Journal
/
/
Affinity осадков активного Rho-GEFs Использование GST с метками Мутант Rho белка (GST-RhoA (G17A)) из эпителиальных клеточные лизаты
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
DOI:

11:28 min

March 31, 2012

, , , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Метод, представленные здесь описывается анализ следовать активации RhoA конкретных ВВП / GTP Факторы биржи (GEFs) в культуре клеток путем использования мутантов RhoA стоимость гибридного белка, который имеет высокое сродство к активированный GEFs. GEFs осаждаются из клеточных лизатов, обнаруженные западными блоттинга и количественно денситометрии.

Related Videos

Read Article