Den här videon beskriver hur man bäddar in Drosophila-huvuden i paraffin med hjälp av kragemetoden, en teknik som förbereder flughuvuden för seriell sektionering. Paraffinsektioner används för histologiska undersökningar av hjärnans anatomi och för bedömning av neurodegeneration. Det presenterade protokollet visar hur flera flugor kan bearbetas i en förberedelse, vilket ökar tidseffektiviteten och minimerar experimentella artefakter.
Protocol
Detta protokoll är ett utdrag från Sunderhaus och Kretzschmar, Mass Histology för att kvantifiera neurodegeneration i Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Fixering av huvudet på krage och inbäddning i paraffin OBS: Alla steg i fixeringsprocessen bör göras i en rökhuv. Metylbensoat, även om det inte utgör en hälsorisk, har en mycket distinkt lukt, vilket kan vara överväld…
Representative Results
Figur 1: Paraffin seriella avsnitt. A) Med hjälp av kragemetoden kan experimentella flugor och kontrollflugor bearbetas som ett prov genom att gänga dem på en krage. Ögonlösa sinusockulisflugor sätts in för orientering (pilar). B) Schematiskt som visar flughuvudens orientering i kragen. C) I den här bilden är sektioner från olika flughuvuden orienterade…
Materials
Collar
Genesee Scientific
TS 48-100
We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding
Household store
The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish
Fisher Scientific Company
08-762-3
Ether
Fisher Scientific Company
E138-1
Ethanol
Decon Laboratories Inc.
2701
Choloroform
Fisher Scientific Company
C298-500
Glacial Acetic Acid
Fisher Scientific Company
A38-212
Methylbenzoate
Fisher Scientific Company
M205-500
Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax
Fisher Scientific Company
T565
Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath