A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
Recombineering and Gene Targeting
  • 00:00Overview
  • 01:05Principles of Homologous Recombination
  • 03:20Recombineering a Gene Targeting Vector
  • 05:54Applications
  • 08:28Summary

רקומבינרינג ומיקוד גנים

English

Share

Overview

אחד הכלים הנפוצים ביותר בביולוגיה המודרנית הוא שיבוט מולקולרי עם אנזימי הגבלה, היוצרים קצוות תואמים בין שברי DNA המאפשרים לחבר אותם יחד. עם זאת, טכניקה זו כוללת הגבלות מסוימות המגבילות את תחולתה ליצירת מבנה DNA גדול או מורכב. טכניקה חדשה יותר המטפלת בחלק מהחסרונות הללו היא recombineering, אשר משנה את ה- DNA באמצעות רקומבינציה הומולוגית (HR), חילופי בין מולקולות DNA שונות המבוססות על מתיחות של רצפים דומים או זהים. יחד עם פילוח גנים, אשר מנצל את משאבי האנוש האנדוגניים כדי לשנות את הגנום של אורגניזם ב loci ספציפי, טכניקות שיבוט מבוססות משאבי אנוש שיפרו מאוד את המהירות והיעילות של הנדסה גנטית בתפוקה גבוהה.

בסרטון זה, אנו מציגים את העקרונות של משאבי אנוש, כמו גם את המרכיבים הבסיסיים הנדרשים לביצוע ניסוי רקומבינרינג, כולל אורגניזמים מוסמכים רקומבינציה וספריות גנומיות כגון כרומוזומים מלאכותיים חיידקיים (BAC). לאחר מכן אנו עוברים דרך פרוטוקול המשתמש רקומבינרינג כדי ליצור וקטור פילוח גנים כי בסופו של דבר יכול להיות מועבר לתאי גזע עובריים כדי ליצור חיה מהונדסת. לבסוף, יוצגו מספר יישומים המדגישים את השירות ואת מגוון טכניקות recombineering.

Procedure

שיבוט על ידי רקומבינציה הומולוגית, או רקומבינרינג מחדש, שיפר מאוד את יכולתם של החוקרים לבצע הנדסה גנטית בעלת תפוקה גבוהה. שיבוט מולקולרי קלאסי דורש עיכול של וקטורים ותוספות עם אותם אנזימי הגבלה כדי ליצור קצוות תואמים ל”רקומבינציה “, אך במיוחד כאשר מנסים לבודד אזור מרצף ארוך יותר, כגון מתיחה …

Disclosures

No conflicts of interest declared.

Transcript

Tags

Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Recombineering and Gene Targeting. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

Related Videos