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Recombineering and Gene Targeting
  • 00:00Overview
  • 01:05Principles of Homologous Recombination
  • 03:20Recombineering a Gene Targeting Vector
  • 05:54Applications
  • 08:28Summary

重组和基因打靶

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Overview

在现代生物学中最广泛使用的工具之一是分子克隆与限制性内切酶,其中创建兼容两端之间允许他们连在一起的 DNA 片段。然而,这种技术有一定限制大型或复杂的 DNA 结构代其适用性的限制。较新的技术,解决一些这些不足之处是重组,修改 DNA 同源重组 (HR),基于绵延的相似或相同序列的不同 DNA 分子之间的交流。基因打靶,以优势的内源性 HR 改变生物体的基因组在特定的基因座,与基于人力资源的克隆技术已大大提高的速度和效果的高通量基因工程。

在这个视频中,我们介绍了人力资源,以及执行重组工程实验,包括重组主管生物和基因组库如细菌人工染色体 (BAC) 所需的基本组件。我们然后走过一种协议,使用重组来生成一个基因打靶的向量,最终可以染胚胎干细胞生成的转基因动物。最后,将提出几个突出的实用程序和各种各样的重组工程技术的应用。

Procedure

克隆,同源重组或重组工程,极大地改善进行高通量基因工程研究人员的能力。经典的分子克隆需要消化的向量和插入具有相同的限制酶,来生成兼容两端有”重组”,但尤其是当试图孤立地区从较长的序列,如一段基因组 DNA,有并非总是将削减周边地区的利益,并不在该区域内或其它地方在序列中的唯一的限制性内切酶。避免出现这些限制网站的需要,通过重组提供更为高效和具有成本效?…

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Recombineering and Gene Targeting. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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