Summary

在体外分化的小鼠胚胎干细胞(MES)使用悬滴法

Published: July 23, 2008
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Summary

本视频演示了如何在小鼠胚胎干细胞体外分化胚体采用悬滴法进行。

Abstract

干细胞具有显着的潜力发展成许多不同的细胞类型。当一个干细胞分裂时,每个新细胞的潜力仍然是一个干细胞,或成为另一个类型的细胞与一个更专业的功能,这是有前途的科学顶尖科学家研究细胞疗法来治疗疾病的可能性。当没有暂停antidif​​ferentiation因素文化时,胚胎干细胞自发分化和形成立体的多细胞聚集。这些细胞聚集被称为胚体(EB)。悬滴文化是一种广泛使用的EB形成诱导方法。悬滴的圆形底部,使胚胎干细胞,它可以提供一个良好的环境,形成EBS mES细胞的聚集。在悬滴aggregatied的ES细胞的数量是可以控制的不同细胞的数量在最初的细胞悬液,将挂在培养皿的盖子下降。使用这种方法,我们可以再现的形式从同质分化的ES细胞的预定人数。

Protocol

涂胶T75烧瓶中,在37℃,5%的CO 2组织培养箱培养过夜之一的前一天使用0.1%的明胶溶液和孵化板。 取出孵化mES细​​胞,吸出培养基,用PBS冲洗胚胎干细胞培养,加入0.05%胰蛋白酶溶液大衣的菜(2 ml/100mm板)底部。 孵育在37 ° C约1分钟,待细胞塌板。 轻轻磨碎(吸管向上和向下)的4至6倍,以分散与巴斯德吸管插入的ES细胞的胰酶消化细胞,。分散的ES细胞转移到15毫升锥?…

Discussion

悬滴法的缺点如下:不超过50ul,由于维持表面张力的盖子上悬滴一滴的液体的体积是有限的,它不可能改变中期挂滴。形成胚滴直接用显微镜观察也很难在种植。更进一步,悬滴法是由两个步骤组成,因此,悬滴法的一系列步骤可能会很麻烦。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM Reagent Gibco 11965-092  
Fetal Bovine Serum(FBS) Reagent Hyclone SH30070.03  
L-Glutamine Reagent Gibco 25030  
Non-Essential Amino Acids Reagent Gibco 11140-050  
Penicllin / Streptomycin Reagent Gibco 15140-122  
Sodium Pyruvate Reagent Gibco 11360-70  
β-mercaptoethanol Reagent Chemicon ES-007-E  
leukemia inhibitory factor(LIF) Reagent Chemicon LIF2005  
96-well ultralow attachment plate Tool Corning 3474  

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Cite This Article
Wang, X., Yang, P. In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method. J. Vis. Exp. (17), e825, doi:10.3791/825 (2008).

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