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Thermostabilization, Espressione, purificazione e cristallizzazione della umana trasportatore della serotonina associato a<em> S</em> -citalopram
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Chapters
- 00:05Title
- 00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
- 02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
- 04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
- 05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
- 07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
- 08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
- 10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
- 11:25Conclusion
Questo manoscritto descrive come schermo per thermostabilizing mutazioni, purificare il trasportatore della serotonina umano, generare anticorpi ad alta affinità, e cristallizzare il complesso trasportatore della serotonina-anticorpo legato alla antidepressivo della droga S -citalopram. Questo protocollo può essere adattato allo studio di altri trasportatori di membrana impegnativi, recettori e canali.
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