Uno degli strumenti più utilizzati nella biologia moderna è la clonazione molecolare con enzimi di restrizione, che creano estremità compatibili tra frammenti di DNA che consentono loro di essere uniti tra loro. Tuttavia, questa tecnica ha alcune restrizioni che limitano la sua applicabilità per la generazione di costrutti di DNA grandi o complessi. Una tecnica più recente che affronta alcune di queste carenze è la ricombinazione, che modifica il DNA utilizzando la ricombinazione omologa (HR), lo scambio tra diverse molecole di DNA basate su tratti di sequenze simili o identiche. Insieme al targeting genico, che sfrutta l’HR endogeno per alterare il genoma di un organismo in un loci specifico, le tecniche di clonazione basate sulle RISORSE umane hanno notevolmente migliorato la velocità e l’efficacia dell’ingegneria genetica ad alto rendimento.

In questo video, introduciamo i principi dell’HR, nonché i componenti di base necessari per eseguire un esperimento di ricombinazione, inclusi organismi competenti per la ricombinazione e librerie genomiche come i cromosomi artificiali batterici (BAC). Quindi camminiamo attraverso un protocollo che utilizza la ricombinazione per generare un vettore di targeting genetico che può infine essere trasfettato in cellule staminali embrionali per generare un animale transgenico. Infine, verranno presentate diverse applicazioni che evidenziano l’utilità e la varietà delle tecniche di ricombinazione.