Un des outils plus utilisés en biologie moderne est moléculaire clonage avec des enzymes de restriction, qui créent des extrémités compatibles entre les fragments d’ADN qui leur permettent d’être réunies. Cependant, cette technique a certaines restrictions qui limitent son applicabilité pour génération de construction ADN importante ou complexe. Une technique plus récente qui aborde certaines de ces lacunes est recombineering, qui modifie l’ADN à l’aide de recombinaison homologue (HR), l’échange entre les différentes molécules d’ADN basé sur les étirements des séquences similaires ou identiques. Ainsi que du gène cible, qui tire parti des RH endogène de modifier le génome d’un organisme à un locus spécifiques, des techniques de clonage axée sur les ressources humaines ont grandement amélioré la rapidité et l’efficacité du génie génétique haut débit.

Dans cette vidéo, nous présentons les principes des RH, ainsi que les éléments de base nécessaires pour réaliser une expérience de recombineering, y compris les organismes compétents recombinaison et génomiques tels que les chromosomes artificiels bactériens (BAC). Nous traversons ensuite un protocole qui utilise recombineering pour générer un vecteur de ciblage de gènes qui peut finalement être transfecté dans des cellules souches embryonnaires pour générer un animal transgénique. Enfin, nous présenterons plusieurs applications qui mettent en évidence l’utilité et la variété des techniques de recombineering.