La differenziazione in vitro di staminali embrionali di topo (MES) Cellule con il metodo goccia

Summary

Questo video mostra come condurre differenziamento in vitro di cellule staminali embrionali di topo di corpi embrionali usando il metodo goccia pendente.

Abstract

Le cellule staminali hanno la potenzialità notevoli di svilupparsi in molti tipi cellulari diversi. Quando una cellula staminale si divide, ogni nuova cellula ha il potenziale per rimanere sia una cellula staminale o diventare un altro tipo di cellula con una funzione più specializzati, questo promettente della scienza sta portando gli scienziati a studiare la possibilità di terapie basate sulle cellule per curare le malattie. Quando la cultura in sospensione senza fattori antidifferenziazione, le cellule staminali embrionali differenziare spontaneamente e formare aggregati pluricellulari tridimensionale. Questi aggregati di cellule si chiamano corpi embrionali (EB). Hanging cultura goccia è un metodo ampiamente utilizzato formazione EB induzione. Il fondo arrotondato di goccia consente l'aggregazione delle cellule staminali in grado di fornire cellule MES un buon ambiente per la formazione di EBS. Il numero di cellule ES aggregatied in una goccia può essere controllata variando il numero di cellule nella sospensione cellulare prima di essere appeso come una goccia dal coperchio della piastra Petri. Con questo metodo possiamo riproducibile forma omogenea EB da un numero predeterminato di cellule ES.

Protocol

Gelatinizzare T75 beuta con una soluzione di 0,1% di gelatina e la piastra di incubare a 37 ° C, 5% CO 2 colture di tessuti incubatore durante la notte un giorno prima. Estrarre le cellule MES da incubare, aspirare il terreno, lavare la coltura delle cellule ES con PBS, aggiungere la soluzione tripsina 0,05% per ricoprire il fondo del piatto (2 piastra ml/100mm). Incubare a 37 ° C per circa 1 minuti, fino a quando le cellule sono muta fuori dal piatto. Delicatamente triturare (pipetta su…

Discussion

Gli svantaggi del metodo della goccia pendente sono i seguenti: il volume di una goccia di liquido è limitata a meno di 50ul dovuto al mantenimento di gocce sul coperchio dalla tensione superficiale, ed è impossibile cambiare il supporto per appendere gocce. Osservazione di formare EBS in gocce direttamente con la microscopia è anche molto difficile durante la coltivazione. Più ulteriormente più, il metodo goccia consiste di due fasi, quindi, una serie di passo del metodo goccia può essere fastidioso.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM	Reagent	Gibco	11965-092
Fetal Bovine Serum(FBS)	Reagent	Hyclone	SH30070.03
L-Glutamine	Reagent	Gibco	25030
Non-Essential Amino Acids	Reagent	Gibco	11140-050
Penicllin / Streptomycin	Reagent	Gibco	15140-122
Sodium Pyruvate	Reagent	Gibco	11360-70
β-mercaptoethanol	Reagent	Chemicon	ES-007-E
leukemia inhibitory factor(LIF)	Reagent	Chemicon	LIF2005
96-well ultralow attachment plate	Tool	Corning	3474