Journal
/
/
Affinity Nedbør av Active Rho-GEFs Bruke en GST-merket Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) fra Epiteliale Cell lysates
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

, , , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Metoden som presenteres her beskriver en analyse for å følge aktivering av RhoA spesifikke BNP / GTP Utveksle Factors (GEFs) i dyrkede celler ved å gjøre bruk av en mutant RhoA GST fusion protein som har høy affinitet for aktivert GEFs. GEFs er fremskyndet fra celle lysates oppdaget ved Western blotting og kvantifisert ved densitometry.

Related Videos

Read Article