Summary
Denne artikkelen beskriver i detalj operasjonsprosedyrene og forholdsreglene som skal tas under Du-moxibustion ved behandling av Bekhterevs sykdom i eksperimentelle mus.
Abstract
Bekhterevs sykdom (AS) er en gradvis forverring og invalidiserende form for leddgikt som primært rammer det aksiale skjelettet. Denne sykdommen involverer hovedsakelig ryggraden og sacroiliac joint. Fusjon av ryggraden og sacroiliac joint kan forekomme i det senere stadium av sykdommen, noe som resulterer i spinal stivhet og kyfose, samt vanskeligheter med å gå, noe som alvorlig påvirker kvaliteten på arbeid og dagliglivsaktiviteter og pålegger en tung byrde på pasienten, familien og samfunnet. Økende oppmerksomhet har blitt betalt til ikke-farmakoterapi som en alternativ terapi for AS. Moxibustion er en gammel terapeutisk teknikk som brukes i tradisjonell kinesisk medisin (TCM). Du-moxibustion therapy, en unik og innovativ ekstern behandling utviklet på grunnlag av vanlig moxibustion, har en klar terapeutisk effekt på AS. Du-moxibustion kombinerer dyktig de kompatible teknikkene til TCM for å integrere meridianer, akupunkter, kinesisk urtemedisin og moxibustion. Denne artikkelen beskriver operasjonsprosedyrer og forholdsregler som skal tas under Du-moxibustion i eksperimentelle mus i detalj for å gi et eksperimentelt grunnlag for studiet av mekanismen for Du-moxibustion i behandlingen av AS.
Introduction
Bekhterevs sykdom (AS) er en gradvis forverring og invalidiserende form for leddgikt som primært rammer det aksiale skjelettet. Ifølge den siste epidemiologiske undersøkelsen lider ~ 0,01% -1,8% av mennesker i verden av denne tilstanden1, hvorav de fleste er unge menn (forholdet mellom mann og kvinne er ~ 2-3: 1) 2. Forekomsten av AS i den kinesiske befolkningen er 0, 2% -0, 4%. Denne sykdommen involverer hovedsakelig ryggraden og sacroiliac joint. Fusjon av ryggraden og sacroiliac joint kan forekomme i de senere stadier av sykdommen, noe som resulterer i spinal stivhet og kyfose, samt vanskeligheter med å gå, noe som alvorlig påvirker kvaliteten på arbeid og dagliglivsaktiviteter og pålegger en tung byrde på pasienten, familien og samfunnet1. For tiden er det ingen definitiv løsning for AS, og de gitte behandlingene, både farmakologiske og ikke-farmakologiske, fokuserer primært på å lindre smerte, bremse sykdomsprogresjon og øke livskvaliteten. I de senere år, fordi farmakoterapeutiske alternativer har vært svært begrenset3, har økende oppmerksomhet blitt betalt til ikke-farmakoterapi, som har blitt en alternativ terapi for AS. I Kina foretrekker pasienter ofte ekstern behandling som består av tradisjonell kinesisk medisin (TCM), som har mindre bivirkninger og stor bekvemmelighet under behandlingen.
Moxibustion er en gammel terapeutisk teknikk som brukes i TCM. Du-moxibustion er en ekstern behandlingsteknikk som består av "medisinert moxibustion med skum" på ryggradssegmentet av Du-meridianen. Det brukes hovedsakelig til behandling av AS og har vist sikkerhet og effektivitet. Sammenlignet med vanlig moxibustion har Du-moxibustion egenskapene til et bredt moxibustionområde, en stor moxa-kjegle, sterk ildkraft og høy temperatur4. En systematisk oversikt og metaanalyse tyder på at moxibustion er en effektiv komplementær behandling for AS5. En nylig studie bekreftet at de kliniske symptomene og noen inflammatoriske faktorer hos AS-pasienter ble forbedret ved moxibustion6. Studier har vist at Du-moxibustion kan øke hjerneinnholdet i β-endorfin og utøve en sentral analgetisk effekt7, nedregulere uttrykket av HLA-B27-genet 8 og forsinke tilbakefallshastigheten til AS. Du-moxibustion har også en forbedrende effekt på progresjonen av AS ved å redusere inflammatorisk indeks ESR (ESR) og nivåer av C-reaktivt protein (CRP), C-terminal peptid av type I kollagen (CTX-I) og Dickkopf1 protein (DKK1) 9,10.
En annen klinisk studie viste at Du-moxibustion kan ytterligere justere de uordnede T-celleundergruppene, Ig, og komplementere C3 for å balansere immunmekanismen11. Når det gjelder benmetabolisme, kan moxibustion hemme økningen av serum alkalisk fosfatase (ALP) og serumfosfor (S-P), øke serumkalsium (S-Ca), benmineraltetthet (BMD) og benstyrke12. Videre kan Du-moxibustion reparere spinalfunksjonen på flere punkter for å lindre tretthetssymptomer hos AS-pasienter13. Noen dyreforsøk har avslørt den potensielle mekanismen for moxibustion ved behandling av AS. En studie indikerte at moxibustion forbedret den generelle helsestatusen betydelig, reduserte nivåene av potetykkelse og reduserte nivåene av IL-1β, PGE2, IL-6 og TNF-α i ligamentvevsprøver i ryggraden. Analyse av metabolske veier knyttet de identifiserte metabolittene til TCA-syklusen, samt lipid-, aminosyre-, tarmflora- og purinmetabolisme14. En annen studie viste at moxibustion undertrykte uttrykket av proinflammatoriske cytokiner, IL-1β, TNF-α, IL-17 og IL-6; reduserte mRNA-nivåene av RANKL, RANK, ALP og OCN; og forbedret de histopatologiske egenskapene i AS-mus15.
Selv om disse studiene tyder på at moxibustion kan være effektiv i behandlingen av AS, er det behov for mer forskning for å bekrefte disse funnene og bestemme den optimale behandlingsprotokollen for moxibustion hos pasienter med AS. Vårt team opprettet og modifiserte moxibustion terapi basert på grunnleggende teori og praktisk drift av tradisjonell kinesisk moxibustion, som har blitt mye utført og anvendt i kinesisk klinisk praksis i over 35 år. Selv om det er få studier av høy kvalitet på behandling av AS ved Du-moxibustion, har indikasjonen ved behandling av AS blitt støttet av bevis. Imidlertid er mekanismen for behandling av AS med Du-moxibustion verdig videre studier. Dyreforsøk er en viktig metode for å utforske mekanismen for Du-moxibustion i behandlingen av AS. Den kliniske driften av Du-moxibustion er relativt moden, men brukes sjelden i studiet av mekanismen i dyreforsøk. Denne artikkelen beskriver i detalj operasjonen og forholdsregler som skal tas under Du-moxibustion ved behandling av AS eksperimentelle mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøk ble godkjent av Experimental Animal Welfare Ethics Review Committee ved Shandong University of Traditional Chinese Medicine (nr. SDUTCM20230831301).
1. Dyr forberedelse
- Bestem forsøksgruppene og antall dyr per gruppe på forhånd.
- Velg mannlige BALb / c-mus, hus dem ved en konstant temperatur på 22 ± 1 ° C, konstant fuktighet på 60 ± 5% og 12 timers dagsyklus lysmiljø.
2. Etablering av AS-musemodellen
MERK: AS-modellen ble indusert med bruskproteoglykan (PG), som er en klassisk modelleringsmetode 16,17,18,19,20,21. BALB / c stammemus ble gjentatte ganger immunisert med PG for å indusere tendinitt og spondylitt. Se materialfortegnelsen for detaljer relatert til materialene, reagensene og instrumentene som brukes i denne protokollen.
- Bruk en 200 μL pipette til å trekke 200 μL PG og CFA (eller IFA) inn i et 1,5 ml sentrifugerør. Rist forsiktig for å blande væsken i sentrifugerøret.
- Plasser sentrifugerøret i vevskvernen for homogenisering og inkuber deretter på is i 4 minutter. Gjenta 5x. Sett følgende parametere i vevskvernen: 60 Hz, sliping 30 s, intervall 10 s i totalt 6 sykluser.
- Trekk ut 0,2 ml emulgert PG-protein fra sentrifugerøret med en 1 ml sprøyte.
- Ta tak i og fest musen med venstre hånd. Legg musen i liggende stilling, hold hodet lavere enn halen for å forhindre skade på bukorganene når sprøyten settes inn.
- Steriliser magen med alkoholservietter med høyre hånd.
- Med sprøyten i høyre hånd, stikk nålen subkutant litt til venstre eller høyre for linea alba ventralis i nedre halvdel av abdomen.
- Trykk nålen 3-5 mm subkutant parallelt med midtbuklinjen og skyv deretter nålen inn i bukhulen i en 45° vinkel mot huden.
- Penetrer bukhinnen, trekk ut nålepluggen og injiser det emulgerte PG-proteinet langsomt.
3. Du-moxibustion
MERK: Forbered på forhånd de tre viktigste råvarene for Du-moxibustion (figur 1).
- Forbered moxa-kjegler. Ta fløyelen i hånden, med to håndflater vendt motsatt retning som utøver en vridningskraft for å gni fløyelen inn i en spindelform (figur 2)
- Skjær ingefæren i små biter og mos den i en juicepresse (figur 3). Filtrer ingefærpuréen gjennom bomullsgass. Skill ingefærjuice og ingefærgjørme fra ingefærpuréen for å forberede deg på neste trinn.
- Forbered 10 g ingefærgjørme og 20 ml ingefærjuice og legg dem i papirkopper for senere bruk.
- Vei 0,1 g TCM-pulver (en blanding av kanelpulver, krydderpulver, notopterygiumpulver, antharidinpulver og kunstig musk)22 og slip det i en morter.
- Plasser musene i anestesiinduksjonsboksen til anestesimaskinen og bedøv dem med en blanding av 2-3% isofluran og oksygen med en strømningshastighet på 2 l / min.
- Vurder dybden av anestesi ved å observere fraværet av en skremmende refleks i utgangspunktet og verifisere nivået av kirurgisk anestesi ved å sjekke for fravær av en pedalrefleks som svar på en mild tåklemme.
- Etter at musen har nådd kirurgisk planbedøvelse, ta den ut av esken og fest den på operasjonsbordet i utsatt stilling. Juster musens munn og nese med utløpet av bedøvelsen.
- Administrer anestesi via en maske festet til bedøvelsesmaskinen, hvorved isofluran og oksygen leveres via en ikke-rebreathing krets. Oppretthold anestesien og hold musen på en 37 °C varmepute under hele driftsprosedyren. Påfør smøremiddel på øynene for å forhindre uttørking.
- Finn akupunktene og identifiser stimuleringsområdet (figur 4).
- Barber håret på baksiden av musen til den kjøttfargede huden på baksiden av musen er sett. Sørg for at bredden på hårfjerning er ~ 1,5 cm og lengden er fra den syvende livmorhvirvelen til halevirvelen (figur 5A).
- Påfør den tilberedte ingefærsaften med en bomullsgass på det barberte området (figur 3).
- Dryss TCM-pulveret jevnt med en skrivepensel på midtlinjen på baksiden av musen og dekk det med morbærpapir (figur 5B-D).
- Lag en trapesformet ingefærkolonne 6 cm lang, 1,5 cm bred og 3 mm tykk med ingefærgjørme. Fest ingefærkolonnen på morbærpapiret (figur 5E).
- Lag et spor over midtlinjen på ingefærsøylen (figur 3), og plasser moxa-kjeglen på ingefærsøylen.
- Tenn moxa-kjeglen, plasser en ny moxa-kjegle etter at den forrige brenner ut. Kontroller fastheten til ingefærsøylen for å unngå å brenne musen, og brenn totalt tre kjegler (figur 5F).
- Etter brenning av moxa-kjeglene, tørk av ingefær og TCM-pulveret, og rengjør baksiden av musen. Avbryt anestesien på dette tidspunktet.
- La musen gjenvinne bevisstheten i et nytt bur med ubegrenset tilgang til mat og vann. Plasser buret på en oppvarmet pute for å hjelpe til med gjenopprettingsprosessen. Overvåk dyret til det gjenvinner tilstrekkelig bevissthet.
- Når musen er fullstendig gjenopprettet, bekreft tilstedeværelsen av høyrerefleksen før du returnerer den til sitt vanlige hus.
MERK: Under operasjonen er det nødvendig å overvåke musens mentale tilstand for å unngå svak pust. Forhindre skålding, men hold musene varme, og unngå blåmerker i klørne og halen.
4. Evaluering av leddgiktindeks (AI)
- Evaluer AI-poengsummen tre ganger: før modellering, etter modellering og etter behandling. Vurderingsstandardene er som følger: 0, ingen rødhet eller hevelse; 1, svak rødhet eller hevelse i noen få tær; 2, rødhet og hevelse i de fleste tå ledd og tær; 3, alvorlig rødhet og hevelse i føtter og under ankelleddet; og 4, rødhet og hevelse i føtter og ankelledd23.
- Beregn AI-poengsummene for alle fire potene, med en maksimumsverdi på 16.
5. Rotarod test
MERK: Rotarod-testen brukes til å vurdere motorisk koordinasjon og balanse ved å registrere tiden musene bruker på den roterende trommelen. Dette eksperimentet besto av tre forsøk med 20 minutters mellomrom. De offisielle testdataene ble registrert fra det tredje forsøket, der de to første fungerte som treningsøvelser.
- Plasser musene på roterende trommer som roterer under kontinuerlig akselerasjon fra 4 til 40 o / min over 300 s24.
- Mål latenstiden (tiden til musen faller av stangen). Sørg for polstring for å forhindre skade når den faller av.
6. Test av åpent felt (OFT)
MERK: OFT brukes til å evaluere tilstanden til autonom bevegelse, med sikte på å identifisere patologisk oppførsel. Fire firkantede åpne arenaer (50 cm x 50 cm x 40 cm) ble plassert sammen for å danne apparatet. Bunnen av boksen var delt inn i ni like firkanter.
- Kontroller bakgrunnsstøyen i laboratoriet til under 65 dB.
- Tørk av hele apparatet med 75% etanol før hver prøveversjon.
- Plasser alle musene i testrommet 1 time før testen for å la dem tilpasse seg miljøet.
- Sett musene i de firkantede åpne arenaene og la dem utforske i 10 minutter.
- Registrer total distanse og bevegelseshastighet i 10 minutter.
7. Eutanasi og prøvetaking
- Plasser musen i anestesiinduksjonsboksen og bedøv den med en blanding av 2-3% isofluran og oksygen med en strømningshastighet på 2 l/min. Når musen kommer inn i en tilstand av dyp anestesi bekreftet av mangel på pedalrefleks, overfør den til operasjonsbordet for vedlikeholdsanestesi.
- Ta tak i og fest musen med den ikke-dominerende hånden.
- Trykk lett på øyeområdet for å gjøre øyebollene overbelastet og stikker ut.
- Bruk saks til å trimme musens værhår for å forhindre hemolyse forårsaket av hår.
- Bekreft dybden av anestesi ved å sjekke for fravær av en pedalrefleks som svar på en tåklemme. Bruk tang til å gripe øyebollet og raskt fjerne det, slik at blodet kan strømme inn i et mikrosentrifugerør fra øyehulen.
MERK: Alternative blodinnsamlingsmetoder, for eksempel hjertepunktering, kan også brukes. - Når blodets drypphastighet senkes, trykk forsiktig på musens hjerteområde for å øke hastigheten på blodpumpingen og få mer blod. Deretter avlive musen ved hjelp av cervical dislokasjon.
- Hold benet rett over ankelleddet med tang i den ikke-dominerende hånden. Deretter klipper du benet rett over ankelleddet med saks.
8. Histologisk analyse
- Fordyp ankelprøvene i 4% paraformaldehyd i mer enn 24 timer. Avkalk i 10% EDTA (pH = 7,4) i 1 måned.
- Bløtlegg prøvene i 4% paraformaldehyd i 2 timer.
- Deretter suge prøvene i en gradient av økende etanolkonsentrasjoner (70%, 80%, 90%, 100%, 100%, 100%). Bløtlegg hver etanolkonsentrasjon i 1 time.
- Bløtlegg prøvene i xylen i 3 timer.
- Dypp ankelprøvene i parafin i 7 timer. Sett parafinblokkene til side i et kjøleskap på 4 °C.
- Skjær parafinblokker til en tykkelse på 6 μm ved hjelp av en halvautomatisk parafinseksjonsmaskin.
- Bløtlegg skivene i 4 x 5 min i xylen for å fullføre avvoksing.
- Bløtlegg skivene i en gradient av synkende etanolkonsentrasjoner (100%, 100%, 95%, 75%) i 2 minutter hver. Bløtlegg i destillert vann i 2 min.
- Flekk skivene med hematoksylin i 10 min og skyll med destillert vann i 5 s.
- Bløtlegg skivene i 30 s i differensieringsvæsken og skyll med destillert vann i 5 s.
- Flekk skivene med eosin i 1 min og skyll med destillert vann i 3 min.
- Bløtlegg skivene i en gradient av økende etanolkonsentrasjoner (80%, 95%, 100%, 100%) i 1 min hver. Bløtlegg xylen i 3 x 3 min og forsegl skivene25.
9. Enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA)
- Mål IL-17- og TNF-α-konsentrasjonene i plasma ved hjelp av de respektive settene i henhold til produsentens instruksjoner.
10. Statistisk analyse
- Uttrykk dataene som gjennomsnitt ± standardfeil for gjennomsnittet (SEM).
- Bestem signifikansen gjennom enveis variansanalyse (ANOVA) eller toveis gjentatte målinger ANOVA, etterfulgt av Bonferroni eller Tamhane T2s post hoc-tester.
- Vurder P < 0,05 for å være statistisk signifikant.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
PG-induserte modellmus utviklet symptomer på perifer artritt, karakterisert ved rødhet og hevelse i ekstremiteter og tær, og utviklet gradvis aksial artritt så tidlig som i uke 14, noe som er svært lik manifestasjonen av AS. Derfor ble AS-musemodellen ansett som vellykket hvis leddgiktindeksen (AI) var over 3 poeng 14 uker etter siste injeksjon22. Når musens poter virket hovne, ble Du-moxibustion-behandlingen utført en gang i uken for totalt 3x. Etter behandling ble musene avlivet ved cervikal dislokasjon under isofluran dypbedøvelse, blodet ble samlet og anklene ble skåret ut.
Effekter av Du-moxibustion på motorisk koodinering og autonom bevegelse
Bovine PG-indusert AS ble vedtatt som en modell for å observere effekten av Du-moxibustion ved Du-meridianen på motorisk koordinering. Initialt ble leddhevelsesscore brukt til å vurdere om modellen var vellykket, og motorisk koordinasjon og autonom bevegelse ble evaluert ved hjelp av rotarod-testen og OFT.
Evaluering av AI bestemte alvorlighetsgraden av perifer leddgikt. Etter modellering viste toveis gjentatte målinger ANOVA at leddhevelsesskårene i modell- og Du-moxibustion-gruppene økte signifikant sammenlignet med de i kontrollgruppen før Du-moxibustion (P < 0,01; Figur 6A). Du-moxibustion behandling reduserte leddhevelsesscore sammenlignet med modellgruppen etter Du-moxibustion (P < 0,05; Figur 6A).
Rotarod-testen ble brukt til å evaluere motorisk koordinasjon og balanse. Toveis repeterte mål ANOVA viste signifikante forskjeller over tid (F = 13,928, P = 0,000 < 0,05) og interaksjonseffekter av tid og gruppe (F = 12,583, P = 0,000 < 0,05). Etter modellering var latenstiden til kontrollgruppen ikke forskjellig fra den før modellering. Etter modellering ble imidlertid latenstidene til modell- og Du-moxibustion-gruppene signifikant redusert sammenlignet med de i kontrollgruppen (P < 0,01; figur 6B), og det var ingen signifikante forskjeller mellom modellgruppen og Du-moxibustion-gruppen (P > 0,05; Figur 6B). Etter behandling økte latenstiden til Du-moxibustion-gruppen signifikant sammenlignet med modellgruppen (P < 0,05; Figur 6B). Disse resultatene indikerte at Du-moxibustion var effektiv for å forbedre motorisk koordinasjon i AS-mus.
OFT ble utført for å oppdage autonom bevegelse. Parametrene ble samlet inn og analysert automatisk ved hjelp av programvaren (figur 6C-E); Den totale avstanden og gjennomsnittshastigheten ble hovedsakelig observert i denne studien. Det var ingen signifikant forskjell i total distanse og gjennomsnittshastighet mellom gruppene før modellering (P > 0,05; Figur 6C,D). Etter modellering ble den totale avstanden og gjennomsnittshastigheten betydelig redusert sammenlignet med kontrollgruppen (P < 0,05; Figur 6C,D). Etter behandling økte den totale avstanden og gjennomsnittshastigheten til Du-moxibustion-gruppen signifikant sammenlignet med modellgruppen (P < 0,05; Figur 6C,D). Disse resultatene indikerte at Du-moxibustion var effektiv for å forbedre autonom bevegelse i AS-mus.
Effekter av Du-moxibustion på ankelleddspatologi
HE-farging ble brukt til å observere de patologiske forandringene i ankelleddet. I kontrollgruppen var det ingen skade på synoviumstrukturen, ingen stuvning i synovium og ingen åpenbar inflammatorisk celleinfiltrasjon og nekrose. I modellgruppen ble det imidlertid observert synoviumhyperplasi og infiltrasjon i leddhulen, i tillegg til inflammatorisk celleinfiltrasjon og vevsødem. Kombinert med AI-evaluering ble det bevist at AS-modellen var vellykket etablert. Sammenliknet med modellgruppen var synovium hos mus i Du-moxibustion-gruppen mer intakt, interstitielt ødem var redusert og leddbrusken var relativt intakt (figur 7).
Effekter av Du-moxibustion på plasma IL-17 og TNF-α nivåer
ELISA ble utført for å måle IL-17 og TNF-α i plasma. Plasmanivåene IL-17 og TNF-α i modellgruppen var signifikant økt sammenlignet med kontrollgruppen (P < 0,01; Figur 6F,G). Du-moxibustion reduserte plasma IL-17 og TNF-α nivåer (P < 0,05; Figur 6F,G).
Figur 1: Råvarene som trengs for Du-moxibustion. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Lage en moxa-kjegle. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Forbered ingefærvann og lag en trapesformet ingefærkolonne. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Plassering av GV14 og GV2 i mus. (A) GV14 lokalisert ved den subspinøse prosessen til den syvende livmorhvirvelen; GV2 ligger i hiatus sakralkanalen. (B) Skjematisk diagram over Du moxibustion på musen. (C) Stimulert område av Du moxibustion. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 5: Operasjonsprosedyre for Du-moxibustion i mus. (A) Barber håret og smør ingefærsaften på musen i utsatt stilling. (B,C) Dryss TCM pulver jevnt. (D) Dekk pulveret med morbærpapir. (E) Fest ingefærkolonnen på morbærpapiret godt. (F) Sett en moxa kjegle på ingefær kolonnen; Tenn den deretter. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 6: Effekter av Du-moxibustion på motorisk koordinasjon, autonom bevegelse og IL-17 og TNF-α nivåer. (A) Leddhevelsen scorer hos mus. (B) Latenstiden i rotarodtesten. (VG Nett) Total avstand, gjennomsnittlig hastighet og spordiagram for OFT. (F) IL-17 nivåer i plasma. (G) TNF-α nivåer i plasma. Verdier uttrykkes som gjennomsnitt ± SEM (n = 6). ##P < 0,01, #P < 0,05 versus kontrollgruppen; $$P < 0,01, $P < 0,05 versus modellgruppen. Forkortelser: IL = interleukin; TNF = tumor nekrose faktor; OFT = åpen felttest. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 7: HE-farging av ankelleddet. (A) Leddhulen var glatt uten inflammatorisk infiltrasjon i kontrollgruppen. (B) I modellgruppen ble det observert synoviumhyperplasi og infiltrasjon i leddhulen. (C) I Du-moxibustion-gruppen var leddhulen til mus glatt og ødem ble lindret. Skalastenger = 200 μm. Forkortelse: HE = hematoksylin-eosin. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
AS er klinisk manifestert som rygg-, lumbal- og leddhevelsessmerter, og spinal deformitet og leddstivhet kan forekomme i alvorlige tilfeller26. Tidlig diagnose og behandling kan forbedre livskvaliteten, redusere funksjonshemming og forbedre prognosene for pasienter med AS. Ifølge tradisjonell kinesisk medisin (TCM) antas AS å være forårsaket av mangel på Yang i nyrene og Du-meridianen, samt en opphopning av kald ondskap internt. TCM mener at moxibustion, basert på begrepet meridianer, kan generere Qi som varmer kroppens overflate. Denne Qi reiser deretter nedover langs meridianene og akupunktene. I The Inner Canon of Huangdi (et veldig klassisk og viktig TCM-mesterverk) er det registrert at "den syke Du-meridianen blir behandlet." Som AS ligger i Du-meridianen, brukes stimulering av Du-meridianen som et terapeutisk punkt. Du-meridianen anses å være havet av Yang-kanaler der Yang Qi når sitt høydepunkt. Moxibustion på Du-meridianen kan supplere Yang qi, aktivere effekten av Du-meridianen, og justere oppvarmingseffekten av nyre Yang, det vil si forbedre immunreguleringsfunksjonen til vestlig medisin.
Fra perspektivet til vestlig medisin spiller ryggmargen en viktig rolle i overføring av nevral informasjon. Du moxibustion, som virker på inngangen og utgangen av spinal nerverøtter, kan påvirke funksjonen og reguleringsmekanismen i nervesystemet gjennom regulering av nevrotransmittere. På 1990-tallet ble det påvist at Du-moxibustion økte innholdet av β-endorfiner i hypothalamus hos rotter, og dermed hadde en sentral analgetisk effekt7. I tillegg er entesitt en vanlig komplikasjon av AS, preget av vedvarende smerte og muskelstivhet, noe som kan påvirke ledd- og kroppsbevegelse når det er alvorlig. Som en TCM-behandlingsmetode som er klinisk validert, kan Du-moxibustion effektivt lindre betennelse, fremme vevsreparasjon og forbedre entesitt ved behandling av AS.
Spesielt er effekten av akupunktur og moxibustion hovedsakelig reflektert i følgende aspekter. For det første fremmer de blodsirkulasjonen og absorpsjonen av betennelse. Du-moxibustion stimulerer blodsirkulasjonen og metabolismen i vevet rundt ryggraden gjennom oppvarmingseffekten og fremmer absorpsjonen av betennelse og vevsreparasjon, og reduserer dermed graden av betennelse og smerte ved senefestebetennelse. For det andre forbedrer de muskel- og ligamentspenningen. Den stimulerende effekten av Du-moxibustion kan forbedre muskelspenningen rundt ryggraden, slappe av det herdede myke vevet, fremme aktiviteten til ryggleddene og redusere smerte og stivhet forårsaket av muskelspenning og ligamentstrekking. Oppsummert kan Du-moxibustion, som en tilleggsbehandling, omfattende regulere aktivitetene til kroppens nervøse, immun- og sirkulasjonssystemer ved å virke på ryggraden, noe som gjør kroppen mer balansert som helhet.
Inflammasjon er den viktigste manifestasjonen av AS27. TNF-α er et multieffektorcytokin og inflammatorisk faktor produsert under stimulering av mononukleære makrofager28. Aktiviteten av ALP og kollagensyntese kan hemmes av TNF-α, noe som resulterer i bentap og brusk ødeleggelse29. I de senere år har studier funnet at IL-17 spiller en viktig rolle i patogenesen av AS, som har blitt fullstendig demonstrert i en gjennomgang30. IL-17 kan direkte virke på osteoblaster, fremme ekspresjonen av nukleær transkripsjonsfaktor-κB (NF-κB) reseptoraktivatorligand (RANKL), og fremme den robuste generasjonen av osteoklaster. Samtidig påvirker IL-17 også mesenkymale stamceller (MSC), induserer deres spredning og fremmer deres differensiering i osteoblaster31. Kenna,32 et al., fant at nivået av IL-17 i perifert blod hos AS-pasienter økte med nesten to ganger sammenlignet med friske kontroller. Studien antyder at IL-17-antagonister kan være et nytt alternativ for AS-pasienter som ikke reagerer godt på TNF-α-antagonister33. En klinisk studie viste at et doseringsregime med IL-17-antagonister var bedre enn placebo når det gjaldt å forbedre tegn og symptomer på radiografisk aksial spondylartritt hos pasienter34. Resultatene av denne studien viste at plasmanivåene av TNF-α og IL-17 i modellgruppen var signifikant høyere enn i kontrollgruppen, og plasmanivåene av TNF-α og IL-17 ble signifikant redusert etter Du-moxibustion-behandling.
Du-moxibustion terapi bruker dyktig de kompatible teknikkene til TCM for å integrere meridianer, akupunkter, kinesisk urtemedisin og moxibustion. Råmaterialene til Du-moxibustion terapi inkluderte hovedsakelig moxa fløyel, ingefær og TCM pulver. Fra TCMs perspektiv har moxa fløyel, et bearbeidet produkt av burot, funksjonen til å aktivere sikkerheter, fjerne kulde og lindre smerte. Ingefær spiller en rolle i å lindre ytre symptomer og fjerne kulde. Moderne forskning viser også at ingefær har antiinflammatoriske og smertestillende egenskaper35. Tørk huden med ingefærjuice før behandling bidrar til å åpne porene og fremme transdermal permeasjon36, i tillegg til å hjelpe TCM-pulveret til å feste seg til huden. Den trapesformede ingefærkolonnen er godt festet på baksiden for å gi en solid base for moxa-kjeglen. Etter moxa kjeglebrenning, virker effekten av ildkraft, ingefær og TCM-pulver sammen på Du-meridianen. I lys av patogenesen av Yang-mangel i denne sykdommen, virker Du-moxibustion direkte på sykdomsstedet, oppvarmer meridianene, sprer kulde, supplerer Yang Qi og essens, fremmer blodsirkulasjonen og balanserer Yin og Yang for å behandle roten til sykdommen.
Når du utfører Du-moxibustion, bør flere detaljer vurderes. For det første er operasjonsstedet for Du-moxibustion fast, fra Dazhui-punktet (GV14) til Yaoshu-punktet (GV2) (anatomisk fra den 7. cervikale ryggradspinøse prosessen til halevirvelen, inkludert hele ryggraden), noe som stemmer overens med forekomststedet for AS (figur 4). For det andre er fuktigheten og tykkelsen på ingefær viktig. Overflødig ingefærjuice må presses ut etter at ingefæren er behandlet i ingefærgjørme, slik at ingefærslammet ikke har noen granulær følelse, og tykkelsen er passende å bli gjort til trapesformet ingefærkolonne. Høy luftfuktighet og fuktighet i ingefærslammet kan lett hindre penetrasjon av moxibustionbrann og redusere mengden moxibustionstimulering. Hvis ingefærråmaterialet er for tørt og partiklene er for store, er det vanskelig å lage trapesformet ingefærkolonne, noe som fører til rask varmepenetrasjon og skylling av huden. For det tredje bør størrelsen og fastheten til moxa-kjeglen vurderes. Moxa-kjegler som brukes til moxibustion hos mus er ~ 4 cm lange og 0,5 cm i diameter og bør være tette på tidspunktet for tilberedning. En test for tetthet er når kjeglen ikke rakner selv etter å ha blitt droppet på en overflate. Hvis moxa-kjeglen ikke er kompakt nok, vil det føre til en reduksjon i mengden moxa fløyel, kortere brenntid og en reduksjon i ildkraft. For det fjerde, når du tenner moxa-kjeglen, bør hodet, midten og halen på moxa-kjeglen tennes med fin røkelse for å få moxa-kjeglen til å brenne sakte for å oppnå den nærende effekten av flo og fjære. For det femte er musk en viktig ingrediens i det medisinske pulveret av moxibustion. Den andre dagen etter moxibustion skal det være krystallklare blemmer som små perler på Du-meridianen.
Et stort antall kliniske studier har bekreftet den bestemte effekten av Du-moxibustion ved behandling av AS 4,5,6. Forskningen på virkningsmekanismen i dyreforsøk går imidlertid sakte. Gjennom forskning og innovasjon har mange års erfaring i driften av Du-moxibustion ført oss til å undersøke bruken i museforsøk. Dette papiret beskriver i detalj operasjonsprosedyrene og forholdsreglene for Du-moxibustion ved behandling av AS i eksperimentelle mus. I tillegg ble effekten av moxibustion på motorisk koordinering og plasmanivåene av TNF-α og IL-17 i AS-mus observert. Denne studien ga det mest grunnleggende eksperimentelle grunnlaget for studiet av mekanismen for Du-moxibustion i behandlingen av AS. Det er fortsatt noen begrensninger ved denne studien. For eksempel, i fremtidige studier, vil vi være oppmerksom på evalueringen av forskjellige parametere som placebo-moxibustion, dose, rekkevidde og behandlingstid for å oppnå de mest effektive kombinasjonsordningene. I senere studier kan avbildningsmetoder brukes til å evaluere behandlingsresultatene på en mer intuitiv måte.
Søknadsutsiktene for Du-moxibustion terapi er lovende. Du-meridianen, kjent som guvernørfartøyet, spiller en avgjørende rolle i å regulere strømmen av Qi og blod gjennom hele kroppen. Moxibustion, en tradisjonell kinesisk terapi, innebærer brenning av burot på spesifikke akupunkter for å stimulere meridianene og fremme kroppens selvhelbredende mekanisme. Sammenlignet med akupunktur er Du-moxibustion en kombinasjon av ulike teknikker som virker på kroppsoverflaten, som har egenskapene til komfort og et sterkt og bredt spekter av handlinger. Videre fokuserer Du-moxibustion terapi på ryggen og spinalområdet, rettet mot Du meridianens vei. Det kan forbedre kroppens immunsystem, forbedre blodsirkulasjonen og lindre ulike fysiske og mentale forhold. Terapien har vist sin effektivitet i behandling av sykdommer som muskel- og skjelettlidelser, nevrologiske tilstander, gynekologiske lidelser og psykiske problemer. Med fremskritt innen forskning og teknologi, er anvendelsen av Du-moxibustion terapi forventes å utvide ytterligere. Fremtidige studier kan utforske potensialet på områder som smertebehandling, stressreduksjon, fordøyelsessykdommer og respiratoriske forhold. Kombinasjonen av tradisjonell kunnskap og moderne vitenskapelig forståelse kan føre til bedre integrering av Du-moxibustion terapi i mainstream helsepraksis. Avslutningsvis har Du-moxibustion terapi stort løfte om anvendelse og integrering i ulike helsefelt. Videre forskning, kliniske studier og samarbeid mellom tradisjonelle kinesiske medisinutøvere og moderne helsepersonell er avgjørende for å låse opp sitt fulle potensiale.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter å oppgi.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av det generelle programmet til National Natural Science Foundation of China (No.82174491) og Qilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project (nr. Lu Weihan [2020]132). Takk til Laboratory Animal Center of Shandong University of Traditional Chinese Medicine for å gi oss eksperimentelle forhold.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
- Sieper, J., Poddubnyy, D.
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, İ, Öztürk, M. A., Akkoç, N.
- Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
- Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
- Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
- Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
- Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
- Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
- Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
- Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
- Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
- Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
- Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
- Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
- Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
- Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
- Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
- Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
- Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
- Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
- Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
- Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
- Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
- Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
- Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
- Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
- Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
- Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
- Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
- Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
- van der, H. D., et al. COAST-V study group. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
- Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
- Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).
