Journal
/
Biology
/
Affinity осадков активного Rho-GEFs Использование GST с метками Мутант Rho белка (GST-RhoA (G17A)) из эпителиальных клеточные лизаты
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Affinity осадков активного Rho-GEFs Использование GST с метками Мутант Rho белка (GST-RhoA (G17A)) из эпителиальных клеточные лизаты

DOI:
10.3791/3932-v

•

11:28 min

•

March 31, 2012

•

, , , ,
1Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , 2Department of Surgery,University of Toronto, 3Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Метод, представленные здесь описывается анализ следовать активации RhoA конкретных ВВП / GTP Факторы биржи (GEFs) в культуре клеток путем использования мутантов RhoA стоимость гибридного белка, который имеет высокое сродство к активированный GEFs. GEFs осаждаются из клеточных лизатов, обнаруженные западными блоттинга и количественно денситометрии.

Tags

Affinity PrecipitationRho-GEFsGST-tagged Mutant Rho ProteinCytoskeleton RegulationCellular ProcessesGTPasesGuanine-nucleotide Exchange FactorPathway-specific RegulationRegulatory NetworksActive Pool Of GEFsAffinity Precipitation AssayBurridge Lab

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Выделение лабильной Multi-белковые комплексы по В естественных условиях Контролируемые Сотовая сшивания и иммуно-магнитного аффинной хроматографии

Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC) Пробирной для белок-белковые взаимодействия в Лук ячеек с использованием генной пушки Helios

Синий Родные электрофореза в полиакриламидном геле (BN-PAGE) для анализа Multiprotein Комплексы из ячеистого Лизаты

Липидов везикул-опосредованной аффинной хроматографии с использованием магнитных Активированный сортировки клеток (LIMACS): новый метод для анализа Белково-липидные взаимодействия

Хроматографической очистки высокоактивной рибосомы дрожжей

Ортогональные очистки белков Ведущий: Малый Биспецифичные тегов Affinity

Идентификация белка взаимодействие партнеров, используя тандем аффинной очистки

Жидкая фаза Affinity Capture методом с использованием магнитных шариков по изучению белок-белковые взаимодействия: Полиовирус-нанотела Пример

Протокол для фагов и Affinity выделение с помощью рекомбинантного белка Приманки

Трансгенные грызунов Анализ на Количественная мужской половой клетки Частота мутантного

Read Article