Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour commencer, retirez la tête d’une mouche adulte anesthésiée. Couvrez la mouche décapitée d’une solution contenant de la solution saline tamponnée de phosphate, ou PBS, et de l’albumine de sérum bovin, ou BSA, pour éviter la dessiccation. Maintenez la mouche par le thorax avec des forceps, puis tirez l’abdomen avec une deuxième paire de forceps pour exposer l’intestin. Puisque la récolte, ou le sac de stockage de nourriture, sera attaché au thorax, tirez doucement l’intestin loin du thorax.
Une fois détaché, éloignez la culture de l’abdomen pour déplier l’intestin. Retirez l’extrémité postérieure de la mouche pour commencer à libérer l’intestin de la cavité abdominale. Continuez à tirer l’intestin pour retirer tout le tissu de l’abdomen. Une fois libéré, retirez l’avant-jambe, les tubules malpighiens, l’intestin postérieur et les ovaires pour ne laisser derrière eux que le midgut disséqué, le principal site de digestion à l’intérieur de la mouche.
Dans le protocole de l’exemple, nous disséquerons les midguts des mouches adultes jeunes et moins jeunes pour les analyser davantage par le biais du tri cellulaire activé par fluorescence, ou FACS.
- Avant de commencer la dissection, anesthésier un flacon de 40 mouches avec du dioxyde de carbone sur un lit de mouche standard. Ensuite, utilisez une lame de rasoir pour décapiter toutes les mouches et les transférer dans un plat de dissection recouvert de gel d’agarose. Versez suffisamment de PBS froid plus BSA dans le plat pour couvrir l’agarose. Les mouches flotteront.
Ensuite, pour chaque insecte, à son tour, prenez un abdomen volant avec une paire de forceps, et le thorax avec un autre. Séparez le thorax de l’abdomen. L’intestin sera visible, et la culture sera très probablement encore reliée au thorax. Prenez l’intestin et retirez-le du thorax. Puis, prenez la culture et tirez l’intestin légèrement antérieurement loin de l’abdomen pour le déplier.
Ensuite, utilisez l’un des forceps pour saisir l’extrémité postérieure de l’abdomen, et l’autre pour saisir le bord de la cuticule ouverte antérieurement. Tirez l’extrémité postérieure loin pour casser la cuticule, et continuer à tirer postérieurement très doucement, jusqu’à ce que l’intestin entier a été retiré de la cavité abdominale. Retirez le foregut, les tubes malpighiens, l’intestin postérieur, et les ovaires, laissant le midgut nu.
Pendant que les midguts sont isolés, utilisez une pipette pasteur en verre pour transférer périodiquement plusieurs des tissus intestinaux à la fois à un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre contenant du PBS froid plus BSA sur la glace.
