Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

النشاط المساعد للمتفطرة نظيرة السل في تعزيز مناعة المستضدات الذاتية أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي

Published: May 12, 2023 doi: 10.3791/65422
Automatic Translation
1,2, 1, 1, 1, 1,3
1Department of Neurology, Juntendo University, 2Biomedical Research Core Facilities, Juntendo University, 3Neurodegenerative Disorders Collaborative laboratory, RIKEN Center for Brain Science

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا بديلا للحث بنشاط على التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في الفئران C57BL / 6 ، باستخدام البروتين السكري قليل التغصن قليل التغصن المناعي (MOG) 35-55 المعلق في مساعد فرويند غير المكتمل الذي يحتوي على المتفطرة الطيرية المقتولة بالحرارة paratuberculosis.

Abstract

يتطلب التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) الناجم عن البروتين السكري قليل التغصن المايلين (MOG) التحصين بواسطة ببتيد MOG المستحلب في مساعد فرويند الكامل (CFA) الذي يحتوي على المتفطرة السلية المعطلة. تعمل المكونات المستضدية للمتفطرة على تنشيط الخلايا المتغصنة لتحفيز الخلايا التائية لإنتاج السيتوكينات التي تعزز استجابة Th1 عبر مستقبلات تشبه الرسوم. لذلك ، ترتبط كمية وأنواع المتفطرات الموجودة خلال التحدي المستضد ارتباطا مباشرا بتطور EAE. تقدم ورقة الطرق هذه بروتوكولا بديلا للحث على EAE في الفئران C57BL / 6 باستخدام مساعد Freund غير مكتمل معدل يحتوي على سلالة المتفطرة الطيرية المقتولة بالحرارة سلالة السل K-10.

المتفطرة السلية، وهي عضو في مجمع المتفطرة الطيرية (Mycobacterium avium)، هي العامل المسبب لمرض جون في المجترات، وقد تم تحديدها كعامل خطر للعديد من الاضطرابات البشرية بوساطة الخلايا التائية، بما في ذلك التصلب المتعدد. وعموما، أظهرت الفئران المحصنة بالمتفطرة نظيرة السل بداية مبكرة وشدة مرض أكبر من الفئران المحصنة بداء السل الذي يحتوي على سلالة المتفطرة السلية H37Ra عند نفس الجرعات البالغة 4 ملغم/مل. تمكنت المحددات المستضدية لسلالة المتفطرة الطيرية (MAP) من سلالة K-10 من إحداث استجابة خلوية قوية Th1 خلال مرحلة المستجيب ، والتي تتميز بأعداد أكبر بكثير من الخلايا اللمفاوية التائية (CD4 + CD27 +) ، والخلايا المتغصنة (CD11c + I-A / I-E +) ، والوحيدات (CD11b + CD115 +) في الطحال مقارنة بالفئران المحصنة ب CFA. علاوة على ذلك ، يبدو أن استجابة الخلايا التائية التكاثرية لببتيد MOG هي الأعلى في الفئران المحصنة ضد السل. قد يكون استخدام الدماغ الليتفوت (على سبيل المثال ، MOG35-55) المستحلب في مادة مساعدة تحتوي على M. paratuberculosis في التركيبة طريقة بديلة ومثبتة لتنشيط الخلايا المتغصنة لتحضير الخلايا التائية CD4 + T الخاصة بالمايلين أثناء مرحلة تحريض EAE.

Introduction

التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) هو نموذج شائع لدراسة اضطرابات إزالة الميالين البشرية1. هناك عدة نماذج من EAE: التحصين النشط باستخدام ببتيدات المايلين المختلفة مع المواد المساعدة القوية ، والتحصين السلبي عن طريق النقل في المختبر للخلايا الليمفاوية CD4 + الخاصة بالمايلين ، والنماذج المعدلة وراثيا ل EAE2 التلقائي. يحتوي كل نموذج من هذه النماذج على ميزات محددة تسمح بدراسة جوانب مختلفة من EAE ، مثل مرحلة البداية أو المستجيب أو المرحلة المزمنة. يعد نموذج البروتين السكري قليل التغصن النخاعي (MOG) ل EAE نموذجا جيدا لدراسة الآليات المناعية للالتهاب العصبي المزمن وإزالة الميالين ، حيث يتميز بتسلل التهابي أحادي النواة ، وإزالة الميالين في المادة البيضاء المحيطية ، وتقليل الشفاء بعد ذروة المرض1.

يتم تحفيز MOG-EAE عن طريق تحصين الفئران الحساسة مع الببتيد MOG35-55 في مساعد فرويند الكامل (CFA) ، يليه حقن داخل الصفاق من سم السعال الديكي. هذا يزيد من نفاذية الحاجز الدموي الدماغي ويسمح للخلايا التائية الخاصة بالمايلين التي يتم تنشيطها في المحيط بالوصول إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، حيث سيتم إعادة تنشيطها3. يلعب CFA دورا رئيسيا في تحريض EAE من خلال تعزيز امتصاص المستضد بواسطة الخلايا المقدمة للمستضد والتعبير عن السيتوكينات المتعلقة بالاستجابات الخلطية والخلوية4. هذه الآلية ترجع أساسا إلى وجود المتفطرة السلية المقتولة المستحلبة في الزيت ، والتي توفر مكوناتها حافزا قويا لجهاز المناعة5. في الواقع ، يرتبط تحريض EAE ارتباطا مباشرا بكمية المتفطرة الموجودة خلال التحدي المستضد6.

إن إضافة المتفطرات المقتولة الأخرى ، مثل المتفطرة الزبدية ، إلى مساعدفرويند 7 غير المكتمل ، وكذلك تأثير المجموعات المساعدة8 ، يمكن أن يعدل المسار السريري ل EAE وبالتالي يؤثر على استنساخ النتائج. ارتبطت سلالات المتفطرة الطيرية نظير السل (MAP) ، العامل المسبب لمرض جون في المجترات ، بالاضطرابات الالتهابية في الجهاز العصبي المركزي البشري 9 ، حيث أن مكوناته المستضدية قادرة على إثارة استجابة قوية بوساطة الخلط والخلايا في المرضى الذين يعانون من التصلب المتعدد واضطراب طيف التهاب النخاع والعصبالبصري 9. لذلك ، في هذا البروتوكول ، نعرض طريقة بديلة وقابلة للتكرار للحث على MOG-EAE عن طريق استبدال M. السل في CFA ب M. paratuberculosis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تمت الموافقة على جميع تجارب الفئران من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوان التابعة لكلية الطب بجامعة جونتيندو (رقم الموافقة 290238) وأجريت وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة للتجارب على الحيوانات.

1. تعليقات عامة على التجربة

  1. إيواء الفئران في أقفاص فردية في منشأة حيوانية في ظل ظروف خاضعة للرقابة وخالية من مسببات الأمراض عند 23 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية مع رطوبة 50٪ ± 10٪ ، ودورة ضوء / ظلام لمدة 12 ساعة مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء.
  2. حقن الفئران بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) بدون مستضد و CFA ، واستخدمها كضوابط سلبية وإيجابية ، على التوالي.

2. إعداد المستضدات الفطرية

  1. تنمو سلالة M. paratuberculosis K-10 في وسط ميدلبروك السائل 7H9 المخصب ب 10٪ OADC (حمض الأوليك ، الألبومين ، سكر العنب ، الكاتالاز) ، 0.005٪ توين 80 ، و 2 مجم / لتر من الميكوباكتين J لمدة أسبوعين في قوارير زراعة الأنسجة T25 عند 37 درجة مئوية. تقييم نمو المستعمرة بانتظام عن طريق الفحص البصري.
    تنبيه: التعامل مع المتفطرة نظيرة السل في مرفق السلامة البيولوجية من المستوى 2 (BSL-2).
  2. قم بتنمية دورق Erlenmeyer 500 مل من التخصيب مع تعليق 1.7 × 105 وحدات تشكيل مستعمرة (CFU) / مل في حجم نهائي قدره 200 مل (نفس الوسط مثل الخطوة 2.1) في حاضنة اهتزاز لمدة أسبوع واحد.
    ملاحظة: نظرا لأن الكائنات الملوثة قد تؤثر على النتائج ، يجب تلقيح البكتيريا على الوسائط الصلبة Middlebrook 7H10 لتحديد مورفولوجيا المستعمرة والتحقق من النقاء بواسطة مجموعات الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي (PCR) ل M. paratuberculosis.
  3. قم بتعطيل المعلقات البكتيرية لمدة 5-10 دقائق عند 70 درجة مئوية وأجهزة الطرد المركزي عند 3000 × جم لمدة 10 دقائق. اغسل الحبيبات الموزونة في برنامج تلفزيوني مرتين ، وقم بتعطيلها عن طريق الصوتنة ، وتخزينها عند -20 درجة مئوية.
  4. نقل بيليه إلى وعاء معقم وتجميدها مع الثلج الجاف أو النيتروجين السائل. نقل على الفور إلى غرفة التجفيف بالتجميد.
  5. تجميد جاف (4 ساعات عند -50 درجة مئوية تحت الفراغ) M. paratuberculosis وفقا لدليل الجهاز.
  6. في نهاية التجفيد ، قم بإزالة الحاوية المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ من مجفف التجميد ونقلها إلى مقعد التنظيف الحيوي. استخدم ملعقة من الفولاذ المقاوم للصدأ لإزاحة كتل MAP المجففة الملتصقة بالجدار الداخلي للحاوية المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ وسحقها بأكبر قدر ممكن من الدقة.
  7. وزن الخلايا المسحوقة باستخدام ميزان إلكتروني ووضعها يدويا في قنينة معقمة سعة 10 مل بتركيز 10 مجم / مل.
    ملاحظة: تم تحديد كثافة الخلية كجرام من الوزن الجاف لكل لتر من العينة. بعد 3 أسابيع ، يحتوي 1 ملغ (الوزن الرطب) من حبيبات الخلايا البكتيرية على حوالي 2.5 × 108 CFU.

3. إعداد مستحلب MOG 35-55

  1. قم بطحن محتويات قارورة واحدة من المتصورة السلية المجففة (10 ملغ) إلى مسحوق ناعم مع هاون ومدقة وأضف 10 مل إلى مساعد فرويند غير المكتمل للحصول على محلول مخزون 10 مجم / مل. يحفظ في درجة حرارة -4 درجة مئوية.
  2. قبل التحصين، خفف محلول المرق إلى تركيز نهائي قدره 4 ملغم/مل.
  3. خفف الببتيد MOG35-55 في ddH 2 O إلى تركيز نهائي قدره2ملغ / مل وخزن في -20 درجة مئوية.
  4. باستخدام الخالط ، امزج محلول MOG35-55 (2 مجم / مل) مع حجم متساو من المواد المساعدة (4 مجم / مل) من الخطوة 3.2 في أنبوب سعة 5 مل حتى يتم تشكيل مستحلب سميك. بعد كل 10 ثوان من الخلط ، ضع المحلول على الثلج لمدة 20 ثانية ، وقم بتدوير الأنبوب لاستعادة كل المحلول.
  5. انقل المستحلب إلى حقنة سعة 1 مل ، وأزل كل الهواء ، وأضف إبرة 27 جرام. المستحلب جاهز الآن للحقن.
    ملاحظه. نظرا لأن بعض فقدان المستحلب اللزج ل MOG35-55 يحدث أثناء التحضير ، فمن الأفضل تحضير 1.5 ضعف الكمية المطلوبة.

4. تحصين الحيوانات

  1. تخدير الحيوانات باستنشاق الأيزوفلوران لتقليل الضغط على الحيوانات.
  2. حقن المستحلب (200 ميكرولتر يحتوي على 200 ميكروغرام / فأر من MOG35-55) تحت الجلد في أسفل الظهر.
  3. تطبيق جرعة من سم السعال الديكي (100 ميكرولتر تحتوي على 200 نانوغرام/فأر) داخل الصفاق في اليومين 0 و2 بعد التحصين.
    تنبيه: سم السعال الديكي له تأثير قمعي متعدد على الجهاز المناعي. تجنب الابتلاع والتلامس مع العينين والجلد.

5. التقييم السريري

  1. مراقبة الفئران يوميا للوزن والعلامات السريرية. استخدم نظام التسجيل التالي: 0 = لا توجد علامات سريرية ؛ 1 = ذيل رخو ؛ 2 = ضعف منعكس التصحيح وضعف الأطراف الخلفية ؛ 3 = شلل كامل في الأطراف الخلفية ؛ 4 = شلل كامل في الأطراف الخلفية مع شلل جزئي في الأطراف الأمامية ؛ 5 = محتضر.
    ملاحظة: عند الملاحظة الأولية للعلامات السريرية ، يتم تزويد الحيوانات بإمكانية متزايدة للحصول على الماء والغذاء. يتم تليين القوارض وترطيبها ، ثم وضعها على أرضية القفص من قادوس الطعام. في حالة الحيوانات المجففة ، يتم إعطاء مكملات السوائل تحت الجلد ، أو يتم إعطاء ملاط القوارض عن طريق التزويج الفموي. إذا احتاج الفأر إلى هذا النوع من المساعدة لأكثر من 3 أيام ، إجراء القتل الرحيم.
  2. لتجنب أو تقليل الألم والضيق الحيواني ، استخدم نقاط النهاية البشرية التالية: فقدان وزن الجسم أكبر من 20٪ ، والنتيجة السريرية ≥4.0 ، وغياب رد الفعل الصحيح عند الدرجة 3 ، وعندما يكون الحيوان غير قادر على الوصول إلى العلف أو الماء لمدة 24 ساعة.
    ملاحظة: تم القتل الرحيم للفئران في اليوم 30 بعد تحريض EAE عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال (≥150 ملغم / كغم).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم تحصين مجموعات من الفئران C57BL / 6 (المجموع n = 15 / مجموعة) مع MOG35-55 في مستحلب يحتوي على M. paratuberculosis أو بالطريقة الشائعة مع CFA. أظهرت جميع مجموعات الفئران مرضا أحادي الطور حادا يتميز بذروة واحدة من الإعاقة لوحظت في 14-17 يوما ، يليها انتعاش جزئي للأعراض خلال الأيام العشرة التالية (الشكل 1 أ). أظهرت الفئران المحصنة بالمادة المساعدة التي تحتوي على المتفطرة نظيرة السل ، بغض النظر عن الجنس ، بداية مبكرة من 8 إلى 9 أيام بعد التحصين وشدة أكبر في المرحلة الحادة من الفئران المحصنة ب CFA (الشكل 1 ب). لم يكن هناك فرق كبير في وزن الجسم بين المجموعات (الشكل 1C). تم إجراء تحليل قياس الفلور الخلوي لخلايا الطحال من فئران EAE والنشاط التكاثري للخلايا اللمفاوية التائية التي تم تقييمها بواسطة 3دمج H-thymidine ، كما تم نشرهسابقا 11. أظهرت جميع خلايا الطحال في فئران EAE ، بغض النظر عن المادة المساعدة المستخدمة ، استجابة تكاثرية قوية للببتيد MOG35-55 ، في حين أنها لم تتكاثر استجابة للسيطرة على الببتيد البيضاوي (الشكل 1D). أظهرت فئران EAE المحصنة ضد السل نسبة متزايدة من الخلايا الليمفاوية التائية (CD4 + CD27 +) ، والخلايا المتغصنة (CD11c + I-A / I-E +) ، والوحيدات (CD11b + CD115 +) في الطحال مقارنة بالفئران المحصنة ضد CFA خلال المرحلة الحادة من EAE (الشكل 1E). كشف التحليل النسيجي بواسطة الهيماتوكسيلين-يوزين عن تسلل التهابي أحادي النواة حول الأوعية الدموية والسحائي نموذجي في الدماغ والحبل الشوكي (الشكل 1F).

Figure 1
الشكل 1: نتائج EAE التمثيلية. (أ) الدرجات السريرية للفئران التي يتم تقييمها يوميا ؛ (ب) الاختلافات في مسار المرض؛ (ج) وزن الجسم؛ (د) الاستجابة التكاثرية للخلايا التائية لببتيد MOG35-55 ؛ ه: تجمعات الخلايا المناعية في الخلايا الطحالية خلال المرحلة الحادة؛ (F) الصور النسيجية لأقسام الحبل الشوكي (تكبير 4x) ملطخة بالهيماتوكسيلين-يوزين (شريط المقياس = 200 ميكرومتر) خلال المرحلة الحادة. تشير الأسهم إلى تسلل التهابي. تظهر البيانات النتائج المجمعة لثلاث تجارب مستقلة (ن = 5 فئران / مجموعة / تجربة). يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري المحسوب باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعا باختبار Bonferroni اللاحق أو اختبار Mann-Whitney U. الاختصارات: EAE = التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. MOG = البروتين السكري قليل التغصن المايلين. PBS = محلول ملحي مخزن بالفوسفات ؛ CFA = مساعد فرويند الكامل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

لقد أظهرنا بروتوكولا بديلا قويا للحث بنشاط على EAE الشديد في الفئران C57BL / 6J باستخدام الببتيد MOG35-55 المستحلب في مادة مساعدة تحتوي على M. paratuberculosis10. أدى تحريض EAE بهذه الطريقة إلى مرض أكثر حدة من ذلك الناجم عن البروتوكول المشترك مع CFA. يمكن أن يكون هذا الاختلاف بسبب المكونات الدهنية المختلفة في جدار الخلية من المتفطرات11. في الواقع ، على عكس المتفطرات الأخرى ، تنتج M. paratuberculosis مستضد ليبونستابيبتيد على سطح جدار الخلية بدلا من glycopeptidolipids11. لم يتفاعل هذا الببتيد الشحمي مع الأنواع الأخرى ذات الصلة الوثيقة وقد ثبت أنه هدف لاستجابة خلطية محددة قوية في المرضى الذين يعانون من اضطرابات المناعة الذاتية12. تمتلك المتفطرات أنماطا جزيئية مرتبطة بمسببات الأمراض تلعب أدوارا مختلفة في الاستجابات المناعية9. على سبيل المثال، أظهرنا مؤخرا أن التمنيع الفموي بالمتفطرة نظيرة السل يزيد من شدة MOG-EAE13، في حين يبدو أن التطعيم بعصية كالميت غيرين (BCG)-طوكيو-172 له دور وقائي في تطور نماذج EAE النشطة والعفوية14.

تشمل القيود المحتملة للبروتوكول المسار أحادي الطور المحدود ذاتيا ل EAE ، والذي قد يصبح مزمنا إذا تضاعفت تركيزات المتفطرة في السم المساعد والسعال الديكي. هذا الجانب مهم جدا للنظر فيه ، خاصة عند دراسة الجانب التنكسي العصبي ل EAE باستخدام الفئران بالضربة القاضية ، حيث قد يكون سبب غياب مرحلة الشفاء هو الجرعات العالية من الكواشف المستخدمة وليس بسبب نقص وظيفة جينات معينة. علاوة على ذلك ، على الرغم من أنه يمكن تطبيق البروتوكول الموصوف أعلاه على بروتوكولات EAE الأخرى عن طريق تغيير سلالات وعمر الفئران أو نوع البروتين وكميته ، لضمان إجراء تجارب EAE بطريقة منهجية صحيحة ، يجب مطابقة المجموعات التجريبية للعمر والجنس.

نظرا لأن حدوث المرض قد يختلف ، فإن توصيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها هي: يمكن أن يتراوح التركيز الأمثل للمتفطرة نظيرة السل من 2 إلى 4 مجم / مل ، ويمكن استخدام موصل ثلاثي الاتجاهات لخلط كميات صغيرة من المستضد في المرحلة المائية. لقد وصفنا طريقة لإعداد المستحلب باستخدام الخالط. ومع ذلك ، فإن الطريقة البديلة والبسيطة لخلط كميات صغيرة من المستضد في المرحلة المائية ، في مرحلة الزيت ، تتضمن استخدام موصل ثلاثي الاتجاهات ، يتم توصيل حقنتين زجاجيتين به. في الختام ، حددنا المتفطرة نظيرة السل كمرشح مساعد قوي في تحريض EAE النشط. مزيد من الدراسات حول طريقة العمل ونوع المناعة المستحثة في أنواع الحيوانات المختلفة ستزيد الثقة في إمكانية اعتماد هذه الطريقة البديلة لفهم آلية التهاب الأعصاب.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgments

وتلقى هذا العمل دعما من منحة من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (المنحة رقم. JP 23K14675).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
anti-mouse CD115 antibody Biolegend, USA 135505 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse CD11b antibody Biolegend, USA 101215 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse CD11c antibody Biolegend, USA 117313 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse CD16/32  antibody Biolegend, USA 101302 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse CD4  antibody Biolegend, USA 116004 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse CD8a  antibody Biolegend, USA 100753 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse I-A/I-E antibody Biolegend, USA 107635 for cytofluorimetry 1:1,000
anti-mouse Ly-6C  antibody Biolegend, USA 128023 for cytofluorimetry 1:1,000
BBL Middlebrook OADC Enrichment Thermo Fisher Scientific, USA BD 211886 for isolation and cultivation of mycobacteria
C57BL/6J mice Charles River Laboratory, Japan 3 weeks old, male and female
FBS 10279-106 Gibco Life Techologies, USA 42F9155K for cell culture, warm at 37 °C before use
Freeze Dryer machine Eyela, Tokyo, Japan FDU-1200 for bacteria lyophilization
incomplete e Freund’s adjuvant Difco Laboratories, MD, USA 263810 for use in adjuvant
Middlebrook 7H9 Broth Difco Laboratories, MD, USA 90003-876 help in the growth of Mycobacteria
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis K-10 ATCC, USA BAA-968 bacteria from bovine origin
Mycobacterium tuberculosis H37 Ra, Desiccated BD Biosciences, USA 743-26880-EA for use in adjuvant
Mycobactin J Allied Laboratory, MO, USA growth promoter
Myelin Oligodendrocyte Glycolipid (MOG) 35-55 AnaSpec, USA AS-60130-10 encephalotigenic peptide
Ovalbumin (257-264) Sigma-Aldrich, USA S7951-1MG negative control antigen  for proliferative assay
pertussis toxin solution Fujifilm Wako, Osaka Japan 168-22471 From gram-negative bacteria Bordetella pertussi, increases blood-brain barrier permeability
Polytron homogenizer PT 3100 Kinematica for mixing the antigen with the adjuvant
RPMI 1640 with L-glutamine Gibco Life Techologies, USA 11875093 For cell culture
Thymidine, [Methyl-3H], in 2% ethanol, 1 mCi PerkinElmer, Waltham, MA, USA NET027W001MC for proliferation assay, use (1 μCi/well)
Zombie NIR Fixable Viability Kit Biolegend, USA 423105  cytofluorimetry, for cell viability

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bittner, S., Afzali, A. M., Wiendl, H., Meuth, S. G. Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 mice. Journal of Visualized Experiments. (86), e51275 (2014).
  2. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O'Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). British Journal of Pharmacology. 164 (4), 1079-1106 (2011).
  3. Lu, C., et al. Pertussis toxin induces angiogenesis in brain microvascular endothelial cells. Journal of Neuroscience Research. 86 (12), 2624-2640 (2008).
  4. Awate, S., Babiuk, L. A., Mutwiri, G. Mechanisms of action of adjuvants. Frontiers in Immunology. 4, 114 (2013).
  5. Kubota, M., et al. Adjuvant activity of Mycobacteria-derived mycolic acids. Heliyon. 6 (5), e04064 (2020).
  6. Nicolo, C., et al. Mycobacterium tuberculosis in the adjuvant modulates the balance of Th immune response to self-antigen of the CNS without influencing a "core" repertoire of specific T cells. International Immunology. 18 (2), 363-374 (2006).
  7. O'Connor, R. A., et al. Adjuvant immunotherapy of experimental autoimmune encephalomyelitis: immature myeloid cells expressing CXCL10 and CXCL16 attract CXCR3+CXCR6+ and myelin-specific T cells to the draining lymph nodes rather than the central nervous system. Journal of Immunology. 188 (5), 2093-2101 (2012).
  8. Libbey, J. E., Fujinami, R. S. Experimental autoimmune encephalomyelitis as a testing paradigm for adjuvants and vaccines. Vaccine. 29 (17), 3356-3362 (2011).
  9. Cossu, D., Yokoyama, K., Hattori, N. Conflicting role of Mycobacterium species in multiple sclerosis. Frontiers in Neurology. 8, 216 (2017).
  10. Cossu, D., Yokoyama, K., Sakanishi, T., Momotani, E., Hattori, N. Adjuvant and antigenic properties of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis on experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Neuroimmunology. 330, 174-177 (2019).
  11. Biet, F., et al. Lipopentapeptide induces a strong host humoral response and distinguishes Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from M. avium subsp. avium. Vaccine. 26 (2), 257-268 (2008).
  12. Cossu, D., Yokoyama, K., Tomizawa, Y., Momotani, E., Hattori, N. Altered humoral immunity to mycobacterial antigens in Japanese patients affected by inflammatory demyelinating diseases of the central nervous system. Scientific Reports. 7 (1), 3179 (2017).
  13. Cossu, D., et al. A mucosal immune response induced by oral administration of heat-killed Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis exacerbates EAE. Journal of Neuroimmunology. 352, 577477 (2021).
  14. Cossu, D., Yokoyama, K., Sakanishi, T., Sechi, L. A., Hattori, N. Bacillus Calmette-Guerin Tokyo-172 vaccine provides age-related neuroprotection in actively induced and spontaneous experimental autoimmune encephalomyelitis models. Clinical and Experimental Immunology. 6, (2023).

Tags

هذا الشهر في JoVE ، العدد 195 ، مساعد ، المتفطرة الطيرية الفرعية نظير السل ، التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي النشط ، الفئران C57BL / 6J ، البروتين السكري قليل التغصن المايلين
النشاط المساعد <em>للمتفطرة نظيرة السل</em> في تعزيز مناعة المستضدات الذاتية أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cossu, D., Tomizawa, Y., Momotani,… More

Cossu, D., Tomizawa, Y., Momotani, E., Yokoyama, K., Hattori, N. Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J. Vis. Exp. (195), e65422, doi:10.3791/65422 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter