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Chapters
- 00:05Title
- 01:37CRISPR/Cas System Overview
- 02:29Generation of Long Pre-crRNA Substrates via PCR
- 04:14Generation of Intermediate Pre-cdRNA Substrates via Annealing of DNA Oligonucleotides
- 06:10Generation of Short Cas RNA Substrates via Custom RNA Oligonucleotide Synthesis
- 06:41In vitro T7 RNA Polymerase Transcription
- 08:04Cas6 Endonuclease Assay
- 09:08Results: Representative Cas6 Endonuclease Assay
- 11:10Conclusion
CRISPR / Cas systèmes médiate immunité adaptative dans les bactéries et les archées. De nombreuses protéines sont proposées Cas d'agir comme endoribonucléases agissant sur les précurseurs crRNA de longueur variable. Ici, nous illustrons trois approches différentes pour générer des pré-crRNA substrats pour l'analyse biochimique de l'activité endonucléase de Cas.
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Substrate GenerationEndonucleasesCRISPR/Cas SystemsVirusesProkaryotic HostsBacterial EvolutionArchaeal LifeRestriction ModificationAbortive InfectionAdaptive Immune SystemsCRISPR SequencesCas GenesCas ProteinsSpacer ElementCRISPR ClusterPrecursor-crRNACas6 FamilyCrRNAsViral DNA UptakeCascade ComplexBase ComplementarityNuclease Cas3Invader DNA Destruction
