito ha fatto sì che questa rara malattia ottenesse una maggiore attenzione da parte della ricerca. È quindi particolarmente importante stabilire un modello animale adatto per studiare la patogenesi della malattia, nonché per testare i risultati di nuovi trattamenti terapeutici. Tuttavia, al momento, ci sono modelli animali limitati disponibili. Inoltre, il tasso di successo, il tasso di sopravvivenza e la difficoltà delle procedure chirurgiche nella produzione di tali modelli rimangono problematici. Il nostro gruppo ha precedentemente riportato due modelli HypoPT nei topi. Nei topi PTHcre + / Rosa-mTmG, le ghiandole paratiroidi sono state marcate in modo fluorescente per aiutare a sezionare accuratamente le ghiandole paratiroidi, e questo metodo è stato anche utile per trovare ghiandole paratiroidi con distribuzione anatomica anormale per migliorare il tasso di successo della chirurgia14. Un altro approccio di modellazione ha utilizzato topi transgenici, in cui le cellule della ghiandola paratiroidea potrebbero essere prese di mira dalla tossina difterica. Le ghiandole paratiroidi potrebbero quindi essere distrutte dalla somministrazione sistemica della tossina difterica senza richiedere un intervento chirurgico14,15. Tuttavia, i metodi sopra menzionati richiedono un ampio incrocio di topi transgenici, con conseguenti requisiti di tempo e costi relativamente elevati. Inoltre, la somministrazione sistemica della tossina difterica può avere effetti collaterali diffusi. Attualmente, la tiro-paratiroidectomia (TPTX) è la procedura usuale eseguita per garantire la resezione delle ghiandole paratiroidi12. Sebbene la tecnica sia facilmente eseguibile e abbia un alto tasso di successo, il danno alle ghiandole tiroidee non può essere ignorato. Il potenziale impatto della lesione o della distruzione delle ghiandole tiroidee sui risultati sperimentali potrebbe essere significativo, il che significa che questa è una delle principali limitazioni di tutti gli studi in questo campo21,22.
Nel presente studio, una sospensione di nanoparticelle di carbonio, comunemente usata per visualizzare le ghiandole tiroidee nella pratica clinica, è stata iniettata per migliorare la chirurgia PTX. Questo metodo è sicuro, veloce e altamente fattibile. Può etichettare efficacemente le ghiandole tiroidee con una macchia nera e lasciare le ghiandole paratiroidi non macchiate, il che consente l'identificazione precisa e la dissezione delle ghiandole paratiroidi evitando lesioni alle ghiandole tiroidee. Questo metodo di etichettatura ha lo stesso effetto di quello ottenuto utilizzando l'etichettatura fluorescente di topi transgenici, ma non è limitato dal genotipo. Inoltre, il tempo di intervento chirurgico del PTX assistito da nanoparticelle di carbonio è di circa 20 minuti, il che consente di risparmiare tempo rispetto all'intervento chirurgico di 2 ore richiesto per l'identificazione a fluorescenza 5-ALA23. Inoltre, grazie alla biosicurezza delle nanoparticelle di carbonio24, questo metodo di modellazione può essere utilizzato su ratti di 7 giorni. Un passo critico da notare durante l'intervento chirurgico è che il dosaggio della sospensione di nanoparticelle di carbonio può essere regolato in base al peso dei ratti. Il volume di sospensione di nanoparticelle di carbonio utilizzato in questo studio (1 μL) è sufficiente per la chirurgia su ratti adulti, anche se una certa quantità viene persa nella siringa. La distribuzione di tutte le ghiandole paratiroidi è difficile da identificare per i principianti e si raccomanda molta pratica.
L'attuale studio ha alcune limitazioni. Ad esempio, è impossibile identificare le ghiandole paratiroidi remote non collegate alla tiroide usando nanoparticelle di carbonio. Se i parametri sierici rimangono invariati dopo l'intervento chirurgico, può indicare che alcune ghiandole paratiroidi remote erano presenti e non rimosse. Il periodo di colorazione richiesto per la differenziazione e l'identificazione ottimali delle ghiandole paratiroidi non è stato misurato; Tuttavia, le ghiandole tiroidee sono state colorate correttamente entro 5 minuti dalla somministrazione di nanoparticelle e hanno mantenuto la macchia durante l'intera procedura chirurgica. Il funzionamento delle ghiandole tiroidee durante il periodo di follow-up non è stato registrato in questo studio. Tuttavia, nel nostro studio precedente, che prevedeva l'utilizzo di un modello murino transgenico per identificare e rimuovere le ghiandole paratiroidi, la funzione della ghiandola tiroidea ha dimostrato di essere preservata15. Anche la tolleranza dei ratti alle nanoparticelle di carbonio non è stata testata in questo studio; Tuttavia, queste nanoparticelle sono state commercialmente utilizzate come prodotti farmaceutici negli interventi clinici16. Generalmente, questo metodo consente ai ricercatori di scegliere un animale con un genotipo desiderato e un punto temporale operativo. In definitiva, questo approccio dovrebbe fornire utili modelli di ratto per l'ipoparatiroidismo acquisito.
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Disclosures
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato supportato dalla sovvenzione NSFC 81800928, dal finanziamento della ricerca della West China School / Hospital of Stomatology Sichuan University (No. RCDWJS2021-1) e dalla sovvenzione di finanziamento aperto del laboratorio chiave statale delle malattie orali SKLOD-R013.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Sodium Chloride Solution | Kelun Co. Sichuan, China | ||
| 10 µL 30G NanoFil Syringe | WPI | ||
| 6-0 polyglactin 910 suture with needle | Ethicon, Inc | J510G | |
| Calcium LiquiColor test | EKF | 0155-225 | For Ca2+ analysis |
| Carbon Nanoparticles Suspension Injection | Lummy, Chongqing, China | H20073246 | 1 mL : 50 mg |
| Creatinine (Cr) Assay kit ( sarcosine oxidase ) | Jiancheng, Nanjing, China | C011-2-1 | For creatinine analysis |
| Disposable Scalpel | Shinva, China | ||
| Dumstar Biology forceps | Shinva, China | ||
| Micro Dissecting Spring Scissors | Shinva, China | ||
| MicroVue Rat intact PTH ELISA | Immunotopics | 30-2531 | For the measurement of PTH in rat serum |
| Needle Holder | Shinva, China | ||
| Phosphorus Liqui-UV test | EKF | 0830-125 | For Pi analysis |
| Ply gauze | Weian Co. Henan, China | ||
| Povidone-Iodine | Yongan pharmaceutical Co.Ltd. Chengdu, China | ||
| Prism 9.0 (statistics and graphing software) | GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA | https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/ | |
| Rat C-telopeptide of type I collagen (CTX-I) ELISA Kit | CUSABIO, Wuhan, China | CSB-E12776r | For CTX-I analysis |
| Rat Osteocalcin/Bone Gla Protein (OT/BGP) ELISA Kit | CUSABIO, Wuhan, China | CSB-E05129r | For osteocalcin analysis |
| Safety Single Edge Razor Blades | American Safety Razor Company | 66-0089 | |
| Sprague-Dawley Rats | 8 to 10 weeks old | ||
| Surgical Incise Drapes | Liangyou Co. Sichuan, China | ||
| Urea Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | C013-2-1 | For urea analysis |
References
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