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Recombineering and Gene Targeting
  • 00:00Overview
  • 01:05Principles of Homologous Recombination
  • 03:20Recombineering a Gene Targeting Vector
  • 05:54Applications
  • 08:28Summary

Recombinación y selección de genes

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Overview

Una de las herramientas más utilizadas en la biología moderna es molecular clonación con enzimas de restricción, que crear extremos compatibles entre fragmentos de ADN que puedan ser Unidas. Sin embargo, esta técnica tiene ciertas restricciones que limitan su aplicabilidad para la generación de construcción de ADN grande o complejo. Una técnica más nueva que se ocupa de algunas de estas deficiencias es recombineering, que modifica el ADN mediante recombinación homóloga (HR), el intercambio entre diferentes moléculas de ADN basado en tramos de secuencias idénticas o similares. Junto con gene targeting, que aprovecha recursos humanos endógenos para alterar el genoma de un organismo en un locus específico, basado en recursos humanos técnicas de clonación han mejorado notablemente la velocidad y la eficacia de la ingeniería genética de alto rendimiento.

En este video, presentamos los principios de recursos humanos, así como los componentes básicos necesarios para realizar un experimento recombineering, incluyendo organismos competente recombinación y las bibliotecas genómicas como cromosomas artificiales bacterianos (BAC). Luego caminamos a través de un protocolo que utiliza recombineering para generar un vector gene targeting que en última instancia ser transfected en las células madre embrionarias para generar un animal transgénico. Por último, se presentarán varias aplicaciones que ponen de relieve la utilidad y la variedad de técnicas recombineering.

Procedure

Clonación por recombinación homóloga o recombineering, ha mejorado enormemente la capacidad de los investigadores para llevar a cabo ingeniería de genética de alto rendimiento. Clonación molecular clásica requiere digestión de vectores y se inserta con las mismas enzimas de restricción para generar extremos compatibles para “recombinación”, pero especialmente cuando se trata de aislar una región de una secuencia más larga, como un estiramiento de la DNA genomic, no siempre hay enzimas de restricción…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Recombineering and Gene Targeting. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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