يقدم هذا البروتوكول نظام فحص حيوي محسن للأوراق المنفصلة لتقييم فعالية الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF) ضد من الخردل (Lipaphis erysimi (Kalt.)) ، وهي حشرة بارثينوجينية. تحدد الطريقة عملية جمع البيانات أثناء تجارب طبق بتري ، مما يمكن الباحثين من قياس ضراوة EPF باستمرار ضد حشرات المن الخردل والحشرات البارثينوجينية الأخرى.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم تأثير مبيد الحشرات للفطريات المسببة للأمراض الحشرية ضد الحشرات العذرية ، من الخردل ، Lipaphis erysimi (Kalt.)
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
من الخردل (L. erysimi) هو آفة تصيب العديد من المحاصيل الصليبية وتنقل فيروسات النبات. لتحقيق إدارة الآفات الصديقة للبيئة ، تعد الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF) عوامل محتملة لمكافحة الميكروبات للسيطرة على هذه الآفة. لذلك ، فإن فحص الفوعة لعزلات EPF تحت ظروف طبق بتري ضروري قبل التطبيق الميداني. ومع ذلك ، فإن من الخردل هو حشرة بارثينوجينية ، مما يجعل من الصعب تسجيل البيانات أثناء تجارب طبق بتري. تم تطوير نظام معدل للمقايسات الحيوية للأوراق المنفصلة لمعالجة هذه المشكلة ، باستخدام بخاخ دقيق لتلقيح الكونيديا على حشرات المن ومنع الغرق عن طريق تسهيل تجفيف الهواء بعد تعليق البوغ. حافظ النظام على رطوبة نسبية عالية طوال فترة المراقبة ، وظل قرص الأوراق طازجا لأكثر من عشرة أيام ، مما سمح بالتكاثر الجيني لحشرات المن. لمنع تراكم النسل ، تم تنفيذ عملية إزالة يومية باستخدام فرشاة الطلاء. يوضح هذا البروتوكول نظاما مستقرا لتقييم ضراوة عزلات EPF ضد حشرات المن الخردل أو حشرات المن الأخرى ، مما يتيح اختيار العزلات المحتملة لمكافحة المن.
المقدمة
من الخردل (L. erysimi) هو آفة سيئة السمعة تصيب مجموعة متنوعة من المحاصيل الصليبية ، مما يتسبب في خسائر اقتصادية كبيرة1. في حين تمت التوصية بالعديد من المبيدات الحشرية المنهجية لمكافحة تفشي حشرات المن ، فإن الاستخدام المتكرر لهذه المبيدات الحشرية يثير مخاوف بشأن مقاومة مبيدات الآفات 2,3. لذلك ، من حيث إدارة الآفات الصديقة للبيئة ، يمكن أن تكون الفطريات المسببة للأمراض الحشرية (EPF) بمثابة استراتيجية مكافحة بديلة مناسبة. EPF هو أحد مسببات الأمراض الحشرية التي لديها القدرة على إصابة المضيفين عن طريق اختراق بشرتهم ، مما يجعلها عاملا قويا للسيطرة على حشرات المن والحشرات الأخرى الماص....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يظهر المخطط الانسيابي الكامل في الشكل 1.
1. جمع وصيانة الخردل المن
- مجموعة من حشرات الخردل
- اقلب الأوراق وتحقق بصريا من إصابة حشرات الخردل على المحاصيل الصليبية في الحقل.
- تسجيل معلومات موقع أخذ العينات (أي GPS) والنبات (النباتات) المضيفة، وتأكيد تاريخ استخدامات المبيدات الحشرية مع المزارعين.
- استخدم شفاط الحشرات أو فرشاة الطلاء الدقيقة (انظر جدول المواد) لجمع حوالي 50 حشرة من الخردل في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل من المحاصيل الصليبية في الحقل وإحضار العينة إلى المختبر في غضون 3 ساعات.
- قم بإعداد طبق بتري مؤقت للصيانة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح المخطط الانسيابي المقدم الحالة المستقرة لحشرات من الخردل من الجمع الميداني إلى فحص الفوعة. ضمنت صيانة حشرات المن من الجمع الميداني زيادة مستقرة في مستعمرات المن مع إمدادات غذائية كافية. تم تأكيد حشرات المن التي تم جمعها ميدانيا على أنها حشرات من الخردل من خلال استخدام العلامات الجزيئية ، بما في ذلك حجم PCR amplicon وتسلسل LeCO1. كشف فحص الفوعة ، الذي تم إجراؤه باستخدام طريقة الأوراق المنفصلة ، عن معدل بقاء ثابت لحشرات من الخردل ، حيث أظهرت المجموعة الضابطة معدل بقاء بنسبة 85٪ (الشكل 4)........
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
كثيرا ما تنتشر أنواع متعددة من المن ، بما في ذلك من الخردل (L. erysimi) ومن الملفوف (Brevicoryne brassicae)26. تم الإبلاغ عن كلا النوعين في تايوان27 ، ومن الممكن أن يتعايشا في موقع التجميع. للتمييز بين أنواع المن وثيقة الصلة ، استخدمت هذه الدراسة تقنية تحديد الهوية الجزيئية باستخدام مجموعة أولية متعددةالإرسال 21. من خلال تصميم علامة جزيئية من جزء جين COI من الخردل ، نجحنا في تحديد من الخردل ، وبالتالي تأكيد موثوقية العلامة الجزيئية .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح في هذا العمل.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من قبل 109-2313-B-005 -048 -MY3 من وزارة العلوم والتكنولوجيا (MOST).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 و مو ؛ L حلقة تلقيح | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 نقطة أساس سلم الحمض النووي III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 مل أنبوب الطرد المركزي | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 سم طبق بتري | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| شفاط حشرات 6 مم | MegaView Science | BA6001 | |
| ورق ترشيح 70 مم رقم 1 | تويو روشي كايشا | ||
| 70٪ إيثانول | |||
| 9 سم طبق بتري | ألفا بلس ساینتيف | 16001 | |
| أجار | بيومان العلمي | AGR001.1 | علم الأحياء الدقيقة |
| الصف Agarose | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Safe DNA Gel Buffer | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Gel / PCR Kit | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Genomic DNA Isolation | Kit Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| مقياس الدم | بول مارينفيلد | 640030 | |
| أوراق كوماتسونا ( Brassica rapa< / em> var. perviridis< / em>) | مزرعة تاي تشنغ | 1-010-300410 | |
| بخاخ | |||
| MiniAmp Thermal Cycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| من الخردل (Lipaphis erysimi< / em>) فرشاة | |||
| الطلاء | شركة فرشاة تيان تشنغ | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| مدقة بيليه | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud مرق سكر العنب | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS إحصائيات | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
المراجع
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
