Journal
/
Biology
/
Epitel Hücre lizatları bir GST-etiketli Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) Kullanarak Active Rho-gefs ve Affinity Yağış
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Epitel Hücre lizatları bir GST-etiketli Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) Kullanarak Active Rho-gefs ve Affinity Yağış

DOI:
10.3791/3932-v

•

11:28 min

•

March 31, 2012

•

, , , ,
1Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , 2Department of Surgery,University of Toronto, 3Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Burada anlatılan yöntem aktive gefs için yüksek afinitesi olan bir mutantı RhoA GST füzyon proteini yararlanarak kültürlenmiş hücrelerde RhoA spesifik GDP / GTP Değişim Faktörleri (gefs) aktivasyonu takip etmek için bir ölçüm açıklanmaktadır. GEFS Western blot ve dansitometreyi miktarı tespit hücre lizatları, çöktürülmesi ile elde edilir.

Tags

Affinity PrecipitationRho-GEFsGST-tagged Mutant Rho ProteinCytoskeleton RegulationCellular ProcessesGTPasesGuanine-nucleotide Exchange FactorPathway-specific RegulationRegulatory NetworksActive Pool Of GEFsAffinity Precipitation AssayBurridge Lab

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Dayanıksız Multi-protein Kompleksleri izolasyonu In vivo Kontrollü Hücresel Çapraz Bağlama ve immuno-manyetik Afinite Kromatografisi

Helios Gen Tabancası kullanarak Soğan Hücrelerde Protein-Protein Etkileşimi Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) Testi

Hücresel lizatları Multiprotein Kompleksleri Analizi Mavi Native Poliakrilamid Jel Elektroforez (BN-PAGE)

Manyetik Aktif Hücre Ayırma (LIMACS) kullanarak Lipid veziküllü aracılı Afinite Kromatografisi: Protein-lipit Etkileşim Analiz Roman Yöntemi

Yüksek Aktif Maya Ribozomlar Kromatografik Arıtma

Küçük Bispecific Affinity Tag Kolaylaştırılmış Ortogonal Protein Saflaştırma

Tandem Affinity Arıtma kullanarak Protein etkileşim Ortaklar belirlenmesi

Protein-Protein Etkileşimi Okumak Manyetik Boncuk Kullanarak Bir Sıvı Faz Affinity Yakalama Testi: Poliovirüs-Nanobody Örnek

Rekombinant Protein Yemler Kullanarak Phage Ekran ve Affinity seçimi için Protokol

Transgenik Kemirgen Deneyi sayısallaştırabilmek Erkek Germ Hücre Mutant Frekans

Read Article