Summary
מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בטיפול בספונדיליטיס ankylosing בעכברי ניסוי.
Abstract
Ankylosing spondylitis (AS) היא צורה מחמירה ומשביתה בהדרגה של דלקת פרקים המשפיעה בעיקר על השלד הצירי. מחלה זו מערבת בעיקר את עמוד השדרה ואת המפרק sacroiliac. איחוי עמוד השדרה והמפרק הסקרואיליאק עלול להתרחש בשלב מאוחר יותר של המחלה, וכתוצאה מכך נוקשות בעמוד השדרה וקיפוזיס, כמו גם קושי בהליכה, המשפיע קשות על איכות העבודה ופעילויות היומיום ומטיל נטל כבד על החולה, המשפחה והחברה. תשומת לב גוברת הוקדשה ללא טיפול תרופתי כטיפול אלטרנטיבי עבור AS. מוקסיבציה היא טכניקה טיפולית עתיקה המשמשת ברפואה הסינית המסורתית (TCM). טיפול Du-moxibustion, טיפול חיצוני ייחודי וחדשני שפותח על בסיס moxibustion רגיל, יש השפעה טיפולית מובהקת על AS. Du-moxibustion משלב במיומנות את הטכניקות התואמות של TCM כדי לשלב מרידיאנים, acupoints, צמחי מרפא סיניים, ו moxibustion. מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הפעולה ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בעכברי ניסוי כדי לספק בסיס ניסיוני לחקר מנגנון Du-moxibustion בטיפול ב- AS.
Introduction
Ankylosing spondylitis (AS) היא צורה מחמירה ומשביתה בהדרגה של דלקת פרקים המשפיעה בעיקר על השלד הצירי. על פי הסקר האפידמיולוגי האחרון, ~ 0.01%-1.8% מהאנשים בעולם סובלים ממצב זה1, רובם גברים צעירים (יחס זכר לנקבה הוא ~ 2-3: 1)2. שכיחות AS באוכלוסייה הסינית היא 0.2%-0.4%. מחלה זו מערבת בעיקר את עמוד השדרה ואת המפרק sacroiliac. איחוי עמוד השדרה ומפרק העצה עלול להתרחש בשלבים מאוחרים יותר של המחלה, וכתוצאה מכך נוקשות בעמוד השדרה וקיפוזיס, כמו גם קושי בהליכה, המשפיע קשות על איכות העבודה ופעילויות היומיום ומטיל נטל כבד על החולה, המשפחה והחברה1. נכון לעכשיו, אין פתרון מוחלט עבור AS, והטיפולים הניתנים, הן תרופתיים והן לא תרופתיים, מתמקדים בעיקר בהקלה על כאב, האטת התקדמות המחלה, ושיפור איכות החיים. בשנים האחרונות, מכיוון שהאפשרויות הפרמקותרפיות היו מוגבלות מאוד3, תשומת לב גוברת הוקדשה לטיפול לא תרופתי, שהפך לטיפול אלטרנטיבי עבור AS. בסין, מטופלים מעדיפים לעתים קרובות טיפול חיצוני המורכב מרפואה סינית מסורתית (TCM), שיש לו תופעות לוואי קלות ונוחות רבה במהלך הטיפול.
מוקסיבציה היא טכניקה טיפולית עתיקה המשמשת ברפואה סינית מסורתית. Du-moxibustion היא טכניקת טיפול חיצונית המורכבת מ"מוקסיבציה תרופתית עם קצף" על קטע עמוד השדרה של מרידיאן דו. הוא משמש בעיקר לטיפול ב- AS והראה בטיחות ויעילות. בהשוואה למוקסיבציה רגילה, Du-moxibustion יש את המאפיינים של אזור moxibustion רחב, חרוט מוקסה גדול, כוח אש חזק, טמפרטורה גבוהה4. סקירה שיטתית ומטא-אנליזה מציעות כי מוקסיבציה היא טיפול משלים יעיל עבור AS5. מחקר שנערך לאחרונה אישר כי הסימפטומים הקליניים וכמה גורמים דלקתיים של חולי AS השתפרו על ידי moxibustion6. מחקרים גילו כי Du-moxibustion יכול להגדיל את התוכן במוח של β-אנדורפין ולהפעיל אפקט משכך כאבים מרכזי7, לווסת את הביטוי של הגן HLA-B27 8, ולעכב את שיעור ההישנות של AS. Du-moxibustion יש גם השפעה משפרת על התקדמות AS על ידי הפחתת אינדקס דלקתי ESR (ESR) ורמות של חלבון מגיב C (CRP), פפטיד C-terminal של קולגן מסוג I (CTX-I), וחלבון Dickkopf1 (DKK1)9,10.
מחקר קליני אחר הראה כי Du-moxibustion יכול להתאים עוד יותר את תת-קבוצות תאי T הלא מסודרות, Ig, ולהשלים C3 כדי לאזן את מנגנון החיסון11. במונחים של חילוף חומרים בעצמות, מוקסיבציה יכולה לעכב את עליית פוספטאז אלקליין בסרום (ALP) וזרחן בסרום (S-P), להגדיל את רמת הסידן בסרום (S-Ca), צפיפות מינרלים בעצם (BMD) וחוזק העצם12. יתר על כן, Du-moxibustion יכול לתקן את תפקוד עמוד השדרה במספר נקודות כדי להקל על תסמיני עייפות בחולי AS13. כמה מחקרים בבעלי חיים חשפו את המנגנון הפוטנציאלי של מוקסיבציה בטיפול ב- AS. מחקר הצביע על כך שמוקסיבציה שיפרה באופן משמעותי את המצב הבריאותי הכללי, הפחיתה את רמות עובי כפות הרגליים והפחיתה את רמות IL-1β, PGE2, IL-6 ו-TNF-α בדגימות רקמת הרצועה בעמוד השדרה. ניתוח מסלולים מטבוליים קישר את המטבוליטים שזוהו למחזור TCA, כמו גם שומנים, חומצות אמינו, פלורת מעיים ומטבוליזם של פורין14. מחקר אחר הראה כי מוקסיבציה דיכאה את הביטוי של ציטוקינים מעודדי דלקת, IL-1β, TNF-α, IL-17 ו-IL-6; הפחתת רמות ה-mRNA של RANKL, RANK, ALP ו-OCN; ושיפר את התכונות ההיסטופתולוגיות בעכברי AS15.
בעוד מחקרים אלה מציעים כי moxibustion עשוי להיות יעיל בטיפול AS, מחקר נוסף נדרש כדי לאשר ממצאים אלה ולקבוע את פרוטוקול הטיפול האופטימלי עבור moxibustion בחולים עם AS. הצוות שלנו יצר ושינה את הטיפול במוקסיבציה בהתבסס על התיאוריה הבסיסית והפעולה המעשית של מוקסיבציה סינית מסורתית, אשר בוצעה באופן נרחב ויושמה בפרקטיקה הקלינית הסינית במשך למעלה מ -35 שנה. למרות שיש מעט מחקרים באיכות גבוהה על הטיפול ב- AS על ידי Du-moxibustion, האינדיקציה שלה בטיפול ב- AS נתמכה בראיות. עם זאת, מנגנון הטיפול ב- AS עם Du-moxibustion ראוי למחקר נוסף. מחקר בבעלי חיים הוא שיטה חשובה לחקור את המנגנון של Du-moxibustion בטיפול ב- AS. הפעולה הקלינית של Du-moxibustion היא בוגרת יחסית, אך משמשת לעתים רחוקות בחקר המנגנון בניסויים בבעלי חיים. מאמר זה מתאר בפירוט את הפעולות ואמצעי הזהירות שיש לנקוט במהלך Du-moxibustion בטיפול בעכברי ניסוי AS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה הניסויית לרווחת בעלי חיים של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית (לא. SDUTCM20230831301).
1. הכנת בעלי חיים
- לקבוע מראש את קבוצות הניסוי ואת מספר בעלי החיים בכל קבוצה.
- בחר עכברי BALb/c זכרים, שכן אותם בטמפרטורה קבועה של 22 ± 1 °C, לחות קבועה של 60 ± 5%, וסביבת אור מחזור יומי של 12 שעות.
2. הקמת מודל עכבר AS
הערה: מודל AS הושרה עם פרוטאוגליקן סחוס (PG), שהיא שיטת מידול קלאסית 16,17,18,19,20,21. עכברים מזן BALB/c חוסנו שוב ושוב ב-PG כדי לגרום לדלקת בגידים וספונדיליטיס. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לחומרים, ריאגנטים ומכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.
- השתמש פיפטה 200 μL כדי למשוך 200 μL של PG ו- CFA (או IFA) לתוך צינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל. מנערים בעדינות כדי לערבב את הנוזל בצינור הצנטריפוגה.
- מניחים את צינור הצנטריפוגה במטחנת הרקמה לצורך הומוגניזציה ולאחר מכן דוגרים על קרח למשך 4 דקות. חזור על הפעולה 5x. הגדר את הפרמטרים הבאים במטחנת הרקמות: 60 הרץ, טחינה 30 שניות, מרווח 10 שניות בסך הכל 6 מחזורים.
- חלץ 0.2 מ"ל של חלבון PG מתחלב מצינור הצנטריפוגה עם מזרק 1 מ"ל.
- תפוס ותקן את העכבר ביד שמאל. הניחו את העכבר במצב שכיבה, תוך שמירה על הראש נמוך מהזנב כדי למנוע נזק לאברי הבטן כאשר המזרק מוכנס.
- לעקר את הבטן עם מקלוני אלכוהול באמצעות יד ימין.
- עם מזרק ביד ימין, להכניס את המחט תת עורית מעט משמאל או מימין של linea alba ventralis במחצית התחתונה של הבטן.
- דוחפים את המחט 3-5 מ"מ תת עורית במקביל לקו אמצע הבטן ואז דוחפים את המחט לתוך חלל הבטן בזווית של 45° לעור.
- לחדור את הצפק, למשוך את פקק המחט, ולהזריק לאט את חלבון PG מתחלב.
3. דו-מוקסיבציה
הערה: הכינו מראש את שלושת חומרי הגלם החשובים ביותר עבור Du-moxibustion (איור 1).
- הכינו קונוסים מוקסה. קחו את הקטיפה ביד, כששתי כפות ידיים פונות לכיוונים מנוגדים ומפעילות כוח פיתול כדי לשפשף את הקטיפה לצורת ציר (איור 2)
- חתכו את הג'ינג'ר לחתיכות קטנות ומחסו אותו במסחטת מיצים (איור 3). מסננים את מחית הג'ינג'ר דרך גזה כותנה. הפרידו את מיץ הג'ינג'ר ובוץ הג'ינג'ר ממחית הג'ינג'ר כדי להתכונן לשלב הבא.
- מכינים 10 גרם בוץ ג'ינג'ר ו 20 מ"ל מיץ ג'ינג'ר ומניחים אותם בכוסות נייר לשימוש מאוחר יותר.
- שקלו 0.1 גרם אבקת TCM (תערובת של אבקת קינמון, אבקת ציפורן, אבקת נוטופטריגיום, אבקת אנתרידין ומושק מלאכותי)22 וטחנו אותה במכתש.
- הכניסו את העכברים לקופסת השראת ההרדמה של מכונת ההרדמה והרדימו אותם בתערובת של 2-3% איזופלורן וחמצן בקצב זרימה של 2 ליטר/דקה.
- להעריך את עומק ההרדמה על ידי התבוננות בהיעדר רפלקס בהלה בתחילה ולוודא את רמת ההרדמה הכירורגית על ידי בדיקת היעדר רפלקס דוושה בתגובה לצביטת בוהן עדינה.
- לאחר שהעכבר הגיע להרדמה כירורגית, הוציאו אותו מהקופסה וקיבעו אותו על שולחן הניתוחים במצב נוטה. יישרו את הפה והאף של העכבר עם מוצא חומר ההרדמה.
- יש לבצע הרדמה באמצעות מסכה המחוברת למכונת ההרדמה, דרכה מועברים איזופלורן וחמצן באמצעות מעגל חשמלי שאינו נושם. שמור על ההרדמה ושמור את העכבר על כרית חימום של 37 מעלות צלזיוס במהלך כל ההליך הניתוחי. החל חומר סיכה על העיניים כדי למנוע התייבשות.
- אתרו את נקודות הדיקור וזהו את אזור הגירוי (איור 4).
- לגלח את השיער על גב העכבר עד העור בצבע בשר על גב העכבר נראה. יש לוודא שרוחב הסרת השיער הוא ~1.5 ס"מ והאורך הוא מהחוליה הצווארית השביעית ועד חוליית הזנב (איור 5A).
- מרחו את מיץ הג'ינג'ר המוכן עם גזה כותנה על האזור המגולח (איור 3).
- פזרו את אבקת ה-TCM באופן שווה בעזרת מברשת כתיבה על הקו החציוני של גב העכבר וכסו אותה בנייר תות (איור 5B-D).
- הכינו עמוד ג'ינג'ר טרפזי באורך 6 ס"מ, רוחב 1.5 ס"מ ועובי 3 מ"מ עם בוץ ג'ינג'ר. תקנו את עמוד הג'ינג'ר על נייר התות (איור 5E).
- צרו חריץ מעל קו האמצע של עמוד הג'ינג'ר (איור 3), והניחו את חרוט המוקסה על עמוד הג'ינג'ר.
- הדליקו את חרוט המוקסה והניחו חרוט מוקסה חדש לאחר שהקודם נשרף. בדקו את מוצקות עמוד הג'ינג'ר כדי למנוע צריבה של העכבר, ובסך הכל צריבה של שלושה מדוכים (איור 5F).
- לאחר שריפת קונוסים מוקסה, לנגב את זנגביל ואת אבקת TCM, ולנקות את החלק האחורי של העכבר. יש להפסיק את ההרדמה בשלב זה.
- אפשרו לעכבר לחזור להכרה בכלוב חדש עם גישה בלתי מוגבלת למזון ומים. הניחו את הכלוב על פד מחומם כדי לסייע בתהליך ההחלמה. עקוב אחר בעל החיים עד שהוא חוזר להכרה מספקת.
- לאחר שהעכבר התאושש לחלוטין, אשר את נוכחותו של רפלקס הימין לפני החזרתו לדיור הרגיל שלו.
הערה: במהלך הניתוח, יש צורך לפקח על המצב הנפשי של העכברים כדי למנוע נשימה חלשה. הימנעו מקשקשים, אך שמרו על חום העכברים, והימנעו מחבלות בטפרים ובזנב.
4. הערכת מדד דלקת פרקים (AI)
- הערך את ציון הבינה המלאכותית שלוש פעמים: לפני הדוגמנות, לאחר המידול ואחרי הטיפול. תקני ההערכה הם כדלקמן: 0, ללא אדמומיות או נפיחות; 1, אדמומיות קלה או נפיחות בכמה אצבעות; 2, אדמומיות ונפיחות ברוב מפרקי הבוהן והבהונות; 3, אדמומיות חמורה ונפיחות בכפות הרגליים ומתחת למפרק הקרסול; ו-4, אדמומיות ונפיחות בכפות הרגליים ובמפרק הקרסול23.
- חשב את ציוני הבינה המלאכותית של כל ארבע הכפות, עם ערך מרבי של 16.
5. מבחן רוטרוד
הערה: מבחן הרוטרוד משמש להערכת קואורדינציה מוטורית ושיווי משקל על ידי רישום הזמן שהעכברים מבלים על התוף המסתובב. ניסוי זה כלל שלושה ניסויים המופרדים במרווחים של 20 דקות. נתוני המבחן הרשמיים נרשמו מהניסוי השלישי, כאשר שני הראשונים שימשו כתרגילי אימון.
- הניחו את העכברים על תופים מסתובבים שמסתובבים בתאוצה רציפה מ-4 עד 40 סל"ד מעל 300 שניות24.
- מדוד את זמן ההשהיה (הזמן עד שהעכבר נופל מהמוט). ספק ריפוד כדי למנוע פציעה כאשר הוא נופל.
6. בדיקת שדה פתוח (OFT)
הערה: OFT משמש להערכת מצב התנועה האוטונומית, במטרה לזהות התנהגות פתולוגית. ארבע זירות שדה פתוחות מרובעות (50 ס"מ x 50 ס"מ x 40 ס"מ) הוצבו יחד כדי ליצור את המנגנון. תחתית הקופסה חולקה לתשעה ריבועים שווים.
- שלוט ברעשי הרקע של המעבדה מתחת ל -65 dB.
- נגבו את כל המכשיר עם 75% אתנול לפני כל ניסוי.
- הכניסו את כל העכברים לחדר הבדיקה שעה לפני הבדיקה כדי לאפשר להם להסתגל לסביבתם.
- שימו את העכברים בזירות השדה הפתוחות המרובעות ואפשרו להם לחקור במשך 10 דקות.
- הקלט את המרחק הכולל ואת מהירות התנועה במשך 10 דקות.
7. המתת חסד ואיסוף דגימות
- הכניסו את העכבר לקופסת השראת ההרדמה והרדימו אותו בתערובת של 2-3% איזופלורן וחמצן בקצב זרימה של 2 ליטר/דקה. ברגע שהעכבר נכנס למצב של הרדמה עמוקה שאושרה על ידי חוסר רפלקס דוושה, העבר אותו לשולחן הניתוחים להרדמה תחזוקתית.
- תפוס ותקן את העכבר ביד הלא דומיננטית.
- לחץ קלות על אזור העיניים כדי להפוך את גלגלי העיניים צפופים ובולטים.
- השתמש מספריים כדי לקצץ את השפם של העכבר כדי למנוע המוליזה הנגרמת על ידי שערות.
- אשר את עומק ההרדמה על ידי בדיקת היעדר רפלקס דוושה בתגובה לצביטת בוהן. השתמש במלקחיים כדי לתפוס את גלגל העין ולהסיר אותו במהירות, המאפשר לדם לזרום לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה מארובות העין.
הערה: ניתן להשתמש גם בשיטות איסוף דם חלופיות, כגון ניקוב לב. - כאשר קצב טפטוף הדם מאט, לחץ בעדינות על אזור הלב של העכבר כדי להאיץ את שאיבת הדם ולקבל יותר דם. לאחר מכן, להרדים את העכבר באמצעות נקע צוואר הרחם.
- החזיקו את הרגל ממש מעל מפרק הקרסול באמצעות מלקחיים ביד הלא דומיננטית. לאחר מכן, חתכו את הרגל ממש מעל מפרק הקרסול באמצעות מספריים.
8. ניתוח היסטולוגי
- יש לטבול את דגימות הקרסול ב-4% פרפורמלדהיד במשך יותר מ-24 שעות. בטל את ההסתיידות ב- 10% EDTA (pH = 7.4) למשך חודש אחד.
- השרו את הדגימות ב-4% פרפורמלדהיד למשך שעתיים.
- לאחר מכן, השרו את הדגימות בשיפוע של עלייה בריכוזי אתנול (70%, 80%, 90%, 100%, 100%, 100%). השרו כל ריכוז אתנול למשך שעה אחת.
- משרים את הדגימות בקסילן למשך 3 שעות.
- לטבול את דגימות הקרסול בפרפין במשך 7 שעות. מניחים בצד קוביות פרפין במקרר 4°C.
- פורסים קוביות פרפין לעובי של 6 מיקרומטר באמצעות מכונת חתך פרפין חצי אוטומטית.
- משרים את הפרוסות במשך 4X5 דקות בקסילן להשלמת השעווה.
- משרים את הפרוסות בשיפוע של ירידה בריכוז האתנול (100%, 100%, 95%, 75%) למשך 2 דקות כל אחת. משרים במים מזוקקים למשך 2 דקות.
- מכתימים את הפרוסות בהמטוקסילין למשך 10 דקות ושוטפים במים מזוקקים במשך 5 שניות.
- משרים את הפרוסות במשך 30 שניות בנוזל ההבחנה ושוטפים במים מזוקקים במשך 5 שניות.
- מכתימים את הפרוסות באאוזין למשך דקה אחת ושוטפים במים מזוקקים במשך 3 דקות.
- משרים את הפרוסות בשיפוע של עלייה בריכוזי אתנול (80%, 95%, 100%, 100%) למשך דקה אחת כל אחת. משרים קסילן למשך 3X3 דקות ואוטמים את הפרוסות25.
9. בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA)
- למדוד את ריכוזי IL-17 ו- TNF-α בפלזמה באמצעות הערכות המתאימות בהתאם להוראות היצרן.
10. ניתוח סטטיסטי
- בטא את הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).
- קבע את המשמעות באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) או מדדים חוזרים דו-כיווניים ANOVA, ואחריו מבחני פוסט-הוק של Bonferroni או Tamhane T2.
- שקול P < 0.05 להיות מובהק סטטיסטית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
עכברי מודל הנגרמים על ידי PG פיתחו תסמינים של דלקת מפרקים היקפית, המאופיינת באדמומיות ונפיחות של הגפיים והבהונות, ופיתחו בהדרגה דלקת מפרקים צירית כבר בשבוע 14, הדומה מאוד לביטוי של AS. לכן, מודל העכבר AS נחשב מוצלח אם מדד דלקת פרקים (AI) היה מעל 3 נקודות ב 14 שבועות לאחר הזריקה האחרונה22. כאשר כפות העכברים נראו נפוחות, הטיפול Du-moxibustion בוצע פעם בשבוע בסך הכל 3x. לאחר הטיפול, העכברים הומתו על ידי נקע צוואר הרחם תחת הרדמה עמוקה isoflurane, הדם שלהם נאסף, ואת הקרסוליים נכרתו.
השפעות Du-moxibustion על coodination מוטורי ותנועה אוטונומית
AS המושרה על ידי PG בקר אומץ כמודל לבחינת ההשפעה של Du-moxibustion במרידיאן Du על תיאום מוטורי. בתחילה, ניקוד נפיחות המפרק שימש כדי להעריך אם המודל היה מוצלח, ותיאום מוטורי ותנועה אוטונומית הוערכו באמצעות מבחן rotarod ו- OFT.
הערכת AI קבעה את חומרת דלקת המפרקים ההיקפית. לאחר הדוגמנות, מדידה דו-כיוונית חוזרת ANOVA גילתה כי ציוני נפיחות המפרקים בקבוצות המודל ו- Du-moxibustion עלו באופן משמעותי בהשוואה לאלה בקבוצת הביקורת לפני Du-moxibustion (P < 0.01; איור 6A). טיפול Du-moxibustion הפחית את ציוני נפיחות המפרקים בהשוואה לאלה של קבוצת המודל לאחר Du-moxibustion (P < 0.05; איור 6A).
מבחן הרוטרוד שימש להערכת קואורדינציה מוטורית ושיווי משקל. מדידה דו-כיוונית חוזרת ANOVA גילתה הבדלים משמעותיים לאורך זמן (F = 13.928, P = 0.000 < 0.05) והשפעות אינטראקציה של זמן וקבוצה (F = 12.583, P = 0.000 < 0.05). לאחר הדוגמנות, זמן ההשהיה של קבוצת הביקורת לא היה שונה מזה שלפני הדוגמנות. עם זאת, לאחר המידול, זמני ההשהיה של קבוצות המודל ודו-מוקסיבציה פחתו באופן משמעותי בהשוואה לאלה בקבוצת הביקורת (P < 0.01; איור 6B), ולא היו הבדלים משמעותיים בין קבוצת המודל לבין קבוצת Du-moxibustion (P > 0.05; איור 6B). לאחר הטיפול, זמן החביון של קבוצת Du-moxibustion גדל באופן משמעותי בהשוואה לזה של קבוצת המודל (P < 0.05; איור 6B). תוצאות אלה הצביעו על כך שדו-מוקסיבציה הייתה יעילה בשיפור הקואורדינציה המוטורית בעכברי AS.
OFT בוצע כדי לזהות תנועה אוטונומית. הפרמטרים נאספו ונותחו באופן אוטומטי באמצעות התוכנה (איור 6C-E); המרחק הכולל והמהירות הממוצעת נצפו בעיקר במחקר זה. לא היה הבדל משמעותי במרחק הכולל ובמהירות הממוצעת בין הקבוצות לפני המידול (P > 0.05; איור 6C,D). לאחר הדוגמנות, המרחק הכולל והמהירות הממוצעת פחתו באופן משמעותי בהשוואה לקבוצת הביקורת (P < 0.05; איור 6C,D). לאחר הטיפול, המרחק הכולל והמהירות הממוצעת של קבוצת Du-moxibustion גדלו באופן משמעותי בהשוואה לאלה של קבוצת המודל (P < 0.05; איור 6C,D). תוצאות אלה הצביעו על כך שדו-מוקסיבציה הייתה יעילה בשיפור התנועה האוטונומית בעכברי AS.
השפעות Du-moxibustion על פתולוגיה של מפרק הקרסול
הכתמת HE שימשה לצפייה בשינויים הפתולוגיים במפרק הקרסול. בקבוצת הביקורת לא היה נזק למבנה הסינוביום, לא היה גודש בסינוביום, ולא הייתה חדירה ברורה של תאי דלקת ונמק. עם זאת, בקבוצת המודל, היפרפלזיה סינוביום וחדירה נצפו בחלל המשותף, בנוסף לחדירת תאים דלקתיים ובצקת רקמות. בשילוב עם הערכת AI, הוכח כי מודל AS הוקם בהצלחה. בהשוואה לקבוצת המודל, סינוביום העכברים בקבוצת Du-moxibustion היה שלם יותר, בצקת אינטרסטיציאלית הופחתה, והסחוס המפרקי היה שלם יחסית (איור 7).
השפעות Du-moxibustion על רמות IL-17 ו-TNF-α בפלזמה
ELISA בוצעה למדידת IL-17 ו- TNF-α בפלזמה. רמות הפלזמה IL-17 ו- TNF-α של קבוצת המודל גדלו באופן משמעותי בהשוואה לאלה של קבוצת הביקורת (P < 0.01; איור 6F,G). Du-moxibustion הפחית את רמות IL-17 ו- TNF-α בפלזמה (P < 0.05; איור 6F,G).
איור 1: חומרי הגלם הדרושים לדו-מוקסיבציה. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: יצירת חרוט מוקסה. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: הכינו מי ג'ינג'ר והכינו עמוד ג'ינג'ר טרפזי. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של האיור הזה.
איור 4: מיקום GV14 ו-GV2 בעכבר. (A) GV14 הממוקם בתהליך התת-שדרתי של החוליה הצווארית השביעית; GV2 ממוקם בתעלת העצה הסרבועית. (B) דיאגרמה סכמטית של Du moxibustion על העכבר. (C) אזור מגורה של Du moxibustion. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5: הליך הפעולה של Du-moxibustion בעכבר. (A) לגלח את השיער ולמרוח את מיץ הג'ינג'ר על העכבר במצב נוטה. (ב,ג) מפזרים אבקת TCM באופן שווה. (D) מכסים את האבקה בנייר תות. (E) תקנו היטב את עמוד הג'ינג'ר על נייר התות בחוזקה. (F) שים חרוט מוקסה על עמוד הג'ינג'ר; לאחר מכן, הדליקו אותו. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 6: השפעות דו-מוקסיבציה על קואורדינציה מוטורית, תנועה אוטונומית ורמות IL-17 ו-TNF-α. (A) ציוני נפיחות המפרק בעכברים. (B) זמן ההשהיה במבחן הרוטרוד. (ג-ה) מרחק כולל, מהירות ממוצעת ודיאגרמת מסלול של OFT. (F) רמות IL-17 בפלזמה. (G) רמות TNF-α בפלזמה. הערכים מבוטאים כממוצע ± SEM (n = 6). ##P < 0.01, #P < 0.05 לעומת קבוצת הביקורת; $$P < 0.01, $P < 0.05 לעומת קבוצת הדגמים. קיצורים: IL = אינטרלוקין; TNF = גורם נמק הגידול; OFT = בדיקת שדה פתוח. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 7: הכתמה של מפרק הקרסול. (A) חלל המפרק היה חלק ללא חדירה דלקתית בקבוצת הביקורת. (B) בקבוצת המודל נצפו היפרפלזיה סינוביום והסננה בחלל המפרק. (C) בקבוצת Du-moxibustion, חלל המפרק של עכברים היה חלק והבצקת הוקלה. פסי קנה מידה = 200 מיקרומטר. קיצור: HE = hematoxylin-eosin. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
AS מתבטא קלינית בכאבי נפיחות בגב, במותניים ובמפרקים, ועיוות בעמוד השדרה ונוקשות המפרקים עלולים להתרחש במקרים חמורים26. אבחון וטיפול מוקדם יכולים לשפר את איכות החיים, להפחית את שיעורי הנכות ולשפר את הפרוגנוזות של חולים עם AS. על פי הרפואה הסינית המסורתית (TCM), AS הוא האמין להיגרם על ידי מחסור של יאנג בכליה דו מרידיאן, כמו גם הצטברות של רוע קר פנימי. TCM מחזיקה בדעה כי מוקסיבציה, המבוססת על הרעיון של מרידיאנים, יכולה ליצור צ'י שמחמם את פני השטח של הגוף. לאחר מכן צ'י זה נע כלפי מטה לאורך המרידיאנים ונקודות הדיקור. בקאנון הפנימי של הואנגדי (יצירת מופת קלאסית וחשובה מאוד של TCM), נרשם כי "מרידיאן דו החולה מטופל". מכיוון ש- AS ממוקם במרידיאן דו, גירוי מרידיאן דו משמש כנקודה טיפולית. מרידיאן דו נחשב לאוקיינוס ערוצי היאנג אליו מגיע יאנג צ'י לשיאו. מוקסיבציה על מרידיאן דו יכולה להשלים יאנג צ'י, להפעיל את ההשפעה של דו מרידיאן, ולהתאים את אפקט ההתחממות של יאנג הכליה, כלומר, לשפר את תפקוד הוויסות החיסוני של הרפואה המערבית.
מנקודת המבט של הרפואה המערבית, חוט השדרה ממלא תפקיד חשוב בהעברת מידע עצבי. Du moxibustion, אשר פועל על הכניסה והיציאה של שורשי עצב עמוד השדרה, יכול להשפיע על תפקוד מנגנון ויסות של מערכת העצבים באמצעות רגולציה של נוירוטרנסמיטורים. בשנות התשעים הוכח כי Du-moxibustion הגדיל את התוכן של β-אנדורפינים בהיפותלמוס של חולדות, ובכך בעל אפקט משכך כאבים מרכזי7. בנוסף, אנתסיטיס הוא סיבוך נפוץ של AS, המאופיין בכאב מתמשך ונוקשות שרירים, אשר יכול להשפיע על תנועת המפרקים והגוף כאשר חמור. כשיטת טיפול TCM שאושרה קלינית, Du-moxibustion יכול להקל ביעילות על דלקת, לקדם תיקון רקמות ולשפר אנתסיטיס בטיפול AS.
באופן ספציפי, ההשפעות של דיקור סיני ומוקסיבציה משתקפות בעיקר בהיבטים הבאים. ראשית, הם מקדמים את זרימת הדם ואת ספיגת הדלקת. Du-moxibustion ממריץ את זרימת הדם ואת חילוף החומרים ברקמות המקיפות את עמוד השדרה באמצעות אפקט ההתחממות ומקדם ספיגה של דלקת ותיקון רקמות, ובכך מפחית את מידת הדלקת והכאב של דלקת חיבור גידים. שנית, הם משפרים את מתח השרירים והרצועות. אפקט הגירוי של Du-moxibustion יכול לשפר את מתח השרירים סביב עמוד השדרה, להרפות את הרקמות הרכות הקשוחות, לקדם את פעילות מפרקי עמוד השדרה ולהפחית את הכאב והנוקשות הנגרמים על ידי מתח שרירים ומתיחת רצועות. לסיכום, Du-moxibustion, כטיפול משלים, יכול לווסת באופן מקיף את הפעילות של מערכות העצבים, החיסון והדם של הגוף על ידי פעולה על אזור עמוד השדרה, מה שהופך את הגוף מאוזן יותר בכללותו.
דלקת היא הביטוי העיקרי של AS27. TNF-α הוא ציטוקין רב-משפיע וגורם דלקתי המיוצר תחת גירוי של מקרופאגים חד-גרעיניים28. הפעילות של ALP וסינתזה של קולגן יכולה להיות מעוכבת על ידי TNF-α, וכתוצאה מכך אובדן עצם והרס סחוס29. בשנים האחרונות, מחקרים מצאו כי IL-17 ממלא תפקיד חשוב בפתוגנזה של AS, אשר הודגם במלואו בסקירה30. IL-17 יכול לפעול ישירות על אוסטאובלסטים, לקדם את הביטוי של גורם שעתוק גרעיני-κB (NF-κB) ליגנד מפעיל קולטן (RANKL), ולקדם את הדור החזק של אוסטאוקלסטים. במקביל, IL-17 משפיע גם על תאי גזע מזנכימליים (MSCs), גורם להתפשטותם ומקדם את התמיינותם לאוסטאובלסטים31. Kenna,32 et al. מצאו כי רמת IL-17 בדם ההיקפי של חולי AS עלתה כמעט פי שניים בהשוואה לבקרות בריאות. המחקר מציע כי אנטגוניסטים IL-17 עשויים להיות אופציה חדשה עבור חולי AS שאינם מגיבים היטב לאנטגוניסטים TNF-α33. מחקר קליני הראה כי משטר מינון של אנטגוניסטים IL-17 היה עדיף על פלצבו לשיפור סימנים ותסמינים רדיוגרפיים של דלקת מפרקים צירית בחולים34. תוצאות מחקר זה הראו כי רמות הפלזמה של TNF-α ו- IL-17 בקבוצת המודל היו גבוהות משמעותית מאלו בקבוצת הביקורת, ורמות הפלזמה של TNF-α ו- IL-17 ירדו באופן משמעותי לאחר טיפול Du-moxibustion.
טיפול דו-מוקסיבציה משתמש במיומנות בטכניקות התואמות של TCM כדי לשלב מרידיאנים, נקודות דיקור, צמחי מרפא סיניים ומוקסיבציה. חומרי הגלם של הטיפול בדו-מוקסיבציה כללו בעיקר מוקסה קטיפה, ג'ינג'ר ואבקת TCM. מנקודת המבט של TCM, מוקסה קטיפה, מוצר מעובד של mugwort, יש את הפונקציה של הפעלת בטחונות, להפיג קור, ולהקל על כאב. ג'ינג'ר ממלא תפקיד בהקלה על תסמינים חיצוניים ובהפגת הצטננות. מחקרים מודרניים מראים גם כי זנגביל יש תכונות אנטי דלקתיות משככי כאבים35. ניגוב העור במיץ ג'ינג'ר לפני הטיפול מסייע לפתוח את הנקבוביות ולקדם חדירה טרנסדרמלית36, בנוסף לסיוע לאבקת TCM להיצמד לעור. עמוד הג'ינג'ר הטרפזי מקובע היטב על הגב כדי לספק בסיס מוצק לחרוט המוקסה. לאחר שריפת חרוט מוקסה, ההשפעות של כוח אש, ג'ינג'ר ואבקת TCM פועלות יחד על מרידיאן דו. לאור הפתוגנזה של מחסור ביאנג במחלה זו, דו-מוקסיבציה פועלת ישירות באתר המחלה, מחממת את המרידיאנים, מפזרת קור, משלימה יאנג צ'י ותמצית, מקדמת את זרימת הדם ומאזנת יין ויאנג לטיפול בשורש המחלה.
בעת ביצוע Du-moxibustion, יש לקחת בחשבון מספר פרטים. ראשית, אתר הניתוח של Du-moxibustion קבוע, מנקודת Dazhui (GV14) לנקודת Yaoshu (GV2) (אנטומית מתהליך עמוד השדרההצווארי ה-7 ועד חוליית הזנב, כולל עמוד השדרה כולו), מה שתואם לאתר ההיארעות של AS (איור 4). שנית, הלחות והעובי של הג'ינג'ר חשובים. יש לסחוט את עודפי מיץ הג'ינג'ר לאחר עיבוד הג'ינג'ר לבוץ ג'ינג'ר, כך שלבוץ הג'ינג'ר אין תחושה גרגירית ועוביו מתאים להפוך לעמוד הג'ינג'ר הטרפזי. לחות גבוהה ולחות בבוץ הג'ינג'ר יכולות בקלות לעכב את חדירת אש המוקסיבציה ולהפחית את כמות גירוי המוקסיבציה. אם חומר הגלם של הג'ינג'ר יבש מדי והחלקיקים גדולים מדי, קשה ליצור את עמוד הג'ינג'ר הטרפז, מה שמוביל לחדירת חום מהירה וצריבת העור. שלישית, יש לקחת בחשבון את גודלו ומוצקותו של חרוט המוקסה. מדוכי מוקסה המשמשים למוקסיבציה בעכברים הם ~ 4 ס"מ אורך וקוטר 0.5 ס"מ וצריכים להיות הדוקים בזמן ההכנה. מבחן להידוק הוא כאשר החרוט אינו נפרם גם לאחר שנפל על משטח. אם חרוט המוקסה אינו קומפקטי מספיק, זה יוביל להפחתה בכמות הקטיפה מוקסה, זמן שריפה קצר יותר וירידה בכוח האש. רביעית, בעת הצתת חרוט המוקסה יש להדליק את הראש, האמצע והזנב של חרוט המוקסה בקטורת עדינה כדי לגרום לקונוס המוקסה להישרף לאט כדי להשיג את ההשפעה המזינה של גאות ושפל. חמישית, מושק הוא מרכיב חשוב באבקה הרפואית של מוקסיבציה. ביום השני לאחר מוקסיבציה, אמורות להיות שלפוחיות צלולות כמו פנינים קטנות על דו מרידיאן.
מספר רב של מחקרים קליניים אישרו את היעילות הוודאית של Du-moxibustion בטיפול ב- AS 4,5,6. עם זאת, המחקר על מנגנון הפעולה שלה בניסויים בבעלי חיים מתקדם לאט. באמצעות מחקר וחדשנות, שנים של ניסיון בהפעלת Du-moxibustion הובילו אותנו לחקור את השימוש בו בניסויים בעכברים. מאמר זה מתאר בפירוט את נהלי הפעולה ואמצעי הזהירות של Du-moxibustion בטיפול ב- AS בעכברי ניסוי. בנוסף, נצפתה ההשפעה של מוקסיבציה על תיאום מוטורי ורמות הפלזמה של TNF-α ו- IL-17 בעכברי AS. מחקר זה סיפק את הבסיס הניסויי הבסיסי ביותר לחקר מנגנון Du-moxibustion בטיפול ב- AS. יש עדיין כמה מגבלות למחקר זה. לדוגמה, במחקרים עתידיים, נשים לב להערכה של פרמטרים שונים כגון פלצבו moxibustion, מינון, טווח, וזמן הטיפול כדי לקבל את תוכניות השילוב היעיל ביותר. במחקרים מאוחרים יותר, ניתן להשתמש בשיטות הדמיה כדי להעריך את תוצאות הטיפול בצורה אינטואיטיבית יותר.
סיכוי היישום של טיפול Du-moxibustion מבטיח. דו מרידיאן, המכונה כלי המושל, ממלא תפקיד מכריע בוויסות זרימת הצ'י והדם בכל הגוף. מוקסיבסטיון, טיפול סיני מסורתי, כולל שריפת מוגוורט על נקודות דיקור ספציפיות כדי לעורר את המרידיאנים ולקדם את מנגנון הריפוי העצמי של הגוף. בהשוואה לדיקור סיני, Du-moxibustion הוא שילוב של טכניקות שונות הפועלות על פני הגוף, אשר יש את המאפיינים של נוחות טווח חזק ורחב של פעולה. יתר על כן, טיפול Du-moxibustion מתמקד באזור הגב ועמוד השדרה, ומתמקד במסלול של Du meridian. זה יכול לשפר את המערכת החיסונית של הגוף, לשפר את זרימת הדם, ולהקל על מצבים פיזיים ונפשיים שונים. הטיפול הוכיח את יעילותו בטיפול במחלות כגון הפרעות שרירים ושלד, מצבים נוירולוגיים, הפרעות גינקולוגיות ובעיות נפשיות. עם התקדמות המחקר והטכנולוגיה, היישום של טיפול Du-moxibustion צפוי להתרחב עוד יותר. מחקרים עתידיים עשויים לחקור את הפוטנציאל שלה בתחומים כגון ניהול כאב, הפחתת מתח, הפרעות עיכול ובעיות נשימה. השילוב של ידע מסורתי והבנה מדעית מודרנית יכול להוביל לשילוב טוב יותר של טיפול Du-moxibustion בפרקטיקות הבריאות המקובלות. לסיכום, טיפול דו-מוקסיבציה טומן בחובו הבטחה גדולה ביישומו ובהשתלבותו בתחומי בריאות שונים. מחקרים נוספים, ניסויים קליניים ושיתוף פעולה בין מטפלים ברפואה סינית מסורתית לבין אנשי מקצוע בתחום הבריאות המודרנית חיוניים כדי לממש את מלוא הפוטנציאל שלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי התוכנית הכללית של הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '82174491) ופרויקט הירושה של בית הספר האקדמי לרפואה סינית מסורתית Qilu (No. לו וייהאן [2020]132). תודה למרכז חיות המעבדה של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית שסיפק לנו תנאים ניסיוניים.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
- Sieper, J., Poddubnyy, D.
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, İ, Öztürk, M. A., Akkoç, N.
- Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
- Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
- Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
- Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
- Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
- Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
- Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
- Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
- Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
- Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
- Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
- Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
- Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
- Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
- Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
- Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
- Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
- Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
- Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
- Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
- Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
- Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
- Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
- Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
- Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
- Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
- Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
- Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
- van der, H. D., et al. COAST-V study group. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
- Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
- Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).
