Journal
/
/
Affinity udfældning af aktivt Rho-GEFs Brug en GST-mærket Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) fra Epiteliale Cellelysaterne
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

, , , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Fremgangsmåden præsenteres her beskriver et assay til at følge aktivering af RhoA specifikke BNP / GTP Exchange faktorer (GEFs) i dyrkede celler ved anvendelse af en mutant RhoA GST-fusionsprotein, der har høj affinitet for aktiverede GEFs. GEFs udfældes fra cellelysater, detekteret ved Western blotting og kvantificeret ved densitometri.

Related Videos

Read Article