Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Başlamak için, başı uyuşturulma yetişkin bir sinekten çıkarın. Kafaları kesilmiş sineği Fosfat Tamponlu Salin veya PBS içeren bir çözelti ile örtün ve Bovine Serum Albumin veya BSA, kurutmayı önlemek için. Sineği torakstan forsepsle tutun ve sonra bağırsağı açığa çıkarmak için ikinci bir çift forseps ile karnı çekin.
Ayrıldıktan sonra, bağırsağı açmamak için mahsulü karından çekin. Bağırsağı karın boşluğundan serbest bırakmaya başlamak için sineğin arka ucunu çekin. Tüm dokuyu karından çıkarmak için bağırsağı çekmeye devam edin. Serbest bırakıldıktan sonra, sadece sinek içindeki birincil sindirim yeri olan parçalanmış midgut'u geride bırakmak için önseziyi, Malpighian tübüllerini, arkasını ve yumurtalıkları çıkarın.
Örnek protokolde, Floresan-Aktif Hücre Sıralama veya FACS aracılığıyla daha fazla analiz edilecek genç ve yaşlı yetişkin sineklerinden midgutları parçalara ayıracağız.
- Diseksiyona başlamadan önce, standart bir sinek yatağında karbondioksitli 40 sinekten oluşan bir şişeyi uyuşturun. Daha sonra tüm sineklerin kafasını kesmek ve agarose jel ile kaplanmış bir diseksiyon kabına aktarmak için bir jilet kullanın. Agarose'u örtmek için yemeğe yeterince soğuk PBS artı BSA dökün. Sinekler yüzer.
Sonra, her böcek için, sırayla, bir çift forseps ile bir sinek karnı ve başka bir toraks. Toraksı karından ayırın. Bağırsak görünür olacak ve mahsul büyük olasılıkla hala toraksa bağlı olacaktır.
Daha sonra, karnın arka ucunun tutun, diğeri ise ön açık kütikül kenarını kavramak için forsepslerden birini kullanın. Kütikülün kırılması için arka ucu çekin ve tüm bağırsak karın boşluğundan çekilene kadar arka ucu çok nazikçe çekmeye devam edin. Önseziyi, Malpighian tüplerini, hindgut'u ve yumurtalıkları çıkarın, çıplak midgut bırakın.
Midgutlar izole edildikçe, bağırsak dokularının birkaçını periyodik olarak buz üzerinde soğuk PBS artı BSA içeren 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarmak için bir cam Pasteur pipet kullanın.
