Inbäddning av vuxna Drosophila-huvuden i paraffin: Förbereda vävnad för histologi

- För att immobilisera flugor för paraffininbäddning, tryck försiktigt bedövad Drosophila genom gapet på en flugkrage så att deras huvuden är jämnt placerade ovanpå enheten medan de fortfarande är fästa vid resten av kroppen.

För att förbereda provet för paraffininfiltration, dehydrera vävnaden genom att överföra kragen genom graderade koncentrationer av etanol. Överför sedan kragen till metylbensoat, ett organiskt lösningsmedel.

Placera sedan snabbt kragen i en form och häll smält paraffin för att täcka den helt. När paraffinet har härdat, ta bort blocket från formen och använd ett rakblad för att trimma överflödigt paraffin. Bryt av kragen och lämna raden med inbäddade huvuden i paraffinblocket. I exempelprotokollet kommer vi att se proceduren som demonstreras för analys av neurodegenerativa fenotyper.

- För att börja, använd först tång för att trä motivet flyger i nacken i kragen. Justera alla huvuden i samma riktning och se till att inga skador uppstår på huvudet eller ögonen. Inkludera ögonlösa sinusockulisflugor i slumpmässiga kända positioner så att flugornas ordning lätt kan identifieras i sektionerna. Dessutom, om flugstammen av intresse har ljusa eller vita ögon, gänga rödögda flugor med intervall längs remsan för att säkerställa att tillräckligt pigment finns för att färga bilden.

Registrera flugornas ordning tillsammans med kragens nummer om mer än en används. När en krage är klar, placera den i Carnoys lösning i 3,5 till 4 timmar. Utför sedan en serie etanol-, metylbensoat- och paraffintvättar för att förbereda flugvävnaden för inbäddning.

Häll försiktigt smält paraffin över kragen och undvik luftbubblor och låt det härda över natten.