A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
抗肿瘤药物对抗癌抗体疗效的潜力: 用组合指数方程检测抗体-药物协同作用
Chapters
Summary January 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
该方案介绍了如何利用周药和塔拉莱的组合指数方程来评价临床前模型中抗癌抗体与抗肿瘤药物之间的协同作用。
Transcript
免疫疗法与化疗相结合是开发癌症有效疗法的创新方法。主要目标是实现协同，治疗效果，剂量和毒性减少，并尽量减少或延迟诱导耐药性。然而，出于实际和伦理原因，无法确定患者的协同能力。因此，在临床试验中直接结合之前，应进行体外和/或动物结合研究，以获得临床研究的理由。一个简单的强健方法，以药物之间的协同作用量化是基于由S shouan Talale开发的组合指数方程，如本视频所示。利用这种方法及其计算机化模拟，我们在此证明了单克隆抗体8B6之间的协同作用，该协同性是O-乙酰-GD2刚利赛德神经母细胞瘤抗原和化疗药物托普托特在神经母细胞瘤细胞细胞上特有的。简言之，在确定人类IMO中每种化合物的有效剂量50值后，用两种化合物的公平比率对这些细胞进行插管，并使用自动计算机模拟计算组合指数值。我们接下来在Vivvo，在一个IMO，5肿瘤异种模型中确认了这些结果。我们在T75烧瓶中生长了 IMR-5 细胞，在显微镜下观察它们，以检查细胞汇合。从烧瓶中洗出细胞介质，用5 mL的PBS清洗。添加 3 mL 的 0.05%EDTA/PBS 溶液。将烧瓶返回孵化器 3 分钟。在显微镜下检查细胞培养，了解细胞分离。将10 mL的完整细胞介质加入烧瓶中，并将细胞悬浮液转移到无菌的15 mL锥形管中。使用血细胞计在300克下离心5分钟。取出并丢弃上一液。在"完全生长介质"中重新悬浮细胞。调整介质体积，获得10万细胞/mL.种子84孔的最终浓度，96孔培养板，每个孔有1万个细胞，即100微升细胞悬浮液。在细胞培养箱中孵育细胞18小时.在500微升完全生长介质中培养单克隆抗体，获得单克隆抗体浓度240微克/mL的抗体工作溶液。在500微升完全生长介质中稀释药物，获得最终浓度为120纳米摩尔的药物工作溶液。执行协议中所示的 5、双倍连续错觉。稀释同样的方式药物加上单克隆性一体阳极性溶液。为了最终浓度，在相应的井中转移50微升每个药物溶液，如本实验布局所示。在培养箱中孵育细胞72小时。在每个井中加入10微升的MTT试剂溶液。在37摄氏度下孵育4小时。使用多通道移液器将 100 微升的 lycine 溶液添加到每井中，然后通过移液彻底混合。在37摄氏度下在加湿室中孵育4小时。使用分光光度计将吸收器以 570 和 620 纳米的速度进行除流。按如下计算细胞生存能力。使用以下等式计算影响分数值。运行仿真软件，单击新的实验按钮以获取主窗口。键入实验的名称。单击新的单一药物。键入名称。键入缩写。键入药物浓度单位。输入数据 1 剂量和 FA 值。按 Enter.重复此步骤，直到输入所有数据点。单击"完成"，按照相同的步骤进入单克隆抗体数据点。单击新药组合.选择药物和单克隆抗体。选择"恒定比率".单击"确定"。键入名称。键入缩写。类型药物单克隆抗体比。输入数据 1 剂量。按 Enter.程序将自动计算单克隆抗体 8B6 和组合的剂量。输入数据 1 FA 值。按 Enter.重复此步骤，直到输入所有数据点。单击"完成"，然后单击"生成报告"，选择药物和单克隆抗体，然后单击"确定"。选择组合，然后单击"确定"。选择标题、CI 表和摘要表，然后单击"确定"。键入文件名和分析，然后单击"保存"以生成报告。报表会自动在默认 Web 浏览器中打开。报告包含一个汇总表部分，包括标题、日期、最终名称、说明注释、m、Dm 和 r 参数、用作单一疗法或组合的代理的有效剂量 50，以及有效剂量 50、75、90 和 95.组合指数值小于 1 的组合指数值的组合指数表表示协同。值等于 1 表示附加性。值大于 1 表示对抗。在使用前将小瓶淹没在4摄氏度的冰箱中的冰中，将地下室膜基质解冻过夜。所有培养磨损，或与地下室膜公制接触的介质应预先磨光。收获文化 IMR5 。将电池转移到15 mL锥形管中，以300克离心5分钟。丢弃上一杯。用 15 mL 冰冷 PBS 清洗细胞两次。在冰冷的PBS中，为每mL500万个细胞准备细胞悬浮液。将电池悬浮液转移到 1.5 mL 微管中。旋转地下室膜基质小瓶。加入1卷基底膜基质试剂，通过移液混合，获得每mL250万细胞的细胞悬浮液。剃光将进行注射的侧翼。混合细胞，小心地将细胞悬浮液绘制成装有21g针头的1 mL注射器。检查是否确保注射器中没有气泡。用防腐剂溶液对小鼠的接种区域进行消毒。轻轻挤压注射部位手指之间侧翼上的鼠标皮。将针头完全插入皮肤折叠中。不要将针头深入组织，以确保皮下注射。在皮下注射100微升的 IMR5 细胞悬浮液。旋转注射器以防止液体扩散并提取针头。监测小鼠的体重和肿瘤生长。用口径测量肿瘤的长度和宽度。使用此公式计算肿瘤体积。当肿瘤达到平均体积 50 至 60 mm 时开始治疗
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
