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Recombineering and Gene Targeting
  • 00:00Overview
  • 01:05Principles of Homologous Recombination
  • 03:20Recombineering a Gene Targeting Vector
  • 05:54Applications
  • 08:28Summary

ジーンと遺伝子ターゲティング

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Overview

現代生物学で最も広く使用されるツールの 1 つは分子を一緒に結合することができる DNA のフラグメント間の互換性のある端を作成する制限酵素クローニングです。ただし、この手法には、大規模または複雑な DNA 構造生成のための適用を制限する特定の制限があります。これらの欠点のいくつかに対処する新しい手法がジーン、DNA 相同組換え (HR)、類似または同一のシーケンスの伸張に基づく別の DNA 分子間交換を使用してを変更します。HR ベースのクローン技術は遺伝子ターゲティング、特定遺伝子有機体のゲノムを変更する内因性の HR を活用すると共に、速度と高スループット遺伝子工学の有効性大幅改善しています。

このビデオではジーン実験、組換え有能な生物や細菌の人工的な染色体 (BAC) などゲノム ライブラリなどを実行するために必要な基本的なコンポーネントと同様に、HR の原則を紹介します。その後、ジーンを使用して最終的に遺伝子組換え動物を生成する胚性幹細胞にトランスフェクションすることができる標的遺伝子のベクターを生成するプロトコルを通して歩き。最後に、ユーティリティとさまざまなジーンの技術を強調するいくつかのアプリケーションが表示されます。

Procedure

相同組換え、ジーン、クローニングとハイスループット遺伝子工学を実施する研究者の能力が大幅に向上します。古典の特に長い方のシーケンス、genomic DNA のストレッチなどから地域を特定する場合は常に一意に興味と地域内ではなく、シーケンスのどこかの地域の周りカット、制限酵素がクローニング ベクトルの消化を必要し「組み換え」互換性のある端を生成する同じ制限の酵素…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Recombineering and Gene Targeting. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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