/
/
CRISPR-Cas9-baserade genomet Engineering att generera Jurkat Reporter modeller för HIV-1 infektion med valda Proviral Integration platser
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 00:42Choice of Targeted Locus, Guide RNA (gRNA), and Targeting Vector Design
- 03:08CRISPR-Cas9-based Targeting of Jurkat Cells
- 04:36Generation of Clonal Lines and Screening for Correct Targeting
- 07:50Screening of Single-cell Clones by Flow Cytometry and PCR
- 11:46Results: Screening and Analysis of Single-cell Clones for Correct Reporter Integration
- 13:16Conclusion
Vi presenterar ett genomet engineering arbetsflöde för generering av nya in vitro-modeller för HIV-1-infektion som recapitulate proviral integration på valda genomisk platser. Inriktning av HIV-derived reportrar underlättas av CRISPR-Cas9-medierad, platsspecifika genom manipulation. Detaljerade protokoll för encelliga klon generation, screening och rätt inriktning verifiering tillhandahålls.
