Uma das ferramentas mais utilizadas na biologia moderna é a clonagem molecular com enzimas de restrição, que criam extremidades compatíveis entre fragmentos de DNA que permitem que eles se unam. No entanto, essa técnica tem certas restrições que limitam sua aplicabilidade para uma geração de construção de DNA grande ou complexa. Uma técnica mais nova que aborda algumas dessas deficiências é a recombineamento, que modifica o DNA usando recombinação homologous (HR), a troca entre diferentes moléculas de DNA baseadas em trechos de sequências semelhantes ou idênticas. Juntamente com o direcionamento genético, que aproveita o RH endógeno para alterar o genoma de um organismo em um loci específico, técnicas de clonagem baseadas em RH melhoraram muito a velocidade e a eficácia da engenharia genética de alto rendimento.

Neste vídeo, introduzimos os princípios do RH, bem como os componentes básicos necessários para realizar um experimento de recombinamento, incluindo organismos competentes por recombinação e bibliotecas genômicas, como cromossomos artificiais bacterianos (BAC). Em seguida, passamos por um protocolo que usa recombineer para gerar um vetor de alvo genético que pode, em última análise, ser transfeinado em células-tronco embrionárias para gerar um animal transgênico. Por fim, serão apresentadas diversas aplicações que destacam a utilidade e a variedade de técnicas de recombineamento.