Summary
この論文では、実験マウスの強直性脊椎炎の治療におけるDu-hoxisulation中に取るべき手術手順と注意事項について詳しく説明します。
Abstract
強直性脊椎炎(AS)は、主に軸骨格に影響を与える関節炎の漸進的に悪化し、障害となる形態です。この病気は主に脊椎と仙腸関節に関係しています。病気の後期には脊椎と仙腸関節の癒合が起こり、脊椎のこわばりや後弯症、歩行困難などを引き起こし、仕事や日常生活の質に深刻な影響を与え、患者や家族、社会に大きな負担をかけています。ASの代替療法として、非薬物療法への注目が高まっています。お灸は、伝統的な中国医学(TCM)で使用される古代の治療法です。Du-moxibustion Therapyは、通常のお灸をベースに開発されたユニークで革新的な外用療法であり、ASに対して明確な治療効果があります。Du-hoxibustionは、TCMの互換性のある技術を巧みに組み合わせて、経絡、ツボ、漢方薬、およびお灸を統合します。本稿では、AS治療におけるDu-灸のメカニズムを研究するための実験的基礎を提供するために、実験マウスにおけるDu-hoxibustionの操作手順と注意事項を詳細に記述する。
Introduction
強直性脊椎炎(AS)は、主に軸骨格に影響を与える関節炎の漸進的に悪化し、障害となる形態です。最新の疫学調査によると、世界の人々の~0.01%-1.8%がこの症状に苦しんでおり1、そのほとんどが若い男性です(男女比は~2-3:1)2。中国人人口におけるASの発生率は0.2%〜0.4%です。この病気は主に脊椎と仙腸関節に関係しています。病気の後期には脊椎と仙腸関節の癒合が起こり、脊椎のこわばりや後弯症、歩行困難などを引き起こし、仕事や日常生活の質に深刻な影響を与え、患者や家族、社会に大きな負担をかけています1。現在、ASに対する決定的な解決策はなく、提供される治療法は、薬理学的および非薬理学的の両方で、主に痛みの緩和、疾患の進行の遅延、および生活の質の向上に焦点を当てています。近年、薬物療法の選択肢は非常に限られているため3、ASの代替療法である非薬物療法への注目が高まっています。中国では、患者はしばしば伝統的な漢方薬(TCM)からなる外用療法を好むが、これは副作用が軽く、治療中の利便性が高い。
灸は、中医学で使用される古代の治療技術です。杜灸は、杜経絡の脊椎部分に「泡を使った薬用灸」からなる外用治療技術です。主にASの治療に使用され、安全性と有効性が示されています。杜灸は、通常の灸と比較して、灸面積が広く、灸錐が大きく、火力が強く、高温であるという特徴があります4。システマティックレビューとメタアナリシスは、灸がAS5の効果的な補完療法であることを示唆しています。最近の研究では、AS患者の臨床症状といくつかの炎症因子が灸によって改善されたことが確認されました6。研究によると、Du-hoxibustionはβエンドルフィンの脳内含有量を増加させ、中枢鎮痛効果を発揮し7、HLA-B27遺伝子8の発現をダウンレギュレートし、ASの再発率を遅らせることができることが明らかになっています。また、Du-hoxibustionは、炎症性指数ESR(ESR)とC反応性タンパク質(CRP)、I型コラーゲンのC末端ペプチド(CTX-I)、およびDickkopf1タンパク質(DKK1)のレベルを低下させることにより、ASの進行を改善する効果があります9,10。
別の臨床研究では、Du-hoxibustionが、免疫機構のバランスをとるために、無秩序なT細胞サブセットであるIgと補体C3をさらに調整できることが示されました11。骨代謝に関しては、灸は血清アルカリホスファターゼ(ALP)と血清リン(S-P)の上昇を抑制し、血清カルシウム(S-Ca)、骨密度(BMD)、骨強度を増加させることができます12。さらに、Du-hoxibustionは、AS患者の倦怠感症状を和らげるために、複数のポイントで脊椎機能を修復することができます13。いくつかの動物実験では、ASの治療におけるお灸の潜在的なメカニズムが明らかになっています。ある研究では、灸が全体的な健康状態を有意に改善し、足の厚さのレベルを下げ、脊椎の靭帯組織サンプル中のIL-1β、PGE2、IL-6、およびTNF-αのレベルを低下させることが示されました。代謝経路分析により、同定された代謝物は、脂質、アミノ酸、腸内細菌叢、プリン代謝と同様にTCAサイクルに関連づけられました14。別の研究では、灸が炎症誘発性サイトカイン、IL-1β、TNF-α、IL-17、およびIL-6の発現を抑制することが示されました。 RANKL、RANK、ALP、および OCNのmRNAレベルを低下させました。ASマウスの病理組織学的特徴を改善した15。
これらの研究は、お灸がASの治療に有効である可能性を示唆しているが、これらの知見を確認し、AS患者の灸に対する最適な治療プロトコルを決定するには、さらなる研究が必要である。私たちのチームは、35年以上にわたって中国の臨床現場で広く実施され、適用されてきた伝統的な中国のお灸の基礎理論と実践的な操作に基づいて、灸療法を作成および修正しました。Du-hoxibustionによるASの治療に関する質の高い研究はほとんどありませんが、ASの治療における適応症は証拠によって裏付けられています。しかし、Du-duxibustionでASを治療するメカニズムは、さらなる研究に値します。動物実験は、ASの治療におけるDu-hoxibustionのメカニズムを探るための重要な方法です。Du-hoxibustionの臨床操作は比較的成熟していますが、動物実験でのメカニズムの研究に使用されることはめったにありません。本稿では、AS実験マウスの治療におけるDu-moxibustionの操作と注意点について詳細に述べる。
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Protocol
すべての動物実験は、山東中医薬大学の実験動物福祉倫理審査委員会(No.SDUTCM20230831301)です。
1.動物の調製
- 実験グループとグループごとの動物数を事前に決定します。
- 雄のBALb/cマウスを選択し、22±1°Cの一定温度、60±5%の一定湿度、および12時間の日周期の光環境で飼育します。
2. ASマウスモデルの確立
注:ASモデルは、古典的なモデリング方法である軟骨プロテオグリカン(PG)で誘導されました16、17、18、19、20、21。BALB/c系統マウスにPGを繰り返し免疫し、腱炎と脊椎炎を誘発した。このプロトコルで使用される材料、試薬、および機器の詳細については、 材料表 を参照してください。
- 200 μLのピペットを使用して、200 μLのPGおよびCFA(またはIFA)を1.5 mLの遠心分離チューブに吸い込みます。静かに振とうして、遠心分離管内の液体を混合します。
- 遠心分離チューブを組織粉砕機に入れて均質化した後、氷上で4分間インキュベートします。組織グラインダーで次のパラメータを設定します: 60 Hz、粉砕30秒、間隔10秒 、合計 6サイクル。
- 1 mLのシリンジで遠心分離管から0.2 mLの乳化PGタンパク質を抽出します。
- 左手でマウスをつかんで固定します。マウスを仰臥位に置き、注射器を挿入したときに腹部臓器が損傷するのを防ぐために、頭を尾よりも低く保ちます。
- 右手でアルコール綿棒で腹部を消毒します。
- 注射器を右手に持って、腹部の下半分の腹側線の左右に針をわずかに皮下に挿入します。
- 針を中腹部線と平行に皮下3〜5mm押してから、針を皮膚に対して45°の角度で腹腔に押し込みます。
- 腹膜を貫通し、針プラグを抜いて、乳化したPGタンパク質をゆっくりと注入します。
3.デュお灸
注:Du-moxibustionの最も重要な3つの原材料を事前に準備します(図1)。
- お灸コーンを準備します。ベルベットを手に持ち、2つの手のひらを反対方向に向けてねじる力を加え、ベルベットを紡錘形にこすります(図2)
- 生姜を細かく切り、ジューサーでピューレにします(図3)。生姜のピューレを綿ガーゼでろ過します。生姜ジュースと生姜泥を生姜ピューレから分離して、次のステップの準備をします。
- 生姜泥10gと生姜ジュース20mLを用意し、後で使用するために紙コップに入れます。
- 0.1 gのTCM粉末(シナモン粉末、クローブ粉末、ノトプテリギウム粉末、アンタリジン粉末、人工ムスクの混合物)22 を秤量し、乳鉢で粉砕します。
- マウスを動物麻酔器の麻酔誘導ボックスに入れ、2〜3%イソフルランと酸素の混合物で2L / minの流量で麻酔します。
- 最初に驚愕反射がないことを観察して麻酔の深さを評価し、つま先を軽くつまむことに反応してペダル反射がないことを確認して外科的麻酔のレベルを確認します。
- マウスが手術平面麻酔に達したら、箱から取り出し、手術台に腹臥位で固定します。マウスの口と鼻を麻酔薬の出口に合わせます。
- 麻酔器に取り付けられたマスクを介して麻酔を投与し、そこからイソフルランと酸素が非再呼吸回路を介して供給されます。手術手順全体を通して、麻酔を維持し、マウスを37°Cの加熱パッドの上に置いたままにします。乾燥を防ぐために目に潤滑剤を塗布します。
- ツボの位置を特定し、刺激領域を特定します(図4)。
- マウスの背中の肌色の皮膚が見えるまで、マウスの背中の毛を剃ります。脱毛の幅が~1.5cmで、長さが第7頸椎から尾椎までであることを確認してください(図5A)。
- 準備した生姜ジュースを綿ガーゼで削った部分に塗ります(図3)。
- マウスの背面の中央線に筆記筆でTCMパウダーを均等に振りかけ、桑紙で覆います(図5B-D)。
- 長さ6cm、幅1.5cm、厚さ3mmの台形の生姜柱を生姜泥で作ります。生姜柱を桑紙に固定します(図5E)。
- 生姜柱の正中線の上に溝を作り(図3)、生姜柱の上にお灸を置きます。
- お灸コーンに火をつけ、前のお灸が燃え尽きた後に新しいお灸コーンを配置します。マウスの火傷を防ぐために生姜柱の硬さを確認し、合計3つのコーンを燃やします(図5F)。
- お灸を燃やした後、生姜とTCMパウダーを拭き取り、マウスの背面を清掃します。この時点で麻酔を中止します。
- ネズミが意識を取り戻すのを、餌と水に制限のない新しいケージに入れます。ケージを加熱パッドの上に置き、回復プロセスを支援します。動物が十分な意識を取り戻すまで監視します。
- マウスが完全に回復したら、矯正反射の存在を確認してから、通常のハウジングに戻します。
注:手術中は、呼吸が弱くならないようにマウスの精神状態を監視する必要があります。やけどを防ぎますが、マウスを暖かく保ち、爪と尾の打撲傷を避けてください。
4.関節炎指数(AI)の評価
- AI スコアを、モデリング前、モデリング後、処理後の 3 回評価します。評価基準は次のとおりです:0、赤みや腫れはありません。1、いくつかのつま先にわずかな発赤または腫れ。2、ほとんどのつま先の関節とつま先の発赤と腫れ。3、足と足首関節の下の深刻な発赤と腫れ。4、足と足首関節の発赤と腫れ23。
- 4 つの足すべての AI スコアを計算し、最大値は 16 です。
5. Rotarodテスト
注:ロータロッドテストは、マウスが回転ドラムに費やす時間を記録することにより、運動の協調とバランスを評価するために使用されます。この実験は、20分間隔で区切られた3つの試行で構成されていました。公式の試験データは3回目の試験で記録され、最初の2回は訓練用として使われた。
- 300秒24で4〜40rpmの連続加速で回転する回転ドラムにマウスを置きます。
- レイテンシー時間(マウスがロッドから落ちるまでの時間)を測定します。脱落時の怪我を防ぐために、パッドを用意してください。
6. オープンフィールドテスト(OFT)
注:OFTは、自律神経運動の状態を評価するために使用され、病理学的行動を特定することを目的としています。4つの正方形のオープンフィールドアリーナ(50 cm x 50 cm x 40 cm)を一緒に配置して装置を形成しました。箱の底は9つの等しい正方形に分割されました。
- 実験室のバックグラウンドノイズを65dB未満に制御します。
- 各試験の前に、装置全体を75%エタノールで拭いてください。
- すべてのマウスを試験の1時間前に試験室に置き、環境に適応できるようにします。
- ネズミを四角いオープンフィールドアリーナに置き、10分間探索させます。
- 10分間の合計距離と移動速度を記録します。
7. 安楽死と検体採取
- マウスを麻酔誘導ボックスに入れ、2〜3%のイソフルランと酸素の混合物で2 L / minの流量で麻酔します。マウスがペダル反射の欠如によって確認された深い麻酔の状態に入ったら、維持麻酔のために手術台に移します。
- 利き手ではない方の手でマウスをつかんで固定します。
- 目の周りを軽く押すと、眼球がうっ血して突出します。
- ハサミを使用してマウスのひげを切り取り、毛による溶血を防ぎます。
- つま先をつまんだときにペダル反射がないことを確認して、麻酔の深さを確認します。鉗子を使用して眼球をつかみ、すばやく取り除き、眼窩から微量遠心チューブに血液を流します。
注:心臓穿刺などの代替採血方法も使用できます。 - 血液の滴出速度が遅くなったら、マウスの心臓部分を軽く押して血液の送り出しを速め、より多くの血液を得ます。次に、子宮頸部脱臼を使用してマウスを安楽死させます。
- 利き手ではない方の手で鉗子を使って、足首関節のすぐ上で脚を持ちます。次に、足首関節のすぐ上の脚をハサミで切ります。
8.組織学的分析
- 足首の標本を4%パラホルムアルデヒドに24時間以上浸します。10%EDTA(pH = 7.4)で1ヶ月間脱灰します。
- 検体を4%パラホルムアルデヒドに2時間浸します。
- 次に、エタノール濃度を上げるグラジエント(70%、80%、90%、100%、100%、100%)に検体を浸します。各エタノール濃度を1時間浸します。
- 試料をキシレンに3時間浸します。
- 足首の標本をパラフィンに7時間浸します。パラフィンブロックを4°Cの冷蔵庫に置いておきます。
- 半自動パラフィン切片化機を使用して、パラフィンブロックを6μmの厚さにスライスします。
- スライスをキシレンに4 x 5分間浸して、脱ワックスを完了します。
- スライスをエタノール濃度が下がるグラジエント(100%、100%、95%、75%)にそれぞれ2分間浸します。蒸留水に2分間浸します。
- スライスをヘマトキシリンで10分間染色し、蒸留水で5秒間すすぎます。
- スライスを分化液に30秒間浸し、蒸留水で5秒間すすぎます。
- スライスをエオシンで1分間染色し、蒸留水で3分間すすぎます。
- エタノール濃度(80%、95%、100%、100%)をそれぞれ1分間ずつグラジエントに浸します。キシレンに3 x 3分間浸し、スライス25を密封します。
9. 酵素結合免疫吸着法(ELISA)
- 血漿中のIL-17およびTNF-α濃度は、メーカーの指示に従って、それぞれのキットを使用して測定します。
10. 統計解析
- データを平均±平均の標準誤差(SEM)として表します。
- 一元配置分散分析 (ANOVA) または二元配置反復測定 ANOVA と、それに続く Bonferroni または Tamhane T2 の事後検定によって有意性を判断します。
- P < 0.05 が統計的に有意であると考えてください。
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Representative Results
PG誘発モデルマウスは、四肢や足の指の発赤や腫れを特徴とする末梢関節炎の症状を呈し、早くも14週目には徐々に軸性関節炎を発症したが、これはASの症状と非常によく似ていた。したがって、ASマウスモデルは、最後の注射から14週間後に関節炎指数(AI)が3ポイントを超えていれば成功したと見なされました22。マウスの足が腫れているように見えたら、週に1回、合計3回、Du-hoxibustion治療を行いました。治療後、マウスをイソフルラン深部麻酔下で子宮頸部脱臼により安楽死させ、採血し、足首を切除した。
Du-hoxibustionが運動協調と自律神経運動に及ぼす影響
ウシPG誘発ASをモデルとして採用し、Du経絡におけるDu-hoxibustionが運動協調に及ぼす影響を観察した。まず、関節の腫脹スコアを用いてモデルが成功したかどうかを評価し、運動協調運動と自律神経運動をロータロッドテストとOFTを用いて評価しました。
AIの評価により、末梢関節炎の重症度が判定されました。モデリング後、二元配置反復測定ANOVAにより、モデル群とDu-灸群の関節腫脹スコアは、Du-灸前の対照群と比較して有意に増加したことが明らかになりました(P < 0.01; 図6A)。Du-hoxibusting治療は、Du-hoxibusting後のモデル群と比較して関節腫脹スコアを低下させました(P < 0.05; 図6A)。
ロータロッドテストは、運動協調とバランスを評価するために採用されました。二元配置反復測定ANOVAは、経時的な有意差(F = 13.928、P = 0.000 < 0.05)と、時間とグループの交互作用効果(F = 12.583、P = 0.000 <0.05)を明らかにしました。モデリング後、対照群の待ち時間はモデリング前と変わらなかった。しかし、モデリング後、モデル群とDu-hoxibustion群の潜伏時間は、対照群と比較して有意に短縮されました(P < 0.01; 図6B)、モデル群とDu-hoxibustion群の間に有意差は認められなかった(P > 0.05; 図6B)。治療後、Du-moxibustion群の潜伏時間はモデル群と比較して有意に増加しました(P < 0.05; 図6B)。これらの結果から、Du-moxibustionはASマウスの運動協調運動の改善に有効であることが示唆された。
自律神経運動を検出するためにOFTを実施しました。パラメータは、ソフトウェアを使用して自動的に収集および分析されました(図6C-E)。この研究では、主に総距離と平均速度が観測されました。モデリング前のグループ間で、総距離と平均速度に有意差はありませんでした(P > 0.05;図6C、D)。モデリング後、総距離と平均速度は対照群と比較して有意に減少しました(P < 0.05;図6C、D)。治療後、Du-灸群の総距離および平均速度は、モデル群と比較して有意に増加した(P < 0.05;図6C、D)。これらの結果から、Du-hoxibustionはASマウスの自律神経運動の改善に有効であることが示唆された。
足関節の病理に対するDu-hoxibustionの効果
HE染色は、足首関節の病理学的変化を観察するために使用されました。対照群では、滑膜構造への損傷、滑膜のうっ血、および明らかな炎症性細胞浸潤および壊死はありませんでした。しかし、モデル群では、炎症性細胞浸潤および組織浮腫に加えて、関節腔内に滑膜過形成および浸潤が観察された。AI評価と組み合わせることで、ASモデルが正常に確立されていることが証明されました。モデル群と比較して、Du-hoxibustion群のマウスの滑膜はより無傷であり、間質性浮腫は減少し、関節軟骨は比較的無傷でした(図7)。
血漿IL-17およびTNF-αレベルに対するDu-moxibustionの影響
ELISAを実施して、血漿中のIL-17およびTNF-αを測定しました。モデル群の血漿IL-17およびTNF-αレベルは、対照群の血漿IL-17およびTNF-レベルと比較して有意に増加しました(P < 0.01; 図6F、G)。Du-灸は血漿IL-17およびTNF-αレベルを低下させました(P < 0.05; 図6F、G)。
図1:Du-moxibustionに必要な原材料。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図2:お灸の円錐形を作る。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図3:生姜水を用意し、台形の生姜柱を作ります。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図4:マウスにおけるGV14とGV2の位置。 (a)第7頸椎の棘下突起に位置するGV14;裂孔仙骨管に位置するGV2。(B)マウスのDu灸の模式図。(C)杜灸の刺激領域。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図5:マウスにおけるDu-moxibustionの操作手順。 (A)うつ伏せの姿勢で毛を剃り、生姜汁をマウスに塗りつけます。(B、C)TCMパウダーを均一に振りかけます。(D)粉末を楮紙で覆います。(E)生姜柱を楮紙にしっかりと固定します。(F)生姜の柱にお灸を置きます。次に、火をつけます。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図6:Du-hoxibustionが運動協調、自律神経運動、IL-17およびTNF-αレベルに及ぼす影響。 (A)マウスの関節腫脹スコア。(B) ロータロッド テストの待ち時間。(C-E)OFTの総距離、平均速度、およびトラック図。(F)血漿中のIL-17レベル。(g)血漿中のTNF-αレベル。値は、SEM±の平均(n = 6)として表されます。##対照群に対してP < 0.01、#P < 0.05。$$モデルグループに対してP<0.01、$P<0.05です。略語:IL =インターロイキン;TNF = 腫瘍壊死因子;OFT = オープンフィールドテスト。この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図7:足首関節のHE染色。 (A)関節腔は、対照群で炎症性浸潤がなく滑らかであった。(B)モデル群では、関節腔内に滑膜過形成と浸潤が認められた。(C)Du-hoxibustion群では、マウスの関節腔が滑らかで、浮腫が緩和された。スケールバー = 200 μm。略語:HE =ヘマトキシリン-エオシン。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
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Discussion
ASは、背中、腰椎、関節の腫れの痛みとして臨床的に現れ、重症の場合、脊椎の変形と関節の硬直が発生することがあります26。早期の診断と治療により、AS患者の生活の質が向上し、障害率が低下し、予後が改善されます。中国伝統医学(TCM)によると、ASは腎臓と杜経絡の陽の欠乏、および内部に冷え性の蓄積によって引き起こされると考えられています。TCMは、経絡の概念に基づいて、体の表面を温める気を生成することができるという見解を持っています。この気は、経絡とツボに沿って下向きに移動します。 黄帝の内経典 (非常に古典的で重要なTCMの傑作)には、「病気の杜経が治療される」と記録されています。ASは杜経にあるため、杜経絡を刺激することが治療ポイントとして利用されます。杜子午線は、陽気がピークに達する陽チャネルの海であると考えられています。杜経絡のお灸は、楊気を補い、杜経絡の効果を活性化し、腎臓陽の温暖化効果を調整し、西洋医学の免疫調節機能を高めることができます。
西洋医学の観点から見ると、脊髄は神経情報の伝達に重要な役割を果たしています。脊髄神経根の出入り口に作用するDu 灸は、神経伝達物質の調節を通じて神経系の機能と調節メカニズムに影響を与える可能性があります。1990年代には、Du-hoxibustingがラットの視床下部におけるβエンドルフィンの含有量を増加させ、中枢鎮痛効果を有することが実証された7。さらに、腱鞘炎はASの一般的な合併症であり、持続的な痛みと筋肉のこわばりを特徴とし、重症化すると関節や体の動きに影響を与える可能性があります。臨床的に検証されたTCM治療方法として、Du-moxibustionは、AS治療における炎症を効果的に緩和し、組織修復を促進し、腱膜炎を改善することができます。
具体的には、鍼灸の効果は、主に以下の側面に反映されます。まず、血液循環と炎症の吸収を促進します。デュ灸は、温熱作用により脊椎周辺の組織の血行や新陳代謝を促し、炎症の吸収や組織の修復を促進することで、炎症の程度や腱付着炎症の痛みを軽減します。第二に、筋肉と靭帯の緊張を改善します。Du-hoxibustionの刺激効果は、脊椎周辺の筋肉の緊張を改善し、硬化した軟部組織を弛緩させ、脊椎関節の活動を促進し、筋肉の緊張と靭帯のストレッチによって引き起こされる痛みとこわばりを軽減することができます。要約すると、Du-hoxibustionは、補助療法として、脊椎領域に作用することにより、体の神経系、免疫系、循環器系の活動を包括的に調節し、体全体のバランスを整えることができます。
炎症はAS27の主な症状です。TNF-αは、単核マクロファージの刺激下で産生されるマルチエフェクターサイトカインおよび炎症因子である28。ALPおよびコラーゲン合成の活性はTNF−αによって阻害され、骨量減少および軟骨破壊をもたらす29。近年、IL-17がASの病因に重要な役割を果たしていることが研究で明らかになっており、これはレビュー30で完全に実証されている。IL-17は骨芽細胞に直接作用し、核転写因子-κB(NF-κB)受容体活性化リガンド(RANKL)の発現を促進し、破骨細胞の堅牢な生成を促進します。同時に、IL-17は間葉系幹細胞(MSC)にも影響を与え、その増殖を誘導し、骨芽細胞への分化を促進します31。Kenna, 32 らは、AS患者の末梢血中のIL-17濃度が健常者と比較してほぼ2倍に上昇することを発見しました。この研究は、IL-17拮抗薬がTNF-α拮抗薬によく反応しないAS患者にとって新しい選択肢となる可能性があることを示唆している33。臨床試験では、IL-17拮抗薬の投与計画が、患者のX線写真による軸性脊椎関節炎の徴候と症状の改善においてプラセボよりも優れていることが示されました34。本研究の結果、モデル群のTNF-αおよびIL-17の血漿中濃度は対照群よりも有意に高く、Du-灸治療後のTNF-αおよびIL-17の血漿中濃度は有意に低下したことが示されました。
Du-moxibustion Therapyは、TCMの互換性のある技術を巧みに使用して、経絡、ツボ、漢方薬、および灸を統合します。Du-hoxibustion Therapyの原料には、主にお灸ベルベット、生姜、TCMパウダーが含まれていました。中医学の観点から見ると、ヨモギの加工品であるお灸ベルベットには、側副を活性化し、冷えを払い、痛みを和らげる機能があります。生姜は、外的症状を和らげたり、風邪をひいたりする役割があります。現代の研究はまた、生姜が抗炎症作用と鎮痛作用を持っていることを示しています35。治療前に生姜ジュースで皮膚を拭くと、TCMパウダーが皮膚に付着するのを助けるだけでなく、毛穴を開き、経皮浸透を促進するのに役立ちます36。台形の生姜柱は背面にしっかりと固定されており、お灸コーンのしっかりとしたベースを提供します。灸錐を燃やした後、火力、生姜、TCMパウダーの効果が杜経絡に一緒に働きます。この病気の陽欠乏症の病因を考慮して、杜灸は病気の部位に直接作用し、経絡を温め、寒さを分散させ、陽気とエッセンスを補い、血液循環を促進し、陰と陽のバランスを取り、病気の根本を治療します。
Du-moxibustionを行う際には、いくつかの詳細を考慮する必要があります。まず、杜灸の手術部位を大翠点(GV14)からヤオシュ点(GV2)まで(解剖学的には第7頸椎 棘突起から尾椎まで、脊椎全体を含む)固定し、ASの発生部位と一致します(図4)。第二に、生姜の湿度と厚さが重要です。生姜を生姜泥に加工した後、余分な生姜ジュースを絞り出して、生姜泥に粒状感がなく、台形の生姜柱にするのに適した厚さにする必要があります。生姜泥の湿度と水分が高いと、お灸の火の侵入が妨げられやすくなり、お灸の刺激量が減少します。生姜原料が乾燥しすぎて粒子が大きすぎると、台形の生姜柱を作るのが難しくなり、急激な熱の浸透や皮膚のやけどにつながります。第三に、灸錐のサイズと硬さを考慮する必要があります。マウスの灸に使用される灸錐は、長さ~4 cm、直径0.5 cmで、準備時にしっかりと固定する必要があります。気密性のテストは、コーンを表面に落とした後でもほどけない場合です。灸コーンが十分にコンパクトでないと、灸ベルベットの量を減らしたり、燃焼時間が短くなったり、火力が低下したりします。第四に、お灸錐に点火するときは、お灸の頭、中央、尾に細かいお香を灯して、お灸をゆっくりと燃やし、潮の満ち引きの栄養効果を実現する必要があります。第五に、ムスクはお灸の薬用粉末の重要な成分です。お灸の2日目には、杜経絡に小さな真珠のような透き通った水ぶくれがあるはずです。
多数の臨床研究により、AS 4,5,6の治療におけるDu-お灸の明確な有効性が確認されています。しかし、動物実験における作用機序の研究はなかなか進んでいません。研究と革新を通じて、Du-moxibustionの操作における長年の経験により、マウス実験での使用を調査するようになりました。本稿では、実験マウスにおけるAS治療におけるDu-moxibustionの手術手順と注意点について詳細に述べる。さらに、ASマウスの運動協調およびTNF-αおよびIL-17の血漿中濃度に対する灸の影響が観察されました。この研究は、ASの治療におけるDu-moxibustionのメカニズムを研究するための最も基本的な実験的基礎を提供しました。この研究にはまだいくつかの限界があります。たとえば、今後の研究では、プラセボの灸、用量、範囲、治療時間などのさまざまなパラメーターの評価に注意を払い、最も効果的な併用スキームを取得します。後の研究では、イメージング法を使用して、より直感的な方法で治療結果を評価することができます。
Du-moxibustion療法の応用の見通しは有望です。総督血管として知られる杜経絡は、全身の気と血液の流れを調節する上で重要な役割を果たします。中国の伝統的な治療法であるお灸は、特定のツボでヨモギを燃やして経絡を刺激し、体の自己治癒メカニズムを促進します。杜灸は、鍼灸と比較して、体表面に作用するさまざまな技術の組み合わせであり、快適さと強くて広い作用範囲の特徴があります。さらに、Du-moxibustion療法は、背中と脊椎領域に焦点を当て、Du経絡の経路をターゲットにします。体の免疫力を高め、血液循環を改善し、さまざまな身体的および精神的状態を緩和することができます。この治療法は、筋骨格系障害、神経疾患、婦人科疾患、メンタルヘルス問題などの疾患の治療に有効であることが実証されています。研究と技術の進歩により、Du-duxibustion療法の応用はさらに拡大すると予想されます。今後の研究では、疼痛管理、ストレス軽減、消化器疾患、呼吸器疾患などの分野でその可能性を探る可能性があります。伝統的な知識と現代の科学的理解の組み合わせは、Du-hoxibustion療法を主流の医療行為にうまく統合することにつながる可能性があります。結論として、Du-hoxibustion療法は、さまざまなヘルスケア分野への応用と統合に大きな期待が寄せられています。その可能性を最大限に引き出すには、さらなる研究、臨床試験、および伝統的な漢方医と現代の医療従事者とのコラボレーションが不可欠です。
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Disclosures
著者は、宣言すべき利益相反を持っていません。
Acknowledgments
この研究は、中国国家自然科学基金会の一般プログラム(No.82174491)とQilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project(No.Lu Weihan [2020]132)。実験条件を提供してくれた山東中医薬大学実験動物センターに感謝します。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
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