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CRISPR / CASシステムの酵素のための基質の生成
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Substrate Generation for Endonucleases of CRISPR/Cas Systems
DOI:

11:53 min

September 08, 2012

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:37CRISPR/Cas System Overview
  • 02:29Generation of Long Pre-crRNA Substrates via PCR
  • 04:14Generation of Intermediate Pre-cdRNA Substrates via Annealing of DNA Oligonucleotides
  • 06:10Generation of Short Cas RNA Substrates via Custom RNA Oligonucleotide Synthesis
  • 06:41In vitro T7 RNA Polymerase Transcription
  • 08:04Cas6 Endonuclease Assay
  • 09:08Results: Representative Cas6 Endonuclease Assay
  • 11:10Conclusion

Summary

Automatic Translation

CRISPR / CASシステムは、バクテリアや古細菌の適応免疫を媒介する。多くのCAタンパク質は様々な長さのcrRNA前駆体に作用するエンドリボヌクレアーゼとして機能するように提案されている。ここでは、CASのエンドヌクレアーゼ活性の生化学的解析のための事前crRNA基質を生成するために3つの異なるアプローチを示しています。

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