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상피 세포 Lysates에서 GST-태그가 돌연변 Rho 단백질을 (GST-RhoA (G17A))를 사용하여 활성 Rho-GEFs의 친화력 강수량
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

여기에 제시된 방법은 활성 GEFs에 대한 높은 친화력을 가진 돌연변이 RhoA GST 융합 단백질을 사용함으로써 교양 세포에서 RhoA 특정 GDP / GTP 교환 요인 (GEFs)의 활성화를 따르도록하는 분석에 대해 설명합니다. GEFs는 서양 모래 바닥과 densitometry에 의해 계량에 의해 감지 세포 lysates에서 시켰던됩니다.

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