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siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

Screening siRNA identificar Ubiquitin e ubiquitina-como reguladores do sistema de caminhos biológicos em células de mamíferos cultivadas

DOI:
10.3791/51572-v

•

10:43 min

•

May 24, 2014

•

, , , ,
1MRC Protein Phosphorylation and Ubiquitylation Unit, College of Life Sciences,University of Dundee, 2Centre for Gene Regulation and Expression, College of Life Sciences,University of Dundee

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:22Characterizing Hypoxia-responsiveness to Develop the Assay
  • 04:18Primary Screen: First Day
  • 07:27Primary Screen: Subsequent Days
  • 08:27Sample Screen
  • 10:09Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Aqui, descrevemos uma metodologia para realizar uma siRNA alvo "ubiquitome" tela para identificar romance ubiquitina e reguladores de ubiquitina-like da resposta celular mediada por HIF1A à hipóxia. Isto pode ser adaptado para qualquer via biológica, onde uma leitura robusta de actividade repórter está disponível.

Tags

SiRNA ScreeningUbiquitinUbiquitin-like SystemBiological PathwaysMammalian CellsPost-translational ModificationUbiquitomeHIF1AHypoxia ResponseTranscription-based Luciferase ReporterAssay DevelopmentPrimary ScreeningSecondary ScreeningTertiary/deconvolution ScreeningTargeted SiRNA LibraryOff-target Effects

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