Summary
本文详细介绍了杜艾灸治疗实验小鼠强直性脊柱炎的操作规程和注意事项。
Abstract
强直性脊柱炎 （AS） 是一种进行性恶化和致残的关节炎，主要影响中轴骨骼。这种疾病主要累及脊柱和骶髂关节。脊柱与骶髂关节融合可能发生在疾病后期，导致脊柱僵硬和脊柱后凸，以及行走困难，严重影响工作质量和日常生活活动，给患者、家庭和社会带来沉重的负担。非药物治疗作为 AS 的替代疗法越来越受到关注。艾灸是中医（TCM）中使用的一种古老的治疗技术。度艾灸疗法是在普通艾灸的基础上发展起来的一种独特而创新的外用疗法，对AS有一定的治疗效果。度艾灸巧妙地结合了中医的相容技术，将经络、穴位、中草药、艾灸融为一体。本文详细介绍了实验小鼠度灸的操作规程和注意事项，为研究度艾灸治疗AS的机理提供了实验依据。
Introduction
强直性脊柱炎 （AS） 是一种进行性恶化和致残的关节炎，主要影响中轴骨骼。根据最新的流行病学调查，世界上~0.01%-1.8%的人患有这种疾病1，其中大多数是年轻男性（男女比例为~2-3：1）2。AS在中国人群中的发病率为0.2%-0.4%。这种疾病主要累及脊柱和骶髂关节。脊柱与骶髂关节融合可能发生在疾病后期，导致脊柱僵硬和脊柱后凸，以及行走困难，严重影响工作和日常生活活动的质量，给患者、家庭和社会带来沉重的负担1。目前，AS尚无明确的解决方案，所提供的药物和非药物治疗主要集中在减轻疼痛、减缓疾病进展和提高生活质量上。近年来，由于药物治疗选择非常有限3，非药物治疗越来越受到关注，非药物治疗已成为AS的替代疗法。在中国，患者通常更喜欢由中医（TCM）组成的外部治疗，这种治疗副作用小，治疗过程非常方便。
艾灸是中医中使用的一种古老的治疗技术。度艾灸是一种外部治疗技术，由杜经脊柱段的“药泡艾灸”组成。它主要用于AS的治疗，并显示出安全性和有效性。与普通艾灸相比，杜艾灸具有艾灸面积广、艾灸锥大、火力强、耐高温4等特点。一项系统评价和荟萃分析表明，艾灸是治疗 AS5 的有效补充疗法。最近的一项研究证实，艾灸改善了AS患者的临床症状和一些炎症因素6。研究表明，度艾灸可增加脑内β内啡肽含量并发挥中枢镇痛作用7，下调HLA-B27基因8的表达，延缓AS的复发率。度艾灸还通过降低炎症指数 ESR （ESR） 和 C 反应蛋白 （CRP）、I 型胶原 C 末端肽 （CTX-I） 和 Dickkopf1 蛋白 （DKK1） 的水平来改善 AS 的进展9,10。
另一项临床研究表明，度艾灸可以进一步调节无序的T细胞亚群Ig和补体C3，以平衡免疫机制11。在骨代谢方面，艾灸可抑制血清碱性磷酸酶（ALP）和血清磷（S-P）的升高，增加血清钙（S-Ca）、骨密度（BMD）和骨强度12。此外，度艾灸可以在多个点修复脊柱功能，以缓解AS患者的疲劳症状13。一些动物研究揭示了艾灸治疗AS的潜在机制。研究表明，艾灸显著改善了整体健康状况，降低了脊柱韧带组织样本中爪子厚度的水平，并降低了IL-1β、PGE2、IL-6和TNF-α的水平。代谢途径分析将鉴定的代谢物与 TCA 循环以及脂质、氨基酸、肠道菌群和嘌呤代谢联系起来14。另一项研究表明，艾灸抑制促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17和IL-6的表达; 降低 RANKL、RANK、ALP 和 OCN 的 mRNA 水平;并改善了AS小鼠的组织病理学特征15。
虽然这些研究表明艾灸可能有效治疗 AS，但需要更多的研究来证实这些发现并确定 AS 患者艾灸的最佳治疗方案。我们的团队基于中国传统艾灸的基本理论和实际操作，创建并改进了艾灸疗法，在中国临床实践中广泛开展和应用了35年以上。虽然关于独艾灸治疗AS的高质量研究很少，但其治疗AS的适应症已得到证据支持。然而，用度灸治疗AS的机制值得进一步研究。动物研究是探究杜艾灸治疗AS机制的重要方法。杜艾灸的临床操作比较成熟，但很少用于动物实验机理研究。本文详细介绍了杜艾灸治疗AS实验小鼠的操作及注意事项。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
所有动物实验均经山东中医药大学实验动物福利伦理审查委员会批准。SDUTCM20230831301）。
1.动物准备
- 提前确定实验组和每组动物数量。
- 选择雄性BALb/c小鼠，将其饲养在22±1°C的恒温，60±5%的恒湿度和12小时的昼夜循环光照环境中。
2. AS小鼠模型的建立
注：AS模型是用软骨蛋白多糖（PG）诱导的，这是一种经典的建模方法16,17,18,19,20,21。反复接种PG诱发肌腱炎和脊柱炎的BALB/c菌株小鼠。有关本协议中使用的材料、试剂和仪器的详细信息，请参阅材料表。
- 使用 200 μL 移液管将 200 μL PG 和 CFA（或 IFA）吸入 1.5 mL 离心管中。轻轻摇晃，使离心管中的液体混合。
- 将离心管放入组织研磨机中匀浆，然后在冰上孵育4分钟，重复5次。在组织研磨机中设置以下参数： 60 Hz，研磨 30 秒，间隔 10 秒 ，共 6 个周期。
- 用 1 mL 注射器从离心管中提取 0.2 mL 乳化 PG 蛋白。
- 用左手抓住并固定鼠标。将鼠标置于仰卧位，保持头部低于尾部，以防止插入注射器时对腹部器官造成损害。
- 用右手用酒精棉签对腹部进行消毒。
- 右手拿着注射器，将针头皮下轻插入腹部下半部白线腹侧的左侧或右侧。
- 将针头皮下平行于中腹线推下 3-5 mm，然后将针头以与皮肤成 45° 角推入腹腔。
- 穿透腹膜，拔出针塞，缓慢注射乳化的PG蛋白。
3. 杜艾灸
注意：提前准备Du-moxibation最重要的三种原材料（图1）。
- 准备艾灸锥。将天鹅绒拿在手中，两只手掌朝向相反的方向，施加扭转力，将天鹅绒揉成纺锤形（图2）
- 将生姜切成小块，放入榨汁机中捣成泥（图3）。用棉纱布过滤姜泥。将姜汁和姜泥从姜泥中分离出来，为下一步做准备。
- 准备 10 克姜泥和 20 毫升姜汁，放入纸杯中以备后用。
- 称取 0.1 克中药粉（肉桂粉、丁香粉、黄芋粉、花蒽素粉和人造麝香的混合物）22 ，并在研钵中研磨。
- 将小鼠置于动物麻醉机的麻醉诱导箱中，用2-3%异氟醚和氧气的混合物以2L / min的流速麻醉它们。
- 首先通过观察是否存在惊吓反射来评估麻醉深度，并通过检查是否在轻轻捏脚趾时没有踏板反射来验证手术麻醉水平。
- 鼠标达到手术平面麻醉后，将其从盒子中取出并以俯卧位固定在手术台上。将鼠标的嘴和鼻子与麻醉剂的出口对齐。
- 通过连接到麻醉机的面罩进行麻醉，异氟醚和氧气通过非再呼吸回路输送。在整个操作过程中保持麻醉并将鼠标保持在37°C加热垫上。在眼睛上涂抹润滑剂以防止干燥。
- 找到穴位并确定刺激区域（图4）。
- 剃掉老鼠背部的毛发，直到看到老鼠背部的肉色皮肤。确保脱毛的宽度为~1.5厘米，长度为从第七颈椎到尾椎（图5A）。
- 将准备好的姜汁用棉纱布涂抹在剃光区域（图3）。
- 用毛笔将中药粉均匀地撒在鼠标背面的中线上，并用桑皮纸覆盖（图5B-D）。
- 用姜泥制作一个长 6 厘米、宽 1.5 厘米、厚 3 毫米的梯形姜柱。将生姜柱固定在桑纸上（图5E）。
- 在姜柱的中线上方做一个凹槽（图3），然后将艾灸锥放在姜柱上。
- 点燃艾灸锥，在前一个艾灸锥烧尽后放置一个新的艾灸锥。检查生姜柱的硬度，以防止灼伤小鼠，共灼伤三个锥体（图5F）。
- 艾灸锥燃烧后，擦去生姜和中药粉，清洁鼠标背面。此时停止麻醉。
- 让老鼠在一个新的笼子里恢复意识，不受限制地获得食物和水。将笼子放在加热垫上以帮助恢复过程。监测动物，直到它恢复足够的意识。
- 一旦鼠标完全恢复，在将其放回其常规外壳之前，确认是否存在矫正反射。
注意：在操作过程中，有必要监测小鼠的精神状态，以避免呼吸微弱。防止烫伤，但要保持老鼠温暖，避免爪子和尾巴瘀伤。
4. 关节炎指数（AI）的评估
- 评估 AI 分数三次：建模前、建模后和治疗后。评定标准如下：0、无红肿;1、几个脚趾轻微发红或肿胀;2、大多数脚趾关节和脚趾发红肿胀;3、足部及踝关节以下严重发红肿胀;4、足部和踝关节发红肿胀23.
- 计算所有四只爪子的 AI 分数，最大值为 16。
5. Rotarod测试
注意：旋转测试用于通过记录小鼠在旋转鼓上花费的时间来评估运动协调和平衡。该实验由三项试验组成，间隔 20 分钟。官方测试数据记录在第三次试验中，前两次作为训练练习。
- 将鼠标放在旋转鼓上，该鼓在40秒24内从40到40rpm的连续加速度下旋转。
- 测量延迟时间（鼠标从杆上掉下来之前的时间）。提供衬垫以防止脱落时受伤。
6. 开放场测试（OFT）
注意：OFT用于评估自主神经运动的状态，旨在识别病理行为。四个方形的露天竞技场（50 cm x 50 cm x 40 cm）被放在一起形成设备。盒子的底部被分成九个相等的方块。
- 将实验室的背景噪音控制在65分贝以下。
- 每次试验前用75%乙醇擦拭整个设备。
- 在测试前1小时将所有小鼠置于测试室中，以使它们适应环境。
- 将老鼠放在方形的空旷场地中，让它们探索 10 分钟。
- 记录 10 分钟的总距离和移动速度。
7. 安乐死和标本采集
- 将小鼠置于麻醉诱导箱中，并以2L / min的流速用2-3%异氟醚和氧气的混合物麻醉。一旦小鼠进入深度麻醉状态，确认缺乏踏板反射，将其转移到手术台上进行维持麻醉。
- 用非惯用手抓住并固定鼠标。
- 轻轻按压眼部区域，使眼球充血突出。
- 用剪刀修剪老鼠的胡须，防止毛发引起的溶血。
- 通过检查脚趾捏合时是否没有踏板反射来确认麻醉深度。用镊子夹住眼球并迅速取出，让血液从眼眶流入微量离心管。
注意：也可以使用其他采血方法，例如心脏穿刺。 - 当滴血速度减慢时，轻轻按压鼠标的心脏区域以加快血液泵送并获得更多血液。然后，使用颈椎脱位对小鼠实施安乐死。
- 使用非惯用手的镊子将腿保持在踝关节上方。然后，用剪刀剪掉踝关节上方的腿。
8. 组织学分析
- 将踝关节标本浸入4%多聚甲醛中超过24小时。在 10% EDTA （pH = 7.4） 中脱钙 1 个月。
- 将试样浸泡在4%多聚甲醛中2小时。
- 然后，将样品浸泡在乙醇浓度增加的梯度中（70%，80%，90%，100%，100%，100%）。将每种乙醇浓度浸泡1小时。
- 将试样浸泡在二甲苯中3小时。
- 将踝关节标本浸入石蜡中7小时。将石蜡块放在4°C冰箱中。
- 使用半自动石蜡切片机将石蜡块切片至6μm的厚度。
- 将切片浸泡在二甲苯中4×5分钟以完成脱蜡。
- 将切片浸泡在乙醇浓度降低的梯度（100%，100%，95%，75%）中，每次2分钟。在蒸馏水中浸泡2分钟。
- 用苏木精染色切片10分钟，然后用蒸馏水冲洗5秒。
- 将切片在分化液中浸泡30秒，然后用蒸馏水冲洗5秒。
- 用曙红染色切片1分钟，然后用蒸馏水冲洗3分钟。
- 将切片浸泡在乙醇浓度增加（80%，95%，100%，100%）的梯度中，每次1分钟。在二甲苯中浸泡 3 x 3 分钟，然后将切片密封 25。
9. 酶联免疫吸附试验（ELISA）
- 根据制造商的说明，使用相应的试剂盒测量血浆中的IL-17和TNF-α浓度。
10. 统计分析
- 将数据表示为均值±均值标准误差 （SEM）。
- 通过单因素方差分析 （ANOVA） 或双向重复测量方差分析确定显着性，然后进行 Bonferroni 或 Tamhane T2 的事后检验。
- 将 P < 0.05 视为具有统计学意义。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
PG诱导的模型小鼠出现外周关节炎症状，以四肢和脚趾发红肿胀为特征，早在第14周就逐渐发展为中轴关节炎，与AS的表现非常相似。因此，如果最后一次注射后 14 周的关节炎指数 （AI） 超过 3 分，则 AS 小鼠模型被认为是成功的22。当小鼠的爪子出现肿胀时，每周进行一次度艾灸治疗，共计3次。治疗后，小鼠在异氟烷深度麻醉下通过颈椎脱位实施安乐死，采集其血液，切除脚踝。
杜艾灸对运动协调和自主运动的影响
采用牛PG诱导的AS为模型，观察Du经Du-moxitsu对运动协调的影响。最初，使用关节肿胀评分来评估模型是否成功，并使用旋转试验和 OFT 评估运动协调和自主运动。
AI 评估确定了外周关节炎的严重程度。建模后，双向重复测量方差分析显示，模型组和杜艾灸组的关节肿胀评分比杜艾灸前对照组显著增加（P < 0.01; 图6A）。与模型组相比，度艾灸治疗降低了杜艾灸后关节肿胀评分（P < 0.05; 图6A）。
采用旋转试验来评估运动协调性和平衡性。双因素重复测量方差分析显示随时间（F = 13.928，P = 0.000<0.05）以及时间和组的交互作用（F = 12.583，P = 0.000<0.05）的显著差异。建模后，对照组的潜伏时间与建模前无差异。但建模后，模型组和杜艾灸组的潜伏期均较对照组显著降低（P < 0.01; 图6B），模型组与杜艾灸组差异无统计学意义（P > 0.05; 图6B）。治疗后，杜艾灸组的潜伏期时间比模型组显著增加（P < 0.05; 图6B）。这些结果表明，Du-moxitsu 可有效改善 AS 小鼠的运动协调性。
进行 OFT 以检测自主神经运动。使用软件自动收集和分析参数（图6C-E）;本研究主要观察总距离和平均速度。建模前各组间总距离和平均速度差异无统计学意义（P > 0.05;图6C，D）。建模后，总距离和平均速度较对照组显著降低（P < 0.05;图6C，D）。治疗后，杜艾灸组的总距离和平均速度均比模型组显著增加（P < 0.05;图6C，D）。这些结果表明，Du-moxitsu 可有效改善 AS 小鼠的自主运动。
杜艾灸对踝关节病变的影响
HE染色观察踝关节病理变化。对照组滑膜结构无损伤，滑膜无充血，无明显炎性细胞浸润坏死。然而，在模型组中，除了炎症细胞浸润和组织水肿外，在关节腔中观察到滑膜增生和浸润。结合AI评估，证明AS模型建立成功。与模型组相比，杜艾灸组小鼠滑膜更完整，间质水肿减少，关节软骨相对完整（图7）。
Du-艾灸对血浆IL-17和TNF-α水平的影响
ELISA检测血浆中的IL-17和TNF-α。模型组血浆IL-17和TNF-α水平较对照组显著升高（P < 0.01;图6F，G）。杜艾灸降低血浆IL-17和TNF-α水平（P < 0.05;图6F，G）。
图1：杜艾灸所需的原材料。 请点击这里查看此图的较大版本.
图 2：制作艾灸锥。 请点击这里查看此图的较大版本.
图3：准备姜水，做成梯形姜柱。 请点击这里查看此图的较大版本.
图 4：GV14 和 GV2 在小鼠中的位置。 （A） GV14位于第七颈椎棘突处;GV2 位于骶管食管裂孔中。（B）鼠标上的杜艾灸示意图。（C）杜艾灸的刺激区域。 请点击这里查看此图的较大版本.
图5：鼠标杜艾灸操作步骤。 （A）剃掉毛发，将姜汁涂抹在俯卧位的鼠标上。（乙、丙）均匀撒上中药粉。（D） 用桑皮纸盖住粉末。（E） 将生姜柱牢固地固定在桑纸上。（F）在姜柱上放一个艾灸锥;然后，点燃它。 请点击这里查看此图的较大版本.
图6：杜艾灸对运动协调、自主神经运动以及IL-17和TNF-α水平的影响。 （A）小鼠关节肿胀评分。（B） rotarod 测试中的延迟时间。（C-E）OFT的总距离、平均速度和轨迹图。（F） 血浆中的IL-17水平。（G） 血浆中TNF-α水平。值表示为 SEM ± 的平均值 （n = 6）。##与对照组相比，P < 0.01，#P < 0.05;$$与模型组相比，P < 0.01，$P < 0.05。缩写：IL = 白细胞介素;TNF = 肿瘤坏死因子;OFT = 开放场测试。请点击这里查看此图的较大版本.
图7：踝关节HE染色。 （A）对照组关节腔光滑，无炎症浸润。（B）模型组在关节腔内观察到滑膜增生和浸润。（C）度艾灸组小鼠关节腔光滑，水肿缓解。比例尺 = 200 μm。缩写：HE = 苏木精-伊红。 请点击这里查看此图的较大版本.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
AS临床表现为背部、腰椎和关节肿胀疼痛，严重者可出现脊柱畸形和关节僵硬26。早期诊断和治疗可以改善AS患者的生活质量，降低残疾率，并改善预后。根据中医（TCM），AS被认为是由肾脏和度经的阳气不足以及内部冷恶的积累引起的。中医认为，艾灸基于经络的概念，可以产生使身体表面温暖的气。然后，这股气沿着经络和穴位向动。在 《黄帝内经 》（一部非常经典和重要的中医杰作）中，记载了“治疗患病的杜经”。由于AS位于Du经络，因此刺激Du经络被用作治疗点。杜经被认为是阳气达到顶峰的阳道之海。杜经上的艾灸可以补充阳气，激活杜经的作用，调节肾阳的温热作用，即增强西药的免疫调节功能。
从西医的角度来看，脊髓在传递神经信息方面起着重要作用。灸作用于脊神经根的进出，通过调节神经递质，影响神经系统的功能和调节机制。在 1990 年代，证明杜艾灸增加了大鼠下丘脑中β-内啡肽的含量，从而具有中枢镇痛作用7.此外，附着点炎是AS的常见并发症，其特征是持续疼痛和肌肉僵硬，严重时会影响关节和身体运动。杜艾灸作为一种经过临床验证的中医治疗方法，在治疗AS时可以有效缓解炎症，促进组织修复，改善附着点炎。
具体来说，针灸的效果主要体现在以下几个方面。首先，它们促进血液循环和炎症的吸收。度灸通过温热作用刺激脊柱周围组织的血液循环和新陈代谢，促进炎症的吸收和组织修复，从而降低肌腱附着炎症的炎症程度和疼痛。其次，它们可以改善肌肉和韧带张力。杜艾灸的刺激作用可以改善脊柱周围的肌肉张力，放松硬化的软组织，促进脊柱关节的活动，减轻肌肉紧张和韧带拉伸引起的疼痛和僵硬。综上所述，度艾灸作为一种辅助疗法，可以通过作用于脊柱区域，全面调节机体神经、免疫、循环系统的活动，使机体整体更加平衡。
炎症是 AS27 的主要表现。TNF-α 是一种在单核巨噬细胞刺激下产生的多效应细胞因子和炎症因子28。TNF-α可抑制ALP和胶原合成的活性，导致骨质流失和软骨破坏29。近年来，研究发现IL-17在AS的发病机制中起着重要作用，这在综述30中得到了充分证明。IL-17可直接作用于成骨细胞，促进核转录因子-κB（NF-κB）受体激活配体（RANKL）的表达，促进破骨细胞的健壮生成。同时，IL-17 还影响间充质干细胞 （MSC），诱导其增殖并促进其分化为成骨细胞31。Kenna32 等人发现，与健康对照组相比，AS患者外周血中的IL-17水平增加了近两倍。该研究表明，IL-17 拮抗剂可能是对 TNF-α 拮抗剂反应不佳的 AS 患者的新选择33。一项临床研究表明，IL-17 拮抗剂的给药方案在改善患者的影像学中轴型脊柱关节炎体征和症状方面优于安慰剂34。结果表明，模型组TNF-α和IL-17血浆水平显著高于对照组，Du-moxitsut治疗后TNF-α和IL-17血浆水平显著降低。
灸疗法巧妙地运用中医相容的手法，将经络、穴位、中草药、艾灸融为一体。杜艾灸疗法的原料主要包括艾灸、生姜、中药粉等。从中医的角度来看，艾灸丝绒是艾蒿的加工产品，具有激活侧支、驱寒、止痛的功能。生姜具有缓解外部症状和驱寒的作用。现代研究还表明，生姜具有抗炎和镇痛特性35。治疗前用姜汁擦拭皮肤有助于打开毛孔并促进透皮渗透36，此外还有助于中药粉末粘附在皮肤上。梯形姜柱牢固地固定在背面，为艾灸锥提供坚实的基础。艾灸锥燃烧后，火力、生姜和中药粉的作用共同作用于杜经。针对本病阳虚的发病机制，度灸直接作用于病部位，温经，驱寒，补阳气精，促进血液循环，平衡阴阳，治病根。
在进行杜艾灸时，应考虑几个细节。首先，度艾灸的手术部位是固定的，从大水穴（GV14）到药树穴（GV2）（解剖学上从第 7颈椎棘突到尾椎，包括整个脊柱），这与AS的发病部位一致（图4）。其次，生姜的湿度和厚度很重要。多余的姜汁在姜汁加工成姜泥后必须挤出，使姜汁没有颗粒感，其厚度适合制成梯形姜柱。姜泥中的高湿度和水分容易阻碍艾灸火的渗透，减少艾灸刺激量。如果生姜原料太干，颗粒太大，就很难制作出梯形生姜柱，导致皮肤快速散热和烫伤。第三，应考虑艾灸锥的大小和硬度。用于小鼠艾灸的艾灸锥体长~4厘米，直径0.5厘米，在制备时应紧密。密封性的测试是锥体即使在掉落到表面上也不会解开。如果艾灸锥不够紧凑，会导致艾灸天鹅绒用量减少，燃烧时间缩短，火力降低。第四，点燃艾灸锥时，艾灸锥的头部、中部、尾部应点燃细香，使艾灸锥缓慢燃烧，达到潮起潮落的滋养效果。第五，麝香是艾灸药粉中的重要成分。艾灸后的第二天，杜经上应该有晶莹剔透的水泡，像小珍珠一样。
大量临床研究证实了杜艾灸治疗AS 4,5,6的明确疗效。然而，关于其在动物实验中的作用机制的研究进展缓慢。通过研究和创新，多年的Du-moxitsu操作经验使我们研究了它在小鼠实验中的应用。本文详细介绍了杜艾灸治疗实验小鼠AS的操作规程和注意事项。此外，还观察了艾灸对AS小鼠运动协调以及TNF-α和IL-17血浆水平的影响。本研究为研究度灸治疗AS的机理提供了最基本的实验依据。这项研究仍然存在一些局限性。例如，在未来的研究中，我们将关注对安慰剂艾灸、剂量、范围和治疗时间等不同参数的评估，以获得最有效的组合方案。在以后的研究中，成像方法可用于以更直观的方式评估治疗结果。
杜艾灸疗法的应用前景广阔。杜经，被称为总督船，在调节气血在全身流动方面起着至关重要的作用。艾灸是一种传统的中式疗法，涉及在特定的穴位上燃烧艾蒿，以刺激经络并促进身体的自愈机制。与针灸相比，度艾灸是作用于体表的各种技术的结合，具有舒适和作用范围强而广的特点。此外，度艾灸疗法侧重于背部和脊柱区域，针对度经的通路。它可以增强人体的免疫系统，改善血液循环，缓解各种身心状况。该疗法已被证明其在治疗肌肉骨骼疾病、神经系统疾病、妇科疾病和心理健康问题等疾病方面的有效性。随着研究和技术的进步，Du-moxitsu疗法的应用有望进一步扩大。未来的研究可能会探索其在疼痛管理、减压、消化系统疾病和呼吸系统疾病等领域的潜力。传统知识和现代科学理解的结合可以使Du-moxitsu疗法更好地融入主流医疗保健实践。总之，Du-moxitsu 疗法在各个医疗保健领域的应用和整合方面具有广阔的前景。进一步的研究、临床试验以及传统中医从业者与现代医疗保健专业人员之间的合作对于释放其全部潜力至关重要。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
作者没有利益冲突需要声明。
Acknowledgments
本研究得到了国家自然科学基金项目（No.82174491）和齐鲁中医学院学术学校传承项目（No.陆维涵[2020]132）。感谢山东中医药大学实验动物中心为我们提供的实验条件。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
- Sieper, J., Poddubnyy, D.
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, İ, Öztürk, M. A., Akkoç, N.
- Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
- Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
- Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
- Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
- Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
- Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
- Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
- Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
- Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
- Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
- Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
- Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
- Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
- Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
- Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
- Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
- Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
- Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
- Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
- Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
- Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
- Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
- Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
- Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
- Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
- Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
- Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
- Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
- van der, H. D., et al. COAST-V study group. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
- Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
- Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).
