В пробирке Дифференциация Мышь эмбриональных стволовых (MES) ячеек с использованием висячей капли Метод

Summary

В этом видеоролике показано, как проводить в пробирке дифференциации мышиных эмбриональных стволовых клеток эмбриоидных органов использовании висячей капли метод.

Abstract

Стволовые клетки обладают замечательными возможностями для развития в различные типы клеток. Когда стволовых клетка делится, каждая новая клетка имеет потенциал, чтобы либо остаются стволовых клеток или стать другой тип клетки с более специализированные функции, этот перспективный науки является ведущим ученым исследовать возможности клеточной терапии для лечения болезней. Когда культура во взвешенном состоянии без antidifferentiation факторов, эмбриональные стволовые клетки спонтанно дифференцироваться и образуют трехмерные многоклеточные агрегаты. Эти клеточные агрегаты называются эмбриоидные тела (ИС). Висячей капли культура широко используется EB формирование индукционным методом. Округлой нижней висячей капли позволяет агрегации ЭС клеток, которые могут обеспечить МЧС клетки хорошую среду для формирования ЭТ. Число ЭС клеток aggregatied в висячей капли можно управлять, варьируя количество клеток в исходной суспензии ячейки, чтобы висеть в виде капли на крышке чашки Петри. С помощью этого метода мы можем воспроизводимо образуют однородные ЭТ из определенного количества ЭС клеток.

Protocol

Желировать T75 колбу использованием 0,1% раствора желатина и инкубировать пластины в 37 ° С, 5% СО 2 инкубатора культуры тканей ночь один день раньше. Выньте МЧС клетки инкубировать, аспирация среда, полоскание культуры ЭСК с PBS, добавить 0,05% раствора трипсина, чтобы покрыть дно тарелки (2 ml/1…

Discussion

Недостатками метода висячей капли в следующем: жидкий объем капли ограничивается менее 50ul из-за поддержания висит капель на крышку, поверхностного натяжения, и это невозможно изменить среду для подвешивания капель. Наблюдение формирования ЭТ в виде капель непосредственно с микроскопии также оч?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM	Reagent	Gibco	11965-092
Fetal Bovine Serum(FBS)	Reagent	Hyclone	SH30070.03
L-Glutamine	Reagent	Gibco	25030
Non-Essential Amino Acids	Reagent	Gibco	11140-050
Penicllin / Streptomycin	Reagent	Gibco	15140-122
Sodium Pyruvate	Reagent	Gibco	11360-70
β-mercaptoethanol	Reagent	Chemicon	ES-007-E
leukemia inhibitory factor(LIF)	Reagent	Chemicon	LIF2005
96-well ultralow attachment plate	Tool	Corning	3474